概要

Eletroporação de Micobactérias

Published: May 23, 2008
doi:

概要

Estratégias de micobactérias patogênicas continuam a ser mal compreendido. A taxa de crescimento lento da maioria das espécies, a natureza impenetrável do da parede celular, e os perigos de trabalhar com agentes patogénicos fazer micobactérias difíceis de estudar e são em grande parte responsáveis ​​por nossa má compreensão destes organismos. Neste vídeo iremos demonstrar a técnica da eletroporação, que envolve as células sujeitando a um impulso de alta breve elétrico para permitir a entrada de DNA. É o método mais utilizado para a introdução de DNA em células micobacterianas.

Abstract

Transformação de alta eficiência é uma limitação importante no estudo das micobactérias. O gênero Mycobacterium pode ser difícil de transformar, este é causada principalmente pela parede celular de espessura e cera, mas é agravado pelo fato de que a maioria das técnicas moleculares têm sido desenvolvidos para espécies distantemente relacionadas, tais como Escherichia coli e Bacillus subtilis. Apesar desses obstáculos, plasmídeos micobactérias foram identificadas e transformação DNA de muitas espécies de micobactérias já foram descritos. O método de maior sucesso para a introdução de DNA em micobactérias é eletroporação. Parâmetros que contribuem para a transformação bem-sucedida, que incluem a espécie / variedade, a natureza do DNA de transformação, o marcador selecionável utilizado, o meio de crescimento, e as condições para o pulso eletroporação. Métodos otimizados para a transformação de ambos lenta e produtor-rápida são detalhados aqui. Eficiência de transformação para diferentes espécies de micobactérias e com vários marcadores selecionáveis ​​são relatados.

開示

The authors have nothing to disclose.

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記事を引用
Goude, R., Parish, T. Electroporation of Mycobacteria. J. Vis. Exp. (15), e761, doi:10.3791/761 (2008).

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