このプロトコルは、中央角膜切開と前房への長いトンネルを使用したラットの皮内房内注射の技術を説明しています。この注入方法により、不注意による組織損傷を誘発するリスクが最小限に抑えられ、精度と再現性が向上します。
皮内注射は、眼科における標準的な投与ルーチンです。げっ歯類への皮内注射の研究への適用は、小さな房水量、水晶体の湾曲、水晶体の厚さなど、眼の寸法と解剖学的構造に制限があるため、困難です。前房内注射中の潜在的な損傷は、悪影響と実験のばらつきをもたらします。このプロトコルは、ラットでの皮内注射の手順を説明しており、精度と再現性を可能にします。
実験モデルとしてSprague-Dawleyラットを使用しました。ラットの水晶体の位置は前房に突き出ているため、ヒトのように周辺から注射することは好ましくありません。したがって、31ゲージの0.8mmスティレットブレードを使用して角膜中央領域に切開を作成し、前房へのセルフシールトンネルを形成します。フラットに近い角度での切開は、長いトンネルを作り出すことを可能にし、これにより房水の損失と前房の浅さが最小限に抑えられます。34ゲージのナノニードルをトンネルに挿入して注入します。これにより、摩擦抵抗を最小限に抑えた貫通が可能になり、レンズへの接触を回避できます。トリパンブルーの注入により、スリット顕微鏡による前房内の色素の存在を可視化し、漏れを排除することができます。角膜内皮層へのバイオアベイラビリティは、注射後に角膜内皮細胞の核を染色したヘキスト色素の注射によって実証されます。
結論として、このプロトコルは、ラットでの正確な皮内注射の手順を実装します。この手順は、実験ラットモデルにおけるさまざまな薬物や化合物の皮内導入に使用でき、眼科研究の効率と再現性を向上させます。
局所投与によって眼の表面に送達される化合物のバイオアベイラビリティは非常に限られており、通常は<5%1です。.点眼薬で投与される化合物は、主にドレナージ、誘発性流涙、涙液代謝回転、および結膜吸収によって排除されます。さらに、眼表面を通る化合物の透過は、角膜結膜バリア1,2,3によって高度に制限されています。角膜は、最も外側の上皮、中間間質、および最も内側の内皮の3つの主要な層で構成されています。表在性角膜上皮は、強力なタイトジャンクションによって相互接続されており、物質透過性に対する主な障壁である高い傍細胞抵抗性を生み出します。複数の上皮層は、角膜上皮の細胞間空間を通る親水性分子と高分子の透過をさらに制限します。上皮の後継として、間質はコラーゲン繊維で構成され、水性の細孔を含んでいます。角膜上皮とは対照的に、間質は親水性薬物の移動を可能にします。しかし、親油性化合物1,2,3に対しては非常に不透過性です。角膜上皮と間質層は一緒になって、薬物の吸収を制限する主要な組織障壁を示します。角膜内皮は薬物輸送を制限するとは考えられていません。.
角膜分娩ルートに代わるのは、結膜ルートです。結膜は、まぶたの内側と強膜の前部を覆う多重上皮層です。結膜は、角膜上皮よりもタイトジャンクションが少ないという特徴があり、親水性薬物の透過性が向上します。しかし、結膜の血管新生は、投与された分子の大部分が全身的に吸収されることになり、前房に送達された化合物のバイオアベイラビリティを再び大幅に制限します1,2。外側の眼透過性障壁を回避する効率的な方法は、薬物を関心領域に直接送達することです。例えば、硝子体内注射は、硝子体液4への送達に一般的である。同様に、前房内注射は、前房5への送達に利用される。前房での効率的な濃度を確立することは、抗生物質の皮内注射による感染症の治療や白内障手術の術後抗炎症治療など、さまざまな臨床状況にとって重要です。前房内注射によって物質のバイオアベイラビリティが向上するという利点があるにもかかわらず、考慮すべき重大な安全性上の懸念があります。例えば、皮内眼内薬物注射は、眼圧上昇、中毒性前眼部症候群、および毒性性内皮細胞破壊症候群を誘発する可能性があります5,6。したがって、前臨床試験では、治療効率を最大化し、患者への潜在的な副作用を最小限に抑えるために、前臨床試験で前皮内注射によって送達される薬物の有効性と安全性を慎重に評価することが不可欠です。
新しい治療法を検討するための前臨床試験には、実験動物モデルが不可欠です。マウスやラットなどの小さなげっ歯類は、そのような目的のために最も一般的に使用される実験動物です。これらの動物は、人間の解剖学や生理学と多くの類似点を示しており、貴重な洞察を提供しています。さらに、それらの使用は、サイズが小さく、メンテナンスが容易で、妊娠が速く、多数の子孫を産む能力があるため、経済的に有利です7。
眼疾患モデルでは小型のげっ歯類が広く使用されているにもかかわらず、そのユニークな眼の寸法と解剖学的構造は、実験操作中に大きな課題をもたらします。例えば、皮内注射のような手技は、人間では比較的簡単ですが、マウスやラットでは技術的に厳しいものになります。課題は、房水の量が少ないこと、水晶体が比較的大きく柔軟性に欠けていること、げっ歯類の眼内での水晶体の位置と湾曲が邪魔になることなどの要因に起因しています(図1)8。これらの課題は、げっ歯類の皮内注射中の損傷のリスクを高め、潜在的な悪影響を引き起こし、研究結論の妥当性に影響を与える可能性のある実験的ばらつきをもたらします。私たちの研究では、ラットに安全な皮内注射を施す方法の開発に成功しました。この技術には、角膜に前房への長くて平らなセルフシールトンネルを作成することが含まれます。この方法は、精度を確保するだけでなく、実験の再現性も向上させ、小型げっ歯類の注入技術に関連する問題に対処します。
図1:ラットと人間の目の解剖学的前部の特徴の概略図。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
前臨床研究モデルは、所見の信頼性と適用性を確保するために、制御された再現性のある環境を提供する必要があります。眼科研究では、疾患モデルの確立、新しい治療法の試験、組織反応や潜在的な副作用の評価など、さまざまな研究面で眼注射モデルが一般的に使用されています。
前房内注射は、実験眼科における一般的な手法として機能?…
The authors have nothing to disclose.
この研究は、イスラエル科学財団の助成金2670/23および1304/20によって支援されました。
Alizarin Red | Alpha Aesar | 042040.5 | |
Buprenorphine | Richter pharma | 102047 | |
Dexamethasone 0.1% | Fisher Pharmaceutical | 393102-0413 | |
Hamilton glass syringe 10 μL | Hamilton Co. | 721711 | |
Hoeschst | Merck | B2261 | |
Ketamine | Bremer pharma GMBH (medimarket) | 17889 | |
Ofloxacin 0.3% eye drops | Allergan | E92170 | |
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4% | Fisher Pharmaceutical | N/A | |
Pentobarbital sodium 200 mg/mL | CTS | N/A | |
Slit microscope | Haag-streit bern | b-90019115 | |
Sprague-Dawley Rats | Envigo | N/A | |
Stiletto blade 31 G 0.8 mm | Tecfen medical (skymed) | QKN2808 | |
Surgical microscope | Zeiss | OPMI-6 CFC | |
Trypan Blue | Sartorius | 03-102-1B | |
Xylazine | Eurovet Animal Health | 615648 |
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