هنا ، نقدم بروتوكولا لتطبيق المجال الكهربائي لنبضة النانو ثانية (nsPEF) لتحفيز خلايا شوان في المختبر. أثبتت قدرة التوليف والإفراز للعوامل ذات الصلة وتغييرات سلوك الخلية صحة التحفيز الناجح باستخدام nsPEF. تعطي الدراسة نظرة إيجابية لطريقة تجديد الأعصاب الطرفية.
خلايا شوان (SCs) هي خلايا الميالين في الجهاز العصبي المحيطي ، وتلعب دورا مهما في تجديد الأعصاب الطرفية. المجال الكهربائي لنبض النانو ثانية (nsPEF) هو طريقة ناشئة قابلة للتطبيق في التحفيز الكهربائي للأعصاب والتي أثبتت فعاليتها في تحفيز تكاثر الخلايا والعمليات البيولوجية الأخرى. بهدف تقييم ما إذا كانت SCs تخضع لتغييرات كبيرة في إطار nsPEF والمساعدة في استكشاف إمكانات طرق جديدة لتجديد الأعصاب المحيطية ، تعرضت خلايا RSC96 المستزرعة لتحفيز nsPEF عند 5 كيلو فولت و 10 كيلو فولت ، تليها الزراعة المستمرة لمدة 3-4 أيام. بعد ذلك ، تم تقييم بعض العوامل ذات الصلة التي عبرت عنها SCs لإثبات التحفيز الناجح ، بما في ذلك بروتين العلامة المحدد ، وعامل التغذية العصبية ، وعامل النسخ ، ومنظم الميالين. أظهرت النتائج التمثيلية أن nsPEF عزز بشكل كبير انتشار وهجرة SCs والقدرة على تجميع العوامل ذات الصلة التي تساهم بشكل إيجابي في تجديد الأعصاب الطرفية. في الوقت نفسه ، أشار التعبير المنخفض عن GFAP إلى التشخيص الحميد لإصابات الأعصاب الطرفية. تظهر كل هذه النتائج أن nsPEF لديه إمكانات كبيرة كطريقة علاج فعالة لإصابات الأعصاب الطرفية عن طريق تحفيز SCs.
يتأثر ملايين الأشخاص كل عام بإصابات الأعصاب التي تشمل كلا من الجهاز العصبي المحيطي (PNS) والجهاز العصبي المركزي (CNS)1. أظهرت الدراسات أن قدرة الإصلاح المحوري للجهاز العصبي المركزي محدودة للغاية بعد إصابات الأعصاب ، بينما تظهر PNS قدرة معززة بسبب اللدونة الكبيرة ل SCs2. ومع ذلك ، فإن تحقيق التجديد الكامل بعد إصابات الأعصاب الطرفية لا يزال شاقا ولا يزال يشكل تحديا كبيرا لصحة الإنسان 3,4. في الوقت الحاضر ، ظلت الطعوم الذاتية علاجا شائعا على الرغم من عيوب اعتلال موقع المتبرع ومحدودية التوافر5. دفع هذا الموقف الباحثين إلى استكشاف علاجات بديلة ، بما في ذلك المواد6 والعوامل الجزيئية7 والتحفيز الكهربائي (ES). كعامل يعزز نمو المحور العصبي وتجديد الأعصاب8 ، يصبح اختيار طريقة مناسبة ل ES واستكشاف العلاقة بين ES و SCs أمرا ضروريا.
SCs هي الخلايا الدبقية الرئيسية في الجهاز العصبي الطرفي ، وتلعب دورا حاسما في تجديد PNS 9,10. بعد إصابات الأعصاب الطرفية ، تخضع SCs للتنشيط السريع ، وإعادة البرمجةالشاملة 2 ، والانتقال من حالة تكوين المايلين إلى مورفولوجيا داعمة للنمو لإجراء تجديد العصب2. يحدث انتشار كبير لل SCs في الطرف البعيد من العصب المصاب ، بينما تخضع SCs للجذع البعيد للتكاثر والاستطالة لتشكيل شريط Bungner ، وهو أمر ضروري لتوجيه المحاور العصبية للنمو نحو العضو المستهدف11. علاوة على ذلك ، تهاجر SCs من جذوع الأعصاب القريبة والبعيدة إلى الجسر العصبي لتشكيل حبال SC التي تعزز تجديد المحورالعصبي 12. علاوة على ذلك ، أظهرت الدراسات السابقة أن تخليق وإفراز العوامل ذات الصلة المتعلقة ب SCs يتغير في حالات تجديد الأعصاب الطرفية ، بما في ذلك عوامل النسخ13 ، وعوامل التغذية العصبية14 ، ومنظمات الميالين13. وهذا يوفر أيضا مؤشرات لتقييم نشاط الطوائف المنبوذة. وبناء على ذلك، تم التحقيق على نطاق واسع في تعزيز انتشار SC والهجرة والتوليف وإفراز العوامل ذات الصلة لتحسين تجديد الأعصاب الطرفية15.
أظهرت الدراسات السابقة إمكانية استخدام ES لتجديد الأعصاب1. التفسير المقبول على نطاق واسع هو أن ES يمكن أن يحفز إزالة استقطاب أغشية الخلايا ، ويغير إمكانات الغشاء ، ويؤثر على وظائف بروتين الغشاء عن طريق تغيير توزيعات الشحن على هذه الجزيئات الحيوية1. ومع ذلك ، فإن PEF المكثف المطبق على نطاق واسع قد يسبب ألما شديدا وتقلصات عضلية لا إرادية ورجفان القلب8. كما أنه يزيد من نشاط الكرياتين كيناز (CK) ، ويقلل من قوة العضلات ، ويحفز على تطور تأخر ظهور وجع العضلات (DOMS) 16. nsPEF هي تقنية ناشئة تحفز موضوعات الاختبار ذات المجالات الكهربائية عالية الجهد خلال مدة نبضة نانوثانية ، ويتم استخدامها تدريجيا في الأبحاث على المستوى الخلوي17,18. أفادت الدراسات السابقة أن الأساس المنطقي المحتمل ل nsPEF الذي يعزز تكاثر الخلايا ونشاط العضيات هو تكوين المسام النانوية الغشائية وتنشيط القنوات الأيونية ، مما يؤدي إلى زيادة تركيز السيتوبلازم Ca2+ 19. يستخدم nsPEF تقنية طاقة النبض لشحن غشاء الخلية ، وإنتاج نبضات تتميز بمدة قصيرة ، ووقت ارتفاع سريع ، وطاقة عالية ، وكثافة طاقة منخفضة20. تشير هذه الخصائص إلى أن nsPEF قد يكون وضعا مفضلا مع الحد الأدنى من الآثار الجانبية للتحفيز8. علاوة على ذلك ، يوفر nsPEF مزايا مثل الإجراءات طفيفة التوغل ، وقابلية الانعكاس ، وقابلية الضبط ، وعدم التدمير للأنسجة العصبية مقارنة بالتدخلات الجراحية. أحد الاتجاهات البحثية السائدة ل nsPEF في المجال الطبي الحيوي هو تطبيقه لاستئصال أنسجة الورم باستخدام تحفيز المجال الكهربائي عالي الطاقة21،22،23. تشير بعض نتائج الأبحاث إلى أن 12-nsPEF يمكن أن يحفز الأعصاب الطرفية دون التسبب في ضرر24. ومع ذلك ، في الوقت الحاضر ، هناك أدلة محدودة فيما يتعلق بتطبيق nsPEF في مجال تجديد الأعصاب. علاوة على ذلك ، فإن تحفيز SCs باستخدام nsPEF هو محاولة رائدة ، مما يساهم في مزيد من البحوث في الجسم الحي والسريري. تستكشف هذه الدراسة ما إذا كان تحفيز NSPEF ل SCs يمكن أن يعزز تجديد الأعصاب ويوفر أساسا موثوقا به للبحث المتعمق والمنهجي اللاحق.
في السنوات الأخيرة ، شهد تطبيق nsPEF تعزيز النمو ، كما ورد. nsPEF له تأثير مستهدف للغاية على المنطقة المرغوبة فقط ، حيث يوفر طاقة كافية للعلاج دون التسبب في أضرار حرارية إضافية ، مما يجعله أكثر أمانا لجسم الإنسان28. هذه الخصائص تعطيه آفاقا متعدية واعدة في علاج الأورام وتجديد الأعصاب…
The authors have nothing to disclose.
تم تمويل هذا العمل من قبل المشروع الوطني لتطوير الأدوات والمعدات العلمية الرئيسية (رقم 82027803).
Antifade mounting medium | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | G1401 | |
Anti-GFAP Mouse mAb | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | GB12100-100 | |
Anti-Neurofilament heavy polypeptide Mouse mAb | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | GB12144-100 | |
Anti-S100 beta Mouse mAb | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | GB14146-100 | |
BSA | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | GC305010 | |
Coverslip | Jiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD | 10212432C | |
CY3-labeled goat anti-mouse IgG | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | GB21302 | |
DAPI Staining Reagent | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | G1012 | |
Decolorizing shaker | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | DS-2S100 | |
High Voltage Power Supply for nsPEF | Matsusada Precision Inc. | AU-60P1.6-L | |
Histochemical pen | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | G6100 | |
Membrane breaking liquid | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | G1204 | |
Microscope slide | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | G6012 | |
Palm centrifuge | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | MS6000 | |
PBS powdered | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | G0002 | |
Pipette | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | ||
Positive fluorescence microscope | Nikon, Japan | NIKON ECLIPSE C1 | |
Rabbit Anti-SOX10/AF488 Conjugated antibody | Beijing Bioss Biotechnology Co., LTD | BS-20563R-AF488 | |
RSC96 Schwann cells | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | STCC30007G-1 | |
scanister | 3DHISTECH | Pannoramic MIDI | |
Special cable for nsPEF | Times Microwave Systems | M17/78-RG217 | |
Turbine mixer | Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD | MV-100 |