概要

慢性低酸素症誘発性認知機能障害のマウスモデルにおける鍼治療

Published: December 08, 2023
doi:

概要

ここでは、慢性低酸素マウスモデルに軽度の麻酔と鍼治療を実施し、治療後の認知変化を評価するための行動テストを実施するためのプロトコルについて説明します。

Abstract

中枢神経疾患の治療は、常に医療分野に大きな課題を投げかけてきました。鍼灸治療は、伝統的な中国医学に根ざした非薬理学的実践であり、体の正確なポイントに細い鍼を挿入することを伴い、さまざまな状態の管理に一般的に採用されています。最近、鍼治療は、不安障害や呼吸器疾患を含むさまざまな神経疾患に対する有望な治療介入として浮上しています。しかし、慢性低酸素症によって引き起こされる認知機能障害の治療における鍼治療の可能性はまだ調査されていません。この論文では、慢性低酸素症誘発性認知障害のマウスモデルを確立し、軽度の麻酔を投与し、鍼治療を行い、オープンフィールドテストと水迷路を使用して行動変化と記憶能力を評価するための包括的なプロトコルを提示します。ステップバイステップのプロトコルは、認知機能を改善するためにツボと針を正確に位置決めし、配置するための詳細な指示を提供します。このプロトコルを採用することにより、研究者は体系的な研究を実施して、認知機能障害に対する鍼治療の治療の可能性を徹底的に評価することができます。

Introduction

現在、世界の人口は深刻な高齢化問題に直面しており、その結果、認知障害の有病率が急速に増加しています。認知障害の世界的な発生率は、1000人年あたり約53.97人です1。血管機能障害や循環器・呼吸器疾患による慢性脳低酸素症は、加齢性認知症の主要な危険因子の1つです2。これまでの研究では、脳低酸素症がBACE1の発現修飾することにより、アミロイドβ沈着を増加させることが実証されています3。さらに、低酸素症はグリア細胞の調節不全や神経炎症と関連しています4,5。この問題の深刻さが増しているにもかかわらず、慢性的な低酸素症による認知機能低下を予防する有効な西洋医学は、現在不足しています。非薬理学的伝統医学、特に鍼治療は、認知障害の治療に何千年もの間使用されており、神経変性疾患の緩和に有望な結果を示しています6,7。Baihui、Shenting、およびZusanliのツボは、認知機能障害の治療に効果的なポイントです8,9。臨床研究では、電気鍼治療が血管性認知障害のある患者のモントリオール認知評価(MoCA)およびミニメンタルステート検査(MMSE)スコアを大幅に改善し、認知機能障害を効果的に改善することが実証されています8。鍼治療は、動脈結紮(急性脳低酸素症モデル10、急性脳低酸素モデル)を有するラットの記憶能力を有意に向上させることができることが研究で示唆されているが、慢性低酸素症誘発性認知障害を有するげっ歯類モデルにおける鍼治療の効果に関する報告はない。メカニズムに関する研究の欠如は、その臨床応用をかなり妨げています。

これまでの研究では、ラットを低酸素環境に8週間さらすと、脳内の酸化ストレスと炎症のレベルが著しく上昇し、記憶機能が低下することが実証されています11。本研究は、鍼治療がげっ歯類モデルに及ぼす影響を調査し、理解を深めることを目的としています。ただし、げっ歯類の鍼治療では、繰り返し刺激すると興奮する可能性があるため、通常、麻酔が必要になることは注目に値します。麻酔薬のほとんどが神経活動を抑制し、情報処理を阻害し、行動障害につながる可能性があるため、麻酔の長期化はマウスの認知機能に大きな影響を与える可能性があります12。いくつかの研究は、2.5%セボフルランを6時間投与すると、マウスの空間記憶、学習能力、および注意力を著しく損なう可能性があることを示しています13。さらに、高用量の麻酔がマウスの神経細胞死または神経損傷を引き起こす可能性があることを示唆する証拠があります14。したがって、使用される麻酔の総量を最小限に抑えるための適切なアプローチを特定することが不可欠です。本研究では、認知機能障害のあるマウスの治療に有効な鍼治療法と、記憶力を評価するための行動テストについて紹介する。重要なのは、実験中に投与される麻酔の総投与量を効果的に減らすことができる修正された治療前の麻酔技術を提示することです。

Protocol

動物実験は、河北宜陵医学研究所動物研究倫理委員会(承認番号:N2022148)の承認を得て実施された。体重18-22gの雄のC57BL/6Jマウス( 資料表参照)を河北宜陵医学研究所の新薬評価センターに収容した。彼らは通常の食料ときれいな水を与え、毎日12時間人工光にさらされました。部屋は20〜26°Cの制御された温度範囲と40%〜70%の相対湿度を維持しました。 1. 慢?…

Representative Results

オープンフィールド実験におけるマウスの移動軌跡の特性評価軌道図から、正常群のマウスは、不慣れな環境での探索に強い傾向を示すことがわかった。その活動の軌跡は、主にコーナーに集中し、オープンフィールド全体をカバーしています(左パネル)。対照的に、長期低酸素モデル群のマウスは、新しい環境を探索したいという欲求が著しく減少している。それらは主に?…

Discussion

鍼灸は、2,000年以上前に中国で発祥した非薬理学的医療行為で、経穴と呼ばれる体の特定の部位に細い鍼を刺します。これらの点は、身体の生命エネルギー、つまり「気」が流れるチャネルまたは経絡によって接続されていると考えられています24。鍼灸治療は、これらのツボを刺激することで、体のバランスと調和を取り戻すことを目的としています。慢性疼痛、不安/う?…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この研究は、河北省科学技術プログラム(NO.E2020100001、NO.22372502D)、石家荘市のハイレベル科学技術イノベーションおよび起業家精神人材プロジェクト(第07202203号)の支援を受けました。

Materials

10% paraformaldehyde solution Bioroyee (Beijing) Biotechnology Co., Ltd RL3234
ANY-maze Science  SA201 Video tracking system
C75BL/6J mice BEIJING HFK BIOSCIENCE CO.,LTD No.110322220103041767 Gender: Male,  Weight: 18–22 g
Electroacupuncture device Great Wall KWD-808 I
Hwato acupuncture  needle Suzhou Medical Appliance Factory 2655519 
Isoflurane RWD Life Science Co.,Ltd R510-22
NanoZoomer Digital Pathology Hamamatsu Photonics K. K C9600-01
Small animal anesthesia machine RWD YL-LE-A106

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記事を引用
Wan, F., Guo, Z., Wang, M., Hou, Y., Wang, L., Li, W., Kang, N., Zhu, P., Li, M. Acupuncture Treatment in a Mouse Model of Chronic Hypoxia-Induced Cognitive Dysfunction. J. Vis. Exp. (202), e65784, doi:10.3791/65784 (2023).

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