Diagnóstico rápido basado en la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) de la infección por Helicobacter pylori y la resistencia a los antibióticos

H. pylori es una bacteria gramnegativa, en forma de espiral, altamente móvil, que vive principalmente en la región del píloro del estómago¹. Es un patógeno común que infecta a casi el 50% de la población mundial². La mayoría de las personas con infección por H. pylori no tienen manifestaciones clínicas, y la mayoría desarrolla diferentes enfermedades después de varios años de infección, incluyendo gastritis crónica, úlceras pépticas, úlceras gástricas y cáncer gástrico³. En varios estudios basados en diferentes poblaciones, se ha demostrado la eficacia de la eliminación de H. pylori para prevenir el cáncer de estómago y las lesiones precancerosas ^4,5. Por lo tanto, el Centro Internacional de Investigaciones sobre el Cáncer de la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha aconsejado la erradicación de H. pylori como medida preventiva⁶.

El uso de métodos no invasivos para identificar la infección por H. pylori es un componente clave del tratamiento para la mayoría de los individuos con dispepsia asintomática. La prueba de aliento con urea (UBT), la prueba de antígeno fecal de H. pylori (SAT) y las pruebas serológicas son técnicas no invasivas populares. Entre estos, el UBT es el procedimiento menos intrusivo y más preciso disponible. UBT utiliza ureasa, abundantemente presente en H. pylori, para hidrolizar urea marcada isotópicamente en amoníaco y dióxido de carbono (13C o 14C). Por el contrario, el ensayo inmunocromatográfico (ICA)⁷ es conveniente, simple y no invasivo para el muestreo. Sin embargo, la precisión de la prueba se ve afectada por varios factores, como la calidad de la muestra de heces, la temperatura y el intervalo entre la recolección de la muestra y la prueba. Otra prueba basada en la respuesta inmune es la prueba de anticuerpos séricos contra H. pylori , que detecta anticuerpos en el suero de un paciente. Sin embargo, esta prueba no es adecuada para el análisis posterior al tratamiento, ya que los anticuerpos permanecen mucho tiempo después de que las bacterias hayan sido eliminadas⁸. Otro inconveniente importante es que estos métodos solo diagnostican la infección por H. pylori y no permiten pruebas de resistencia a los medicamentos para guiar el tratamiento basado en la sensibilidad.

Para los métodos de prueba invasivos, el tejido de la biopsia gástrica debe tomarse mediante endoscopia y luego someterse a histología, la prueba rápida de ureasa y el cultivo bacteriano. Estos métodos de prueba también son muy limitados debido a varios factores. Actualmente, estas técnicas se limitan a pacientes ancianos, pacientes con alto riesgo de enfermedad precancerosa o maligna y pacientes que han fracasado en la terapia de primera línea para la enfermedad por reflujo gastroesofágico o infección por H. pylori ⁹. En segundo lugar, debido a las características de crecimiento únicas de H. pylori, la tasa de éxito del cultivo bacteriano solo alcanza el 50%¹⁰. Por lo tanto, los métodos de detección molecular ofrecen una nueva esperanza para superar las altas demandas de los métodos de detección invasivos y guiar el tratamiento basado en la sensibilidad. Entre los métodos de detección molecular, la PCR cuantitativa ha evolucionado enormemente en los últimos años. qPCR, a diferencia de la PCR tradicional, no requiere electroforesis en gel y cuantifica con precisión el ADN/ARN en muestras mediante la adición de cebadores y sondas en la etapa de recocido. Los kits de qPCR para la detección de la infección por H. pylori y la resistencia a los medicamentos ya están disponibles comercialmente. Sin embargo, cada método tiene sus limitaciones; Por lo tanto, el diagnóstico clínico y el tratamiento de un paciente deben considerarse junto con sus síntomas, signos, antecedentes, otras pruebas de laboratorio y respuesta al tratamiento.

Actualmente, el método principal para tratar las infecciones por H. pylori es tomar antibióticos, pero últimamente, cada vez es más difícil tratar estas infecciones debido al aumento de la resistencia a los antibióticos. Posteriormente, se ha observado una disminución significativa en la eficacia del tratamiento con H. pylori a nivel mundial, lo que hace que la erradicación de H. pylori sea un importante problema de salud pública¹¹.

La claritromicina y la levofloxacina son los dos antibióticos de amplio espectro utilizados para tratar las infecciones causadas por H. pylori, pero varios estudios han reportado una resistencia generalizada contra estos dos medicamentos en aislados de H. pylori. A2143G, A2142G y A2142C son tres de las numerosas mutaciones puntuales encontradas en el gen 2.9 kb 23S rRNA que resultan en resistencia a la claritromicina al evitar que el macrólido se una. Al mismo tiempo, los loci de mutación del gen de resistencia a levofloxacino se localizan principalmente en los seis sitios de mutación (A260T, C261A, T261G, G271A, G271T, A272G) del gen gyrA ¹². El descubrimiento de estos mecanismos de resistencia basados en mutaciones genéticas ha llevado a un cambio gradual en la detección de H. pylori a través de estudios basados en el cultivo a pruebas moleculares.

En general, existe una necesidad clínica urgente de un método de diagnóstico no invasivo, efectivo y simultáneo para la detección de infecciones por H. pylori y resistencia a los medicamentos. Adoptamos una prueba de cuerda combinada y un método de qPCR para superar las dificultades de muestreo y lograr el objetivo de la detección simultánea de la infección por H. pylori y la resistencia a los medicamentos utilizando diferentes sondas de cebador.