用于治疗性水凝胶研究的胶质母细胞瘤复发术后切除模型

所有动物实验均由南京医科大学机构评审委员会和动物伦理委员会（IACUC-1904004）批准和监督。年龄为6-8周龄的C57BL / 6J雌性小鼠用于本研究。这些动物是从商业来源获得的（见 材料表）。 1. 动物制备 称量小鼠，并用腹膜内注射50mg / kg戊巴比妥钠麻醉它们（见材料表）。给予美洛昔康（5mg / kg;腹膜内）用于围手术期镇痛。将小鼠饲养在笼子中，在12小时/ 12小时光照/黑暗循环，环境温度为24°C，相对湿度为50%。注意：对于本研究，小鼠的初始重量约为22g。 使用实验动物剃须刀去除小鼠头部的毛发，并将头部和四肢固定在立体定位装置上（见 材料表）。注意：使用前对所有设备进行消毒。 用至少三轮交替的洗必泰或聚维酮碘磨砂膏消毒小鼠头部，然后用酒精消毒，并用无菌手术布覆盖小鼠。在双眼上涂抹眼药膏以防止干燥。 用眼科剪刀沿右额头顶部的中线切开小鼠的头皮约1厘米。注意：在切口之前，通过没有踏板反射来确认麻醉的手术平面。 调整立体定位装置，以确保人字形接缝和前囟门点位于同一水平面。 2. 原位颅内GBM模型的构建 使用蘸有龙胆紫2 的棉签将点标记到前囟门正面 1 毫米，在前囟门右侧 1.8 毫米，从前囟门向下标记 3 毫米（见 材料表）。 使用直径为1毫米的迷你颅骨钻（见 材料表）钻孔该点，以产生直径约1毫米，深度为1毫米的孔径。 用无菌棉签清除渗出的脑脊液。 用微量注射器吸出 5 μL 肿瘤细胞悬液（GL261-Luci，5 × 10 5 个细胞悬浮在5 μL PBS 中）。注意：GL261-Luci是从商业来源获得的（见 材料表）。 将微量注射器的针尖垂直对准颅骨钻孔，插入直到针尖进入颅面3毫米，然后返回针头0.5毫米7。 打开微量注射器，以1μL / min的速度注射。 注射后将针头保留10分钟。 慢慢取出微量注射器，并用无菌干棉球按压注射点。 用不可吸收的手术缝合线缝合头皮（10-0，见 材料表），然后再次对切口进行消毒。 监测动物的健康状况，并将其保持在温暖的条件下。 鼠标唤醒后，将鼠标移回外壳笼。 用 体内 生物发光成像系统（参见 材料表）对小鼠进行成像，以在荷瘤后第10天检测移植的肿瘤。注意：加载在GBM细胞GL261中的荧光素酶用于生物发光成像。用1.5%异氟醚麻醉小鼠，氧流速为0.6L / min。通过缺乏踏板反射确认麻醉深度后，腹膜内注射荧光素钾（10mg / mL，参见 材料表），11秒后，进行 体内 生物发光成像。当荧光值达到~5×105时，该过程成功。注意：在成像前麻醉动物。通过提供汽化异氟醚的鼻锥维持麻醉。 选择成功携带肿瘤的小鼠构建GBM复发术后模型。 3. GBM切除后复发模型的构建 当原位颅内GBM模型小鼠中的肿瘤大小变为~6.5×105时，选择小鼠用于术后复发模型。 称量原位颅内GBM模型小鼠，并用腹膜内注射50mg / kg戊巴比妥钠麻醉小鼠。给予美洛昔康（5mg / kg;腹膜内）用于围手术期镇痛。 重复步骤 1.2−1.5 的过程。 分离头皮组织和颅骨，并检查用于构建原位颅内GBM模型的钻孔。如果孔已经愈合，请使用立体定向装置识别孔，并按照步骤2.1-2.3中提到的步骤进行操作。 用颅骨钻将孔直径扩大到 5 毫米，并用无菌棉签去除渗出的脑脊液。 将显微镜对准鼠标头部，并调整设置以确保钻孔位于视野中心。 用显微镜刀切割脑膜，并在显微镜下用微刮匙和微型手术刀去除部分肿瘤组织。注意：关于脑膜，当颅骨打开时，靠近脑组织的薄膜就是脑膜。 用无菌纱布止血，并用无菌生理盐水清洗切口。 用1mL注射器将市售水凝胶（10μL，见 材料表）注入切除腔，用不可吸收的手术缝合线（10-0）缝合头皮，然后再次消毒切口（图1）。 监测动物的健康状况，并保持鼠标温暖。 鼠标唤醒后，将鼠标移回外壳笼。 进行 体内 生物发光成像以在1天后检测移植的肿瘤，以量化残留肿瘤的大小（图2 和 图3）。 每2天称量小鼠，直到终末终点。注意：对于本研究，终点为第30天，小鼠通过腹膜内注射过量的戊巴比妥钠对小鼠实施安乐死。