Standardisierung des Transfers zwischen Laboren zwischen Durchflusszytometern zum Nachweis von Lymphozyten bei mit japanischer Enzephalitis geimpften Kindern

Die Standardisierung der Durchflusszytometrie ist nützlich für die Vergleichbarkeit von Ergebnissen, die von verschiedenen Zytometern in verschiedenen Labors und Studienzentren erhalten wurden, und fördert die gegenseitige Anerkennung von Ergebnissen, um die Arbeitseffizienz zu verbessern. Immer mehr Szenarien erfordern eine Standardisierung. Während des Arzneimittelentwicklungsprozesses ist die Standardisierung der Durchflusszytometrie wichtig, da ein entwickelter und validierter Assay den gesamten Arzneimittelentwicklungsprozess von der präklinischen bis zur klinischen Analyse unterstützt. Durchflusszytometrische Methoden werden häufig zwischen der pharmazeutischen Industrie und kooperierenden Laboratorien transferiert¹. Darüber hinaus ist es wichtig, vergleichbare Daten aus multizentrischen klinischen Studien zu erhalten. So wurde beispielsweise im Rahmen des Multizentrischen Klinischen Forschungsprojekts Systemische Autoimmunerkrankungen ein Standardisierungs-Workflow entwickelt, um vergleichbare Daten aus der multizentrischen Durchflusszytometrie² zu erhalten.

Die Standardisierung von Durchflusszytometrie-Methoden ist eine Herausforderung. Die Herausforderungen, mit denen die Labore konfrontiert sind, werden auf das Fehlen standardisierter Materialien, Software-Kompatibilitätsprobleme, Inkonsistenzen bei der Geräteeinrichtung und die Verwendung unterschiedlicher Konfigurationen zwischen verschiedenen Durchflusszytometern und divergierenden Gating-Strategien zwischen den Zentren zurückgeführt ^3,4. Daher ist es wichtig, eine Lückenanalyse zwischen den Laboren durchzuführen. Der Probenzugang, die Qualitätssysteme, die Qualifikation des Personals und die Gerätekonfiguration müssen überprüft werden, um sicherzustellen, dass die Anforderungen erfüllt werden.

Gegenwärtig haben Kinder, die mit dem Impfstoff gegen Japanische Enzephalitis (JE) geimpft wurden, eine signifikant reduzierte Inzidenz von JE⁵. Die Überwachung peripherer Blutimmunzellen kann helfen, die Veränderungen der zellvermittelten adaptiven Immunität nach der Impfung und die Korrelation zwischen den Veränderungen in peripheren Blutlymphozyten-Untergruppen und den Auswirkungen der Impfung zu verstehen. Aufgrund der begrenzten Stabilität von Vollblutproben werden die Evaluierungen der Wirksamkeit des Impfstoffs häufig in mehreren Zentren durchgeführt. Für diese Analyse definierten wir naive CD8+- oder CD4+-T-Zellen als CD27+ CD45RA+, zentrale Gedächtnis-T-Zellen (T_CM) als CD27+ CD45RA-, Effektor-Gedächtnis-T-Zellen (T_EM) als CD27-CD45RA- und terminal-differenzierte Effektorgedächtnis-T-Zellen (T_EMRA⁾ als CD27-CD45RA⁺. CD19⁺ B-Zellen können in Populationen unterteilt werden, die CD27 gegenüber IgD ^6,7 exprimieren, naive B-Zellen exprimieren CD27n-Gedächtnis-B-Zellen (mBCs) können basierend auf der Expression von IgD⁶ identifiziert werden^, und regulatorische T-Zellen (Tregs) können als CD4⁺CD25⁺⁺CD127^{niedrig 8} identifiziert werden. Um ein standardisiertes Durchflusszytometrie-Experiment zu etablieren, um die Konsistenz und Vergleichbarkeit der experimentellen Ergebnisse in mehreren Zentren zu erreichen, wurde eine schnelle und praktikable Standardisierungsmethode etabliert, um die Übertragung von Protokollen zwischen verschiedenen Durchflusszytometern für den Nachweis von Lymphozyten im Vollblut von JE-geimpften Kindern zu erleichtern. Sechs gesunde Kinder (2 Jahre alt) wurden aus dem Beijing Children’s Hospital der Capital Medical University rekrutiert. Nach einer Grund- und Auffrischungsimpfung mit einem attenuierten JE SA14-14-2-Lebendimpfstoff vor weniger als 6 Monaten wurden periphere Blutproben von den Freiwilligen entnommen. Es wurden hochgradig vergleichbare Daten von verschiedenen Instrumenten nach standardisierten Verfahren gewonnen, was für multizentrische Assessments hilfreich ist.