概要

מודל הפטוציטים מוסמך הבוחן את כניסת נגיף הפטיטיס B דרך נתרן טאורוחולאט קוטרנספורטינג פוליפפטיד כמטרה טיפולית

Published: May 10, 2022
doi:

概要

אנו מציגים פרוטוקול לסינון תרכובות נגד נגיף הפטיטיס B (HBV) המכוונות לשלבי מחזור החיים של הכניסה לפני ואחרי הנגיף, תוך שימוש בקלורימטריית טיטרציה איזותרמית למדידת זיקה קושרת (KD) עם פוליפפטיד קו-טרנספורטינג של נתרן טאורוכולאט מארח. היעילות האנטי-ויראלית נקבעה באמצעות דיכוי סמני מחזור חיים נגיפיים (היווצרות cccDNA, שעתוק והרכבה ויראלית).

Abstract

זיהום בנגיף הפטיטיס B (HBV) נחשב לגורם סיכון מכריע לקרצינומה הפטוצלולרית. הטיפול הנוכחי יכול רק להפחית את העומס הנגיפי אך לא לגרום להפוגה מוחלטת. מודל הפטוציטים יעיל לזיהום HBV יציע מחזור חיים נגיפי נאמן לחיים שיהיה חיוני לסינון של חומרים טיפוליים. רוב הסוכנים הזמינים נגד HBV מתמקדים בשלבי מחזור החיים לאחר כניסה ויראלית אך לא לפני כניסה ויראלית. פרוטוקול זה מפרט את יצירתו של מודל הפטוציטים מוכשר המסוגל לבצע סינון לסוכנים טיפוליים המכוונים לשלבי מחזור החיים של כניסה טרום-ויראלית ופוסט-ויראלית. זה כולל את ההתמקדות של נתרן טאורוחולאט cotransporting פוליפפטיד (NTCP) קשירה, היווצרות cccDNA, שעתוק, והרכבה ויראלית המבוססת על imHC או HepaRG כמו תאים מארחים. כאן, בדיקת עיכוב הכניסה HBV השתמשה בכורכומין כדי לעכב פונקציות קשירה והובלה של HBV באמצעות NTCP. המעכבים הוערכו עבור זיקה מחייבת (KD) עם NTCP באמצעות קלורימטריית טיטרציה איזותרמית (ITC) – כלי אוניברסלי לבדיקת תרופות HBV המבוסס על פרמטרים תרמודינמיים.

Introduction

זיהום בנגיף הפטיטיס B (HBV) נחשב למחלה מסכנת חיים ברחבי העולם. זיהום HBV כרוני עמוס בסיכון לשחמת הכבד וקרצינומה הפטוצלולרית1. הטיפול הנוכחי נגד HBV מתמקד בעיקר בכניסה לאחר הנגיף באמצעות אנלוגים גרעיניים(t)IDE (NAs) ואינטרפרון-אלפא (IFN-α)2,3. הגילוי של מעכב כניסה HBV, Myrcludex B, זיהה מטרה חדשה לחומרים נגד HBV4. השילוב של מעכבי כניסה ו-NAs ב-HBV כרוני הפחית משמעותית את העומס הנגיפי בהשוואה לאלה המכוונים לשכפול נגיפי בלבד 5,6. עם זאת, המודל הקלאסי של הפטוציטים להקרנה של מעכבי כניסה HBV מוגבל על ידי רמות נמוכות של קולטנים נגיפיים (נתרן טאורוחולאט cotransporting polypeptide, NTCP). ביטוי יתר של hNTCP בתאי הפטומה (כלומר, HepG2 ו- Huh7) משפר את זיהום HBV 7,8. אף על פי כן, קווי תאים אלה מבטאים רמות נמוכות של אנזימים מעכלים של תרופות בשלב I ו-II ומפגינים חוסר יציבות גנטית9. מודלים של הפטוציטים שיכולים לסייע במיקוד מנגנונים מובחנים של תרכובות אנטי-HBV מועמדות כגון כניסה טרום-ויראלית, קשירת NTCP וכניסה ויראלית יזרזו את הזיהוי והפיתוח של משטרי שילוב יעילים. המחקר על פעילות אנטי-HBV של כורכומין הבהיר את עיכוב כניסת הנגיף כמנגנון חדש בנוסף להפרעה לאחר כניסת הנגיף. פרוטוקול זה מפרט מודל מארח להקרנה של מולקולות כניסה נגד HBV10.

המטרה של שיטה זו היא לחקור תרכובות אנטי-HBV מועמדות לעיכוב כניסה נגיפית, במיוחד חסימת קשירת NTCP והובלתו. מכיוון שביטוי NTCP הוא גורם קריטי לכניסה וזיהום של HBV, ביצענו אופטימיזציה של פרוטוקול ההבשלה של הפטוציטים כדי למקסם את רמות NTCP11. בנוסף, פרוטוקול זה יכול להבדיל בין ההשפעה המעכבת על כניסת HBV כעיכוב של חיבור HBV לעומת עיכוב של הפנמה. בדיקת ספיגת החומצה הטאורוכולית (TCA) שונתה גם היא באמצעות שיטה מבוססת ELISA במקום רדיואיזוטופ כדי לייצג הובלת NTCP12,13. האינטראקציה בין הקולטן לליגנד אושרה על ידי המבנים התלת-ממדיים שלהם14,15. ניתן להעריך את העיכוב של פונקציית NTCP על ידי מדידת פעילות ספיגת TCA16. עם זאת, טכניקה זו לא סיפקה עדות ישירה לקשירת NTCP למעכבי המועמדים. לכן, ניתן לחקור את הקשירה באמצעות טכניקות שונות, כגון תהודת פלסמוןפני השטח 17, ELISA, בדיקת הסטה תרמית מבוססת פלואורסצנציה (FTSA)18, FRET 19, AlphaScreen, ושיטות שונות אחרות20. בין טכניקות אלה, ITC הוא תקן מטרה בניתוח מחייב מכיוון שהוא יכול לצפות בספיגת חום או פליטה כמעט בכל תגובה21. זיקת הקשירה (KD) של NTCP ותרכובות מועמדות הוערכה ישירות באמצעות ITC; ערכי זיקה אלה היו מדויקים יותר מאלו שהושגו באמצעות מודל החיזוי של סיליקו 22.

פרוטוקול זה מכסה טכניקות בהבשלת הפטוציטים, זיהום HBV והקרנה למעכבי כניסה HBV. בקצרה, פותח מודל הפטוציטים המבוסס על קווי תאים imHC ו- HepaRG. התאים בתרבית התמינו להפטוציטים בוגרים תוך שבועיים. העלייה ברמות NTCP זוהתה באמצעות PCR בזמן אמת, כתם מערבי וציטומטריה של זרימה11. הפטיטיס B virion (HBVcc) הופק ונאסף מ- HepG2.2.15. ה-imHC או ה-HepaRG המובחנים (d-imHC, d-HepaRG) טופלו באופן מניעתי עם המועמדים נגד HBV שעתיים לפני החיסון ב-HBV virion. התוצאה הצפויה של הניסוי הייתה זיהוי הסוכנים המפחיתים את ה-HBV התאי ואת ההדבקה. פעילות אנטי-NTCP הוערכה באמצעות בדיקת קליטת TCA. ניתן לדכא את פעילות NTCP על ידי הסוכנים שקשרו באופן ספציפי את NTCP. טכניקת ITC שימשה כדי לחקור את ההיתכנות של קשירה אינטראקטיבית שיכולה לחזות מעכבים וחלבוני המטרה שלהם, ולקבוע את זיקת הקשירה (KD) של הליגנד לקולטן באמצעות אינטראקציות לא קוולנטיות של הקומפלקס הביומולקולרי23,24. לדוגמה, K D ≥ 1 × 103 mM מייצג כריכה חלשה, K D ≥ 1 × 106 μM מייצג כריכה בינונית, ו- K D ≤ 1 × 109 nM מייצג כריכה חזקה. ה- ΔG נמצא בקורלציה ישירה עם אינטראקציות מחייבות. בפרט, תגובה עם ΔG שלילי היא תגובה אקסרגונית, המציינת כי מחייב הוא תהליך ספונטני. תגובה עם ΔH שלילי מצביעה על כך שתהליכי הקשירה תלויים בקשרי מימן ובכוחות ואן דר ואלס. ניתן להשתמש הן בקליטת TCA והן בנתוני ITC כדי לסנן סוכני כניסה נגד HBV. התוצאות של פרוטוקולים אלה יכולות לספק בסיס לא רק לסינון נגד HBV אלא גם לאינטראקציה עם NTCP כפי שהיא מוערכת באמצעות זיקה מחייבת ופונקציית תחבורה. מאמר זה מתאר הכנה ואפיון של תאי מארח, תכנון ניסויי והערכה של הערך נגד HBV יחד עם זיקת קשירת NTCP.

Protocol

הערה: יש לבצע את ההליכים הבאים במכסה מנוע זרימת סיכון ביולוגי מדרגה II או במכסה מנוע זרימה למינרית. הטיפול ב-HBV אושר אתית על ידי ה-IRB (MURA2020/1545). עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים על כל הפתרונות, הריאגנטים, הציוד וקווי התאים המשמשים בפרוטוקול זה. 1. הכנת תאים מארחים (הפטוצ…

Representative Results

נצפו תכונות של הבשלת הכבד, כולל תאים דו-צדדיים ומורפולוגיה בצורת מצולע (איור 1), במיוחד בשלב ההבחנה, imHC (איור 1A). עלייה גדולה בביטוי NTCP נמדדה ב-d-HepaRG וב-d-imHC פי 7 ופי 40, בהתאמה (איור 1B). הצורה המגולגנת מאוד של NTCP, שהונחה כמעניקה רגישות לכניסת HBV, זוהת?…

Discussion

זיהום HBV מתחיל באמצעות זיקה נמוכה קשירה לפרוטאוגליקנים של הפראן סולפט (HSPGs) על הפטוציטים25, ולאחר מכן קשירה ל- NTCP עם הפנמה לאחר מכן באמצעות אנדוציטוזה26. מכיוון ש-NTCP הוא קולטן חיוני לכניסת HBV, ניתן לתרגם קלינית את הכניסה ל-HBV להפחתת זיהום דה נובו , העברה מאם לילד (MTC…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

פרויקט מחקר זה נתמך על ידי אוניברסיטת Mahidol והמחקר והחדשנות המדעית של תאילנד (TSRI) המוענקים בנפרד ל- A. Wongkajornsilp ו- K. Sa-ngiamsuntorn. עבודה זו נתמכה כספית על ידי המשרד הלאומי למחקר מדעי ומדיניות חדשנות באמצעות היחידה לניהול תוכניות לתחרותיות (מענק מספר C10F630093). A. Wongkajornsilp הוא זוכה במענק Chalermprakiat של הפקולטה לרפואה בית החולים סיריראג ‘, אוניברסיטת Mahidol. המחברים רוצים להודות למיס סאווין סימקאן (המרכז המצוין לגילוי תרופות, הפקולטה למדעים, אוניברסיטת מאהידול) על עזרתה בטכניקת ITC.

Materials

Cell lines
HepaRG Cells, Cryopreserved Thermo Fisher Scientific HPRGC10
Hep-G2/2.2.15 Human Hepatoblastoma Cell Line Merck SCC249
Reagents
4% Paraformadehyde Phosphate Buffer Solution FUJIFLIM Wako chemical 163-20145
BD Perm/Wash buffer BD Biosciences 554723 Perm/Wash buffer
Cyclosporin A abcam 59865-13-3
EDTA Invitrogen 15575-038 8 mM
G 418 disulfate salt Merck 108321-42-2
Halt Protease Inhibitor Cocktail  EDTA-free (100x) Thermo Scientific 78425
HEPES Merck 7365-45-9
illustraTM RNAspin Mini RNA isolation kits GE Healthcare 25-0500-71
illustra RNAspin Mini RNA Isolation Kit GE Healthcare 25-0500-71
ImProm-II Reverse Transcription System Promega A3800
KAPA SYBR FAST qPCR Kit Kapa Biosystems KK4600
Lenti-X Concentrator Takara bio PT4421-2 concentrator
Luminata crescendo Western HRP substrate Merck WBLUR0100
Master Mix (2x) Universal Kapa Biosystems KK4600
Nucleospin DNA extraction kit macherey-nagel 1806/003
Phosphate buffered saline Merck P3813
Polyethylene glycol 8000 Merck 25322-68-3
ProLong Gold Antifade Mountant Thermo scientific P36930
Recombinant NTCP Cloud-Clone RPE421Hu02
RIPA Lysis Buffer (10x) Merck 20-188
TCA Sigma 345909-26-4
TCA Elisa kit Mybiosource MB2033685
Triton X-100 Merck 9036-19-5
Trypsin-EDTA Gibco 25200072 Dilute to 0.125%
Antibodies
    Anti-NTCP1 antibody Abcam ab131084 1:100 dilution
    Anti-GAPDH antibody Thermo Fisher Scientific AM4300 1:200,000 dilution
   HRP-conjugated goat anti-rabbit antibody Abcam ab205718 1:10,000 dilution
   HRP goat anti-mouse secondary antibody Abcam ab97023 1:10,000 dilution
   Goat anti-Rabbit IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 Invitrogen A-11008 1:500 dilution
Reagent composition
1° Antibody dilution buffer
     1x TBST
     3% BSA Sigma A7906-100G Working concentration: 3%
     Sodium azide Sigma 199931 Working concentration: 0.05%
Hepatocyte Growth Medium
      DME/F12 Gibco 12400-024
      10% FBS Sigma Aldrich F7524
      1% Pen/Strep HyClon SV30010
      1% GlutaMAX Gibco 35050-061
Hepatic maturation medium
      Williams’ E medium Sigma Aldrich W4125-1L
      10% FBS Sigma Aldrich F7524
      1% Pen/Strep HyClon SV30010
      1% GlutaMAX Gibco 35050-061
      5 µg/mL  Insulin Sigma Aldrich 91077C-100MG
      50 µM hydrocotisone Sigma Aldrich H0888-1g
     2% DMSO PanReac AppliChem A3672-250ml
IF Blocking solution
     1x PBS Gibco 21300-058
     3% BSA Sigma A7906-100G Working concentration: 3%
     0.2% Triton X-100 Sigma T8787 Working concentration: 0.2%
RIPA Lysis Buffer Solution Merck 20-188 Final concentration: 1X
     Protease Inhibitor Cocktail Thermo Scientific 78425 Final concentration: 1X
       Na3VO4 Final concentration: 1 mM
       PMSF Final concentration: 1 mM
       NaF Final concentration: 10 mM
Western blot reagent
     10x Tris-buffered saline (TBS) Bio-Rad 170-6435 Final concentration: 1X
     Tween 20 Merck 9005-64-5
     1x TBST 0.1% Tween 20
     1x PBS Gibco 21300-058
     Pierce BCA Protein Assay Kit Thermo Fisher Scientific A53225
     Polyacrylamide gel Bio-Rad 161-0183
     Ammonium Persulfate (APS) Bio-Rad 161-0700 Final concentration: 0.05%
    TEMED Bio-Rad 161-0800 Stacker gel: 0.1%, Resolver gel: 0.05%
    2x Laemmli Sample Buffer Bio-Rad 161-0737 Final concentration: 1X
    Precision Plus Protein Dual Color Standards Bio-Rad 161-0374
WB Blocking solution/ 2° Antibody dilution buffer
     1x TBST
     5% Skim milk (nonfat dry milk) Bio-Rad 170-6404 Working concentration: 5%
1x Running buffer 1 L
      10x Tris-buffered saline (TBS) Bio-Rad 170-6435 Final concentration: 1X
     Glycine Sigma G8898 14.4 g
     SDS Merck 7910 Working concentration: 0.1%
Blot transfer buffer 500 mL
      10x Tris-buffered saline (TBS) Bio-Rad 170-6435 Final concentration: 1X
     Glycine Sigma G8898 7.2 g
     Methanol Merck 106009 100 mL
Mild stripping solution 1 L Adjust pH to 2.2
    Glycine Sigma G8898 15 g
     SDS Merck 7910 1 g
     Tween 20 Merck 9005-64-5 10 mL
Equipments
15 mL centrifuge tube Corning 430052
50 mL centrifuge tube Corning 430291
Airstream Class II Esco 2010621 Biological safety cabinet
CelCulture CO2 Incubator Esco 2170002 Humidified tissue culture incubator
CFX96 Touch Real-Time PCR Detector Bio-Rad 1855196
FACSVerse Flow Cytometer BD Biosciences 651154
Graduated pipettes (10 mL) Jet Biofil GSP010010
Graduated pipettes (5 mL) Jet Biofil GSP010005
MicroCal PEAQ-ITC Malvern Isothermal titration calorimeters
Mini PROTEAN Tetra Cell Bio-Rad 1658004 Electrophoresis chamber
Mini Trans-blot absorbent filter paper Bio-Rad 1703932
Omega Lum G Imaging System Aplegen 8418-10-0005
Pipette controller Eppendorf 4430000.018 Easypet 3
PowerPac HC Bio-Rad 1645052 Power supply
PVDF membrane Merck IPVH00010
T-75 A91:D106flask Corning 431464U
Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer Cell Bio-Rad 1703940 Semi-dry transfer cell
Ultrasonic processor (Vibra-Cell VCX 130) Sonics & Materials
Versati Tabletop Refrigerated Centrifuge Esco T1000R Centrifuge with swinging bucket rotar

参考文献

  1. Levrero, M., Zucman-Rossi, J. Mechanisms of HBV-induced hepatocellular carcinoma. Journal of Hepatology. 64 (1), 84-101 (2016).
  2. Kim, K. -. H., Kim, N. D., Seong, B. -. L. Discovery and development of anti-HBV agents and their resistance. Molecules. 15 (9), 5878-5908 (2010).
  3. Shaw, T., Bowden, S., Locarnini, S. Chemotherapy for hepatitis B: New treatment options necessitate reappraisal of traditional endpoints. Gastroenterology. 123 (6), 2135-2140 (2002).
  4. Volz, T., et al. The entry inhibitor Myrcludex-B efficiently blocks intrahepatic virus spreading in humanized mice previously infected with hepatitis B virus. Journal of Hepatology. 58 (5), 861-867 (2013).
  5. Mak, L. -. Y., Seto, W. -. K., Yuen, M. -. F. Novel antivirals in clinical development for chronic hepatitis B infection. Viruses. 13 (6), 1169 (2021).
  6. Zuccaro, V., Asperges, E., Colaneri, M., Marvulli, L. N., Bruno, R. HBV and HDV: New Treatments on the Horizon. Journal of Clinical Medicine. 10 (18), 4054 (2021).
  7. Iwamoto, M., et al. Evaluation and identification of hepatitis B virus entry inhibitors using HepG2 cells overexpressing a membrane transporter NTCP. Biochemical and Biophysical Research Communications. 443 (3), 808-813 (2014).
  8. Tong, S., Li, J. Identification of NTCP as an HBV receptor: the beginning of the end or the end of the beginning. Gastroenterology. 146 (4), 902-905 (2014).
  9. Xuan, J., Chen, S., Ning, B., Tolleson, W. H., Guo, L. Development of HepG2-derived cells expressing cytochrome P450s for assessing metabolism-associated drug-induced liver toxicity. Chemico-Biological Interactions. 255, 63-73 (2016).
  10. Thongsri, P., et al. Curcumin inhibited hepatitis B viral entry through NTCP binding. Scientific Reports. 11 (1), 19125 (2021).
  11. Sa-Ngiamsuntorn, K., et al. An immortalized hepatocyte-like cell line (imHC) accommodated complete viral lifecycle, viral persistence form, cccDNA and eventual spreading of a clinically-isolated HBV. Viruses. 11 (10), 952 (2019).
  12. Watashi, K., et al. Cyclosporin A and its analogs inhibit hepatitis B virus entry into cultured hepatocytes through targeting a membrane transporter, sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP). Hepatology. 59 (5), 1726-1737 (2014).
  13. Kaneko, M., et al. A novel tricyclic polyketide, Vanitaracin A, specifically inhibits the entry of hepatitis B and D viruses by targeting sodium taurocholate cotransporting polypeptide. Journal of Virology. 89 (23), 11945-11953 (2015).
  14. Manta, B., Obal, G., Ricciardi, A., Pritsch, O., Denicola, A. Tools to evaluate the conformation of protein products. Biotechnology Journal. 6 (6), 731-741 (2011).
  15. Martinez Molina, D., Nordlund, P. The cellular thermal shift assay: a novel biophysical assay for in situ drug target engagement and mechanistic biomarker studies. Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 56, 141-161 (2016).
  16. Appelman, M. D., Chakraborty, A., Protzer, U., McKeating, J. A., van de Graaf, S. F. J. N-Glycosylation of the Na+-taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP) determines its trafficking and stability and is required for hepatitis B virus infection. PLoS One. 12 (1), 0170419 (2017).
  17. Tsukuda, S., et al. A new class of hepatitis B and D virus entry inhibitors, proanthocyanidin and its analogs, that directly act on the viral large surface proteins. Hepatology. 65 (4), 1104-1116 (2017).
  18. Klumpp, K., et al. High-resolution crystal structure of a hepatitis B virus replication inhibitor bound to the viral core protein. Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (49), 15196-15201 (2015).
  19. Donkers, J. M., Appelman, M. D., van de Graaf, S. F. J. Mechanistic insights into the inhibition of NTCP by myrcludex B. JHEP Reports. 1 (4), 278-285 (2019).
  20. Saso, W., et al. A new strategy to identify hepatitis B virus entry inhibitors by AlphaScreen technology targeting the envelope-receptor interaction. Biochemical and Biophysical Research Communications. 501 (2), 374-379 (2018).
  21. Baranauskiene, L., Kuo, T. C., Chen, W. Y., Matulis, D. Isothermal titration calorimetry for characterization of recombinant proteins. Current Opinion in Biotechnology. 55, 9-15 (2019).
  22. Zhang, J., et al. Structure-based virtual screening protocol for in silico identification of potential thyroid disrupting chemicals targeting transthyretin. Environmental Science & Technology. 50 (21), 11984-11993 (2016).
  23. Duff, J. M. R., Grubbs, J., Howell, E. E. Isothermal titration calorimetry for measuring macromolecule-ligand affinity. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (55), e2796 (2011).
  24. Du, X., et al. Insights into protein-ligand interactions: mechanisms, models, and methods. International Journal of Molecular Sciences. 17 (2), 144 (2016).
  25. Sureau, C., Salisse, J. A conformational heparan sulfate binding site essential to infectivity overlaps with the conserved hepatitis B virus A-determinant. Hepatology. 57 (3), 985-994 (2013).
  26. Herrscher, C., et al. Hepatitis B virus entry into HepG2-NTCP cells requires clathrin-mediated endocytosis. Cellular Microbiology. 22 (8), 13205 (2020).
  27. Gripon, P., et al. Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus. Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (24), 15655-15660 (2002).
  28. Mayati, A., et al. Functional polarization of human hepatoma HepaRG cells in response to forskolin. Scientific Reports. 8 (1), 16115 (2018).
  29. Sells, M. A., Chen, M. L., Acs, G. Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (4), 1005-1009 (1987).
  30. Freyer, M. W., Lewis, E. A. Isothermal titration calorimetry: experimental design, data analysis, and probing macromolecule/ligand binding and kinetic interactions. Methods in Cell Biology. 84, 79-113 (2008).
  31. Srivastava, V. K., Yadav, R., Misra, G. . Data Processing Handbook for Complex Biological Data Sources. , 125-137 (2019).
  32. Seeger, C., Mason, W. S. Sodium-dependent taurocholic cotransporting polypeptide: a candidate receptor for human hepatitis B virus. Gut. 62 (8), 1093-1095 (2013).
  33. Seeger, C., Sohn, J. A. Targeting hepatitis B virus with CRISPR/Cas9. Molecular Therapy – Nucleic Acids. 3, 216 (2014).
  34. Ni, Y., et al. Hepatitis B and D viruses exploit sodium taurocholate co-transporting polypeptide for species-specific entry into hepatocytes. Gastroenterology. 146 (4), 1070-1083 (2014).
  35. Chai, N., et al. Properties of subviral particles of hepatitis B virus. Journal of Virology. 82 (16), 7812-7817 (2008).
  36. Moore, A., Chothe, P. P., Tsao, H., Hariparsad, N. Evaluation of the interplay between uptake transport and CYP3A4 induction in micropatterned cocultured hepatocytes. Drug Metabolism and Disposition. 44 (12), 1910-1919 (2016).
  37. Parvez, M. K., et al. Plant-derived antiviral drugs as novel hepatitis B virus inhibitors: Cell culture and molecular docking study. Saudi Pharmaceutical Journal. 27 (3), 389-400 (2019).

Play Video

記事を引用
Sa-ngiamsuntorn, K., Thongsri, P., Pewkliang, Y., Borwornpinyo, S., Wongkajornsilp, A. A Competent Hepatocyte Model Examining Hepatitis B Virus Entry through Sodium Taurocholate Cotransporting Polypeptide as a Therapeutic Target. J. Vis. Exp. (183), e63761, doi:10.3791/63761 (2022).

View Video