Здесь мы описываем оптимизированный протокол окклюзии вен сетчатки с использованием розовой бенгальской розы и систему микроскопа визуализации сетчатки с лазерным наведением с рекомендациями по максимизации ее воспроизводимости в генетически модифицированных штаммах.
Мышиные модели окклюзии вен сетчатки (RVO) часто используются в офтальмологии для изучения гипоксически-ишемического повреждения нервной сетчатки. В этом отчете подробный метод, указывающий на критические шаги, содержит рекомендации по оптимизации для достижения стабильно успешных показателей окклюзии у различных генетически модифицированных штаммов мышей. Модель мыши RVO состоит в основном из внутривенного введения красителя фотосенсибилизатора с последующей лазерной фотокоагуляцией с использованием микроскопа визуализации сетчатки, прикрепленного к офтальмологическому управляемому лазеру. Три переменные были идентифицированы как детерминанты консистенции окклюзии. Регулируя время ожидания после введения розовой бенгалии и балансируя исходный и экспериментальный лазерный выход, изменчивость между экспериментами может быть ограничена и достигнут более высокий уровень успеха окклюзий. Этот метод может быть использован для исследования заболеваний сетчатки, которые характеризуются отеком сетчатки и гипоксически-ишемическим поражением. Кроме того, поскольку эта модель вызывает повреждение сосудов, она также может быть применена для изучения нейроциркулятуры, гибели нейронов и воспаления.
Окклюзия вен сетчатки (RVO) является распространенным сосудистым заболеванием сетчатки, которое затронуло около 28 миллионов человек во всем мире в 2015году 1. RVO приводит к снижению зрения и потере у людей трудоспособного возраста и пожилых людей, представляя собой продолжающееся угрожающее зрению заболевание, которое, по оценкам, увеличится в течение ближайшего десятилетия. Некоторые из различных патологий RVO включают гипоксически-ишемическое повреждение, отек сетчатки, воспаление и потерю нейронов2. В настоящее время первая линия лечения этого расстройства заключается в введении ингибиторов фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). В то время как лечение анти-VEGF помогло улучшить отек сетчатки, многие пациенты все еще сталкиваются со снижением зрения3. Чтобы лучше понять патофизиологию этого заболевания и проверить потенциальные новые линии лечения, необходимо составить функциональный и подробный протокол мышиной модели RVO для различных штаммов мышей.
Мышиные модели были разработаны с реализацией того же лазерного устройства, которое используется у пациентов-людей, в сочетании с системой визуализации, масштабированной до правильного размера для мыши. Эта мышиная модель RVO была впервые зарегистрирована в 2007 году4 и далее установлена Ebneter и другими 4,5. В конце концов, модель была оптимизирована Fuma et al. для воспроизведения ключевых клинических проявлений RVO, таких как отек сетчатки6. С тех пор, как модель была впервые представлена, многие исследования использовали ее с использованием введения красителя фотосенсибилизатора с последующим фотокоагуляцией основных вен сетчатки с помощью лазера. Тем не менее, количество и тип вводимого красителя, мощность лазера и время воздействия значительно различаются в исследованиях, в которых использовался этот метод. Эти различия часто могут привести к увеличению изменчивости модели, что затрудняет ее тиражирование. На сегодняшний день нет опубликованных исследований с конкретными подробностями о потенциальных путях его оптимизации.
В настоящем отчете представлена подробная методология мышиной модели RVO в штамме C57BL/6J и тамоксифен-индуцируемом эндотелиальной каспазе-9 нокаутном штамме (iEC Casp9KO) с фоном C57BL/6J и имеющим отношение к патологии RVO в качестве эталонного штамма для генетически модифицированной мыши. Предыдущее исследование показало, что неапоптотическая активация эндотелиальной каспазы-9 вызывает отек сетчатки и способствует гибели нейронов8. Опыт использования этого штамма помог определить и дать представление о потенциальных модификациях для адаптации мышиной модели RVO, которая может быть применима к другим генетически модифицированным штаммам.
Модель RVO для мышей предоставляет возможность для дальнейшего понимания патологии RVO и тестирования потенциальных терапевтических средств. В то время как модель RVO мыши широко используется в полевых условиях, существует потребность в текущем подробном протоколе модели, который учитыв…
The authors have nothing to disclose.
Carprofen | Rimadyl | NADA #141-199 | keep at 4 °C |
Corn Oil | Sigma-Aldrich | C8267 | |
Fiber Patch Cable | Thor Labs | M14L02 | |
GenTeal | Alcon | 00658 06401 | |
Ketamine Hydrochloride | Henry Schein | NDC: 11695-0702-1 | |
Lasercheck | Coherent | 1098293 | |
Phenylephrine | Akorn | NDCL174478-201-15 | |
Phoneix Micron IV with Meridian, StreamPix, and OCT modules | Phoenix Technology Group | ||
Proparacaine Hydrochloride | Akorn | NDC: 17478-263-12 | keep at 4 °C |
Refresh | Allergan | 94170 | |
Rose Bengal | Sigma-Aldrich | 330000-5G | |
Tamoxifen | Sigma-Aldrich | T5648-5G | light-sensitive |
Tropicamide | Akorn | NDC: 174478-102-12 | |
Xylazine | Akorn | NDCL 59399-110-20 |