덕트: 3D 간 분석을 위한 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 다음에 이중 수지 주조

이 연구에서 설명된 프로토콜은 승인되었으며 스톡홀름 노라 주르뢰르쇼크세티스카 네른드(스톡홀름 동물 연구 윤리 위원회)의 동물 복지 규칙 및 규정을 따릅니다. 이 연구에서 사용된 동물은 혼합 C3H/N 및 C57bl6J 배경에 야생 형 또는 homozygous Jag1H268Q 돌연변이 마우스였다. 남성과 여성 모두 연구에 포함 되었다. 동물은 산후 15 일 또는 3 – 8 개월 사이의 성인으로 사용되었습니다. 1. 이중 수지 주사 준비수지 용액을 준비합니다. 이중 시스템 수지 주사의 경우 단계 1.1.2-1.1.4에 설명된 대로 노란색 및 녹색 수지 모두를 준비하십시오. 마우스 당 희석 된 수지의 1 mL 알리쿼트준비. 노란색 수지: 노란 실리콘 고무(높은 방사성)를 3:1 희석으로 희석하여 주입을 위해 노란색 수지를 준비합니다. 녹색 수지: 파란색 실리콘 고무(탐지할 수 없는 방사성)를 1:1 희석으로 투명 희석제와 혼합하여 파란색 수지준비합니다. 녹색 수지를 생성하려면 희석된 파란색 수지와 희석된 노란색 수지의 비율을 1:1의 비율로 혼합합니다. 색상이 균일 할 때까지 녹색 수지를 철저히 소용돌이.참고: 블루 수지는 마이크로CT로 감지할 수 없는 매우 낮은 방사선파성을 가지므로 노란색 수지로 희석하여 다른 방사선 능력을 가진 두 개의 수지생성이 필요합니다.주의: 수지는 발암 물질인 납 크로메이트를 포함할 수 있습니다. 그것은 화재에 유독 가스를 생산하고 있습니다. 수지를 조심스럽게 처리하고 수지를 유해 폐기물로 처리하십시오. 단계 1.1.6-1.1.11에 설명된 대로 튜브를 사용하면 두 개의 주입 세트(주사 세트 #1 및 주입 세트 #2)를 준비하십시오.참고: 성인 마우스(>P30(산후일 30) = P30-2년)의 경우, 포털 정맥 주입을 위한 일반적인 담즙 덕 주입 및 주입 세트 #2 (PE50 튜브 0.96 mm 외경)에 대한 주입 세트 #1 (PE10 튜브 0.6 mm 외경)을 사용합니다. 젊은 산후 마우스 (P30까지)의 경우, 담관에 대한 두 개의 #1 주사 세트를 준비하고 포털 정맥 주입을위한 세트 (포탈 정맥이 PE50 튜브를 수용하기에 너무 좁기 때문에 주사 세트 #2 없음). 사출 세트 #1을 준비하려면, PE10 튜브30cm를 자르고 가능한 한 얇아질 때까지 손으로 튜브의 한쪽 끝을 스트레칭하십시오 (그림 1A, B, 직경 약 0.15 mm, 비 뻗어 PE10 튜브는 직경 0.6mm입니다). 베벨 팁을 만들기 위해 뻗은 PE10 튜브의 끝을 대각선으로 자른다(그림 1B). PE10 튜브의 비 늘어난 끝을 30 G 바늘에 연결합니다(그림 1A, 주입 세트 #1). 사출 세트 #2를 준비하기 위해, 30cm의 PE50 튜브를 자르고 포털 정맥에 들어갈 만큼 얇아질 때까지 손으로 튜브의 한쪽 끝을 스트레칭하십시오 (그림 1A, B, 약 0.7 mm, 비 뻗어 PE50 튜브는 직경 0.96mm입니다). 베벨 팁을 만들기 위해 뻗은 PE50 튜브의 끝을 대각선으로 자른다(그림 1B). PE50 튜브의 비 늘어난 끝을 23 G 바늘에 연결합니다(그림 1A, 사출 세트 #2).참고: 각 주사 세트는 주사기와 튜브에서 수지가 강화되기 때문에 한 번의 주사에만 사용할 수 있습니다. 나이, 유전자형 및 표현형에 따라 마우스의 일반적인 담관 및 포털 정맥의 크기에 따라 늘어나고 베벨이 있는 팁의 크기를 조정합니다. 튜브의 크기와 적합성에 대해 확실하지 않은 경우 절개 후 와 튜브가 수지로 채워지기 전에 적절한 덕트 또는 용기에 튜브를 삽입하십시오. 튜브가 덕트 /용기에 맞게 너무 넓은 경우, 더 스트레칭. 이소플루란 흡입에 의해 동물을 마취시한다(유도 챔버에서 처음 4%, 코 콘을 사용하여 ~2%). 마우스가 코 콘을 통해 이소플루란을 호흡하는 동안 해부 패드에 통풍벤치에 마우스를 놓습니다. 예를 들어, 발 중 하나를 꼬집어 서 동물이 종교 교육원/IRB 권장 방법에 의해 의식이 없는지 확인합니다.주의: 이소플루란은 흡입시 졸음이나 현기증을 유발할 수 있으며 장기간 또는 반복된 노출을 통해 심혈관 시스템과 중추 신경계에 손상을 줄 수 있습니다. 흡입하지 마십시오. 통풍이 잘 되는 벤치와 통풍이 잘 되는 부위에서 물질을 처리합니다.참고: 심장 관류와 호환되는 한 다른 마취 방법을 사용할 수 있습니다. 동물이 의식이 없는 후에는 퍼의 간섭을 방지하기 위해 70%의 에탄올로 복부 측을 스프레이하십시오. 피부 가위를 사용하여 복강의 중간선에서 시작하여 피부, 근막 및 근육 층을 자르고 흉부 구멍을 뚫고 내부 장기를 노출시합니다. 흉골을 들어 올리고 양쪽에 다이어프램과 늑골 케이지를 잘라 심장과 폐를 노출하기 위해 집게로 xiphoid 과정을 잡아. 가위로 흉곽의 왼쪽과 오른쪽에 있는 갈비뼈를 절단하여 흉곽을 제거합니다. 이 수지의 누출 귀착될 것 이다 간 손상 하지 않도록 여분의주의. 직선 집게를 사용하여, 간쪽으로 심장을 당기고 오른쪽 아트리움을 잘라. 퍼강성 관류 펌프에 연결된 나비 바늘(23G)을 왼쪽 심실에 삽입합니다. 행크스 균형 소금 용액 (HBSS) 및 헤파린 (마우스 체중 1 U /g)와 마우스 를 트랜스카디에 퍼퓨즈합니다. 5 mL /분의 관류 비율로 3 분 동안 perfuse.참고: 마우스가 올바르게 침투하는 경우 내부 장기는 창백해지고 특히 간이 창백해집니다. 대신 폐가 하얗게 변하면 바늘이 오른쪽 심실로 삽입되어 재배치되어야 합니다. 관류 후, 마우스는 멸종되고 코 콘과 이소플루란에서 제거 될 수있다. 이소플루란 펌프를 끕니다. 수지 주입 – 담즙 시스템 수지 주조마우스를 해부 현미경으로 이동시키고, 복부위로, 꼬리를 실험자쪽으로 향하게 하고, 실험자로부터 멀리 향한다. 관심의 해부학적 랜드 마크는 그림 2A에 묘사되어 있습니다. 장자를 측면으로 이동하여 열등한 베나 카바(도 2A)를 찾습니다. 스프링 가위를 사용하여 열등한 베나 카바에서 작은 트랜스버라시드 절개를 하여 간 혈관 압력의 방출을 허용합니다(도 2Bi). 1.2.4- 1.2.6 단계에 설명된 바와 같이 일반적인 담관 및 포탈 정맥을 노출한다. 인산염 완충식식염(PBS)-젖은 면봉을 사용하여 장과 췌장을 오른쪽(실험자의)으로 이동합니다. PBS 젖은 면봉을 사용하여 간 복부면을 심장쪽으로 뒤집어 내장 표면과 히어 영역을 노출시합니다. 췌장을 가로질러 장으로 흐르는 일반적인 담관을 찾아오디의 괄약근 (그림 2Bii, 노란색 점선으로 윤곽을 가진 일반적인 담관, 오디의 괄약근을 가리키는 검은 화살촉).참고: 간이 PBS와 함께 뿌려시면 간이 시술 내내 촉촉한지 확인하십시오. 직선 집게를 사용하여 일반적인 담관에서 주변 조직 (면적 ~ 5mm)을 지웁니다. 일반적인 담관(그림 2Bii) 아래에 실크 봉합실(크기 4-0, 0.17mm, 3~5cm 길이)을 놓고 일반적인 담즙 덕트(그림 2Biii)주위에 느슨한 오버핸드 매듭을 묶습니다.참고: 히어 영역과 오디의 괄약근 사이의 중간 및 포탈 정맥에서 어느 정도 떨어진 곳에서 매듭을 위한 영역을 선택하여 봉합사가 일반적인 담관 주위에 조여진 후에는 포털 정맥 주입을 방해하지 않습니다. 일반적인 담관에 대해 스프링 가위를 평평하게 잡고 일반적인 담즙 덕이 오디의 괄약근 옆에 췌장과 내장에 들어가는 지점에서 일반적인 담관에 경사 절개를 합니다. (그림 2Biv), 노란색 점선은 검은 화살촉에 의해 강조 오디 지역의 괄약근을 간략하게 설명합니다.).참고: 이것은 중요한 단계입니다. 경사를 만들고 반적 컷이 아닌 절개를 한다. 담관은 끊어지지 마십시오. 전체 담관을 절단하면 튜브를 삽입하는 것이 매우 어렵습니다. 사용하기 직전에 노란 수지 의 1 mL을 경화제의 50 μL (1 mL 주사기를 채우고 비우는 것)와 혼합하고 수지로 1 mL 루어 주사기를 채웁니다 – 경화 제 혼합물. 채워진 주사기를 튜빙(1세트)과 연결합니다. 플런저를 눌러 튜브를 완전히 채웁니다. 수지/경화제는 튜브 끝에서 드립을 혼합해야 합니다.참고: 주사기와 튜빙의 거품을 피하고 제거하여 최상의 결과를 제공합니다. 집게를 사용하여 일반적인 담관 절개 주변 영역을 곧게 펴고 관도(그림 2Bv)의 개구부에 튜브를 삽입하고 담관의 등쪽을 향해 베벨 팁의 가장 긴 가장자리가 아래쪽으로 삽입합니다. 이 방향을 사용하면 수지가 위쪽으로 향하고 있는 튜브 개구부를 덕트(그림 2Bv)로 종료할 수 있습니다. 실크 실 매듭을 조여 서 일반적인 담관 내부의 튜브를 고정합니다(그림 2Bvi). 수지를 일반적인 담관에 주입합니다. 담낭과 개별 간 엽을 관찰하십시오. PBS 젖은 면봉으로 간을 마사지하여 수지를 똑같이 퍼뜨리세요. 수지 로 채워진 담관의 말단 가지 (야생 형 마우스)는 간 표면에서 희미하게 볼 수 있습니다.참고: 간을 채우는 예상 시간은 30-100s입니다. 수지의 점이 간 표면에 나타날 때 수지 주입을 중지 (도 2Ci, 파란색 화살촉) 또는 저항이 충족 될 때.참고: 수지 경화제를 추가한 후 수지가 강해지기 시작하기 때문에 가능한 한 빨리 작업합니다. 경화제를 첨가하는 작업 시간은 약 15분입니다. 일반적인 담관에서 잡아내어 튜브를 제거하고 수지가 누출되는 것을 방지하기 위해 집게를 사용하여 실크 매듭을 빠르게 조입니다. 실크 봉합사의 느슨한 끝을 잘라, 그래서 그들은 포털 정맥 주입을 방해하지 않습니다. 수지와 남은 수지가 들어 있는 튜브를 유해 폐기물에 넣고 바늘을 날카로운 폐기물로 처리합니다. 수지 주입 – 포털 정맥 수지 주조 직선 집게를 사용하여 간으로 들어가는 입구에서 약 2cm 의 주변 조직에서 포털 정맥 (면적 ~5mm)을 지웁니다. 포털 정맥(도 2Cii)의 클리어 영역 아래에 실크 봉합사 실(크기 4-0, 0.17 mm, 3~5cm 길이)을 배치하고 느슨한 오버핸드 매듭(도 2Cii)을 묶습니다. 간 및 매듭에 대한 포털 정맥 에서 종방향 절개를 합니다(도 2Ciii). 녹색 수지의 1mL을 경화제의 50 μL(1mL 주사기를 채우고 비우는 것)과 섞어 수지 경화제 혼합물로 1mL 루어 주사기를 채웁니다. 채워진 주사기를 튜브와 연결합니다(>P30 마우스의 경우 #2, <P30 마우스의 경우 새로운 세트 #1)을 설정합니다. 플런저를 눌러 튜브를 완전히 채웁니다. 수지가 튜브 끝에서 떨어지는지 확인하십시오.참고: 주사기와 튜빙의 거품을 피하고 제거하여 최상의 결과를 제공합니다. 집게를 사용하여 주변 조직을 실험자쪽으로 당겨서 포탈 정맥을 곧게 펴고 배의 등쪽을 향해 베벨 팁의 가장 긴 가장자리로 튜브를 삽입합니다(도 2Ciii). 실크 실을 조여 포털 정맥의 튜브를 고정합니다. 수지를 포털 정맥에 주입합니다. 수지로 가득 혈관을 관찰. PBS 젖은 면봉으로 간을 마사지하여 수지(그림 2Civ)를 동등하게 퍼뜨리세요. 모든 혈관이 채워지면 수지 주입을 중지 (포털 정맥의 끝은 간 주변에서 볼 수 있습니다) 또는 저항이 충족 될 때.참고: 경화제를 추가한 후 수지가 굳어지기 시작한 후 빠르게 작업합니다. 경화제를 첨가하는 작업 시간은 주사 세트#1에 대해 약 15분, 주사 세트 #25분 #2.입니다. 튜브를 포털 정맥에서 꺼내서 튜브를 제거하고 집게를 사용하여 실크 매듭을 빠르게 조이면 수지가 누출되는 것을 방지합니다. 수지와 남은 수지가 들어 있는 튜브를 유해 폐기물에 넣고 바늘을 날카로운 폐기물로 처리합니다. 간 해부 및 고정주변 조직과 횡격막에서 절단하여 간 전체를 해부하십시오. 복부 면이 위로 향하고 등쪽이 원추형 관의 벽에 놓여 있는 빈 50mL 원추형 튜브에 간 전체를 부드럽게 배치하여 간 변형을 방지합니다. 수지가 완전히 굳어지도록 원문 튜브를 4°C에서 수평으로 하룻밤 동안 저장합니다.참고: 간을 맞출 수 있을 만큼 큰 용기는 50mL 원원관 대신 사용할 수 있습니다. 평평한 바닥 용기를 사용하면 간이 변형되지 않을 가능성이 높아집니다. 간을 개별 로브로 분리합니다. 마이크로CT 분석(1.4.4-1.4.5) 또는 품질 관리(1.4.6-1.4.8)에 사용될 로브를 선택한다. 선택적으로 개별 로브로 분리하지 않고 광학 클리어링 및 microCT 모두에 전체 간을 사용합니다.참고: 담즙 및 혈관 시스템의 간 건축은 각 엽마다 다르며, 따라서 일치하는 엽 분석이 필요합니다. 광학 클리어링은 마이크로CT 스캐닝을 방해하지 않으며 품질 관리에 사용되는 로브(들)는 이후에 microCT로 스캔할 수 있습니다. 반대로, microCT로 스캔한 샘플은 비교를 위해 광학적으로 지울 수 있습니다. 전체 간 분석이 가능합니다. 야생형 마우스(C3H/C57bl6 유전배경)에서 오른쪽 내측 엽은 수지 주사에 의해 먼저 채워져 있어 가장 높은 재현성을 가진 미세 CT 분석에 적합한 엽입니다. 왼쪽 측면 엽은 가장 큰 엽, 따라서 사출 품질에 대 한 사전 화면 간단. 품질 관리 및 microCT 스캐닝에 사용되는 로브(또는 전체 간)의 선택은 동물 모델 및 연구 질문에 의존한다. 통풍이 잘 되는 후드에서 포름알데히드 용액(튜브당 10~20mL)을 준비합니다. 마이크로CT에 사용되는 로브를 4°C에서 하룻밤 사이에 4% 포름알데히드로 고정하고 PBS(튜브당 10~20mL)로 한 번 세척합니다. 별도의 용기에 포름알데히드 폐기물을 수집합니다. 단기 저장을 위해 PBS에 간 엽을 4°C로 유지하거나 장기 보관을 위해 70% 에탄올을 보관하십시오. 섹션 2: 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영으로 진행합니다.주의: 포름알데히드는 삼켜지거나 흡입되거나 피부와 접촉하면 급성 독성을 유발합니다. 포름알데히드는 인화성 액체및 증기입니다. 그것은 심한 피부 화상과 눈 손상을 일으킵니다. 알레르기 성 피부 반응을 일으킬 수 있습니다. 흡입 하는 경우 치명적인 (농축 또는 분말). 호흡 자극을 일으킬 수 있습니다. 유전적 결함을 유발하는 것으로 의심됩니다. 암을 일으킬 수 있습니다. 장기 (눈, 중추 신경계)에 손상을 입힙니다. 예방 명령문 – 열, 뜨거운 표면, 불꽃, 화염 및 기타 점화 원을 멀리하십시오. 금연. 보호 장갑과 보호복을 착용하십시오. 유출의 경우 오염 된 모든 옷을 즉시 벗습니다. 피부에 닿으면 오염된 부위를 물로 헹구세요. 흡입하는 경우 : 신선한 공기에 사람을 제거하고 편안하게 호흡을 모니터링합니다. 즉시 독 센터 / 의사에게 전화하십시오. 눈에 있는 경우: 몇 분 동안 물로 눈을 헹구세요. 존재하고 가능한 경우 콘택트 렌즈를 제거하십시오. 품질 관리를 위해, 나머지 로브 (적어도 하나)를 50 % 메탄올 (탈온 화 된 물과 혼합)을 최소 4 시간 동안 수정하고 실온에서 흔들면 실온에서 100 % 메탄올 밤새 흔들수 있습니다. 별도의 용기에 메탄올 폐기물을 수집합니다.주의: 메탄올은 삼키거나 흡입하거나 피부와 접촉하면 급성 독성을 유발합니다. 메탄올은 인화성 액체 및 증기입니다. 보호 장갑과 옷을 착용하십시오. 취급 할 때 호흡을 피하고 화재와 열을 멀리하십시오. 사용 후 피부를 철저히 씻어 내십시오. 유출의 경우 오염 된 모든 옷을 즉시 벗습니다. 물로 피부를 헹구는 다. 흡입하는 경우 : 신선한 공기에 사람을 제거하고 호흡에 대한 편안함을 유지합니다. 흡입, 삼킨 또는 노출된 경우 독센터/의사에게 전화하십시오. 통풍이 잘 되는 후드에서 벤질 알코올과 벤질 벤조아테(BA: BB, 1:2) (로브 당 5-10mL)를 준비한다. 간 엽을 BABB 용액을 함유하는 15- 또는 50mL 폴리프로필렌 튜브(로브의 크기에 따라 다름)에 놓습니다. 투명해질 때까지 실온에서 흔들리십시오. 이 단계는 로브의 크기에 따라 2-16 h 사이걸릴 수 있습니다.참고: BABB 솔루션은 특정 유형의 플라스틱을 용해합니다. 폴리프로필렌 튜브 또는 유리 용기에 샘플을 보관하는 것이 안전합니다.주의: 벤질 벤조아테는 삼킬 때 급성 독성을 유발할 수 있습니다. 그것은 오래 지속 효과 수 생 생활에 독성. 주의 사항 : 취급 후 피부를 철저히 씻으십시오. 삼켜지거나, 피부에 닿거나, 흡입할 때는 유해합니다. 연기/증기를 호흡하지 마십시오. 취급 후 손을 철저히 씻으십시오. 이 제품을 사용할 때는 먹거나 마시거나 담배를 피우지 마십시오. 삼킨 경우 – 통풍이 잘되지 않는 경우 독 센터 / 의사에게 전화하십시오. 유출을 수집합니다. 승인된 폐기물 처리 공장에 내용/컨테이너를 폐기합니다. 주사의 품질을 검사합니다. 잘 주입된 간만 microCT로 스캔해야 합니다. 2. 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 샘플 준비 증류수 100mL와 아가로즈 파우더 1g을 혼합하여 1% 아가로즈 젤을 준비합니다. 혼합물을 전자레인지에 넣고 아가로즈 파우더가 녹을 때까지 용액을 끓입니다. 간 시료의 열 손상을 피하기 위해 1% 아가로즈 젤을 ~40°C로 부드럽게 합니다. 15mL 원문 튜브에 관심 있는 로브(들)를 놓고 1% 아가로즈 젤로 튜브의 총 부피의 약 2/3으로 채우십시오. 이 단계는 CT 측정 중에 원치 않는 샘플 모션을 최소화합니다. CT 측정참고: 다음 단계는 CT 장치에 따라 다르며 특정 설정 및 작업은 다른 CT 장치 및 제조업체에 따라 다를 수 있습니다. 이 프로토콜에서 사용되는 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 스캐너에는 CT 측정을 위한 나노 포커스 X선 튜브(180kV/15 W) 및 평면 패널 다이내믹 41|100(4048 px x 4048 px, 픽셀 크기 100mm+binning 2)가 장착되어 있었다. CT 장치의 회전 단계에 시료와 함께 15mL 원추형 튜브를 장착하고 적어도 1h의 측정 챔버에 열적으로 적응할 수 있도록 한다. 샘플이 열적으로 조정되면 FOV(시야)에서 샘플링을 중심으로 합니다. 소스 시료 및 시료 검출기 거리(SSD, SDD)를 최적화하여 충분한 복셀 분해능, 예를 들어 성인 뮤린 간 샘플의 경우 12μm 또는 <P30 간용 6.5 μm, FOV치수(사전 지정된 하드웨어용) 24.3mm × 24.3mm 및 13.2mm × 13.2mm에 도달한다. CT 장치 제조업체의 권장 사항에 따라 획득 매개 변수(예: 전압 및 전류, 노출, 비닝, 평균)를 설정하여 충분한 수준의 검출된 신호에 도달합니다. 이러한 매개 변수는 CT 장치에 종속될 뿐만 아니라 샘플에 따라 다르며 각 샘플에 최적화되어야 합니다. Hankeova 외.9에서는 80kV 가속 전압, 160 μA 가속 전류, 400ms 노출 시간 및 2000 개의 이미지가 설정되었습니다. CT 측정을 시작합니다. 전용 토모그래픽 재구성 소프트웨어를 사용하여 CT 데이터를 재구성합니다. 3. 분석 및 데이터 세분화 참고: 다음 단계는 이미지 처리 소프트웨어에 따라 달라집니다. 특정 설정 및 작업은 사용되는 소프트웨어에 따라 다를 수 있습니다. CT 데이터 로드: > 가져오기 > 파일 을 선택합니다. 추가 선택은 처리할 CT 데이터의 특정 형식에 따라 달라집니다. 상단 패널의 함수 Surface 측정 을 사용하여 전역 임계값을 사용하여 데이터의 수지를 분할합니다. 대화 창에서, 빨간색 “Isovalue” 선의 위치를 수지 채워진 용기(즉, 제시된 “미리 보기 패널”에서 노란색 선으로 포괄)로 분할하여 히스토그램 평가를 사용하여 임계 값을 결정합니다(그림 3A). 왼쪽 패널에서 모듈 만들기 ROI를 볼륨/CAD/메시에서 선택하여 수지로 채워진 용기의 관심 영역(ROI)을 만듭니다. 대화 상자 창에서 솔리드에서 ROI 만들기 옵션을 사용하여 처리된 볼륨의 이름을 선택하고 확인합니다. 이 ROI의 백그라운드 영역에서 노이즈 클러스터의 잘못된 세분화를 제거합니다. 오른쪽 패널에 이 ROI를 표시하고 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 모듈 분할 ROI를 선택합니다. 대화 상자 창에서 최소 볼륨 [복셀] 매개 변수를 설정하여 모든 노이즈 입자를 제외합니다-이 값은 실험 및 데이터 종속이며 각 샘플을 분석하도록 최적화해야 합니다(그림 3B). 수지 주조 ROI의 아티팩트없이 부드럽고 연속적이며 견고한 운하 마스크를 만듭니다 ( 예 : 기포 또는 수지 누출의 존재) . 왼쪽 패널에서 모듈 스무딩을 사용하여 스무딩 강도 매개 변수를 1 또는 2로 설정합니다(개별 데이터에 따라 값이 높을수록 특히 미세 구조를 처리할 때 모델 변형으로 이어질 수 있음). 필요한 경우 이 프로세스를 두 번 실행합니다(그림 3C). 분할된 수지 마스크의 개별 관 시스템을 식별하고 분리합니다. CT 데이터에서 더 높은 강도 값을 가진 더 많은 흡수성 수지(일반적인 담관 주입에 사용되는 노란색 수지)로 채워진 시스템에 대해 별도의 ROI를 만듭니다. 3.2 단계에서 설명된 절차를 따르십시오. (그림 3Di). 새로운 ROI 및 수지 마스크 ROI를 표시하고, 마우스 오른쪽 클릭 및 빼ROI(S) 를 선택하고 수지 마스크 ROI에서 새로운 ROI를 빼서 남은 관 계통에 대한 새로운 ROI를 만듭니다(그림 3Dii, iii). 다른 소프트웨어에서 후속 처리를 위해 운전자 선호도에 따라 두 관 형 시스템에 대한 결과 ROI를 다양한 형식으로 내보냅니다. 또한 볼륨 그래픽 소프트웨어에서 결과 ROI를 처리하여 최종 시각화를 이미지 또는 비디오 형태로 내보냅니다.