实验性自身免疫性葡萄膜炎：眼内炎症小鼠模型
概要
在本报告中，我们提出了一种协议，允许研究人员生成眼内葡萄膜炎的小鼠模型。通常被称为实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU），这个已建立的模型捕获了人类疾病的许多方面。在这里，我们将描述如何使用几个读数来诱导和监测疾病进展。
Abstract
实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）是由免疫细胞对自身抗原的反应驱动的。这种非感染性眼内炎症性疾病模型的许多特征概括了影响人类的后葡萄膜炎的临床表型。EAU已被可靠地用于研究新型炎症疗法的疗效，其作用方式，并进一步研究支持眼内疾病疾病进展的机制。在这里，我们提供了关于C57BL / 6J小鼠EAU诱导的详细方案 – 这是使用最广泛的具有这种疾病易感性的模式生物。疾病严重程度和进展的临床评估将通过眼底镜检查、组织学检查和荧光素血管造影进行。诱导程序包括皮下注射含有来自眼蛋白间光感受器类视黄醇结合蛋白（也称为视黄醇结合蛋白 3）的肽 （IRBP1-20）、完全弗氏佐剂 （CFA） 的乳剂，并补充杀死 结核分枝杆菌。 在颈部后部注射这种粘性乳剂，然后腹膜内注射 百日咳博德特 氏菌毒素。在症状发作（第12-14天）和全身麻醉下，拍摄眼底镜图像以通过临床检查评估疾病进展。这些数据可以直接与较晚的时间点和疾病高峰期（第20-22天）的数据进行比较，并分析差异。同时，该协议允许研究人员使用荧光素血管造影评估血管通透性和损伤的潜在差异。EAU可以在其他小鼠品系中诱导 – 野生型或转基因 – 并与新疗法相结合，为研究药物疗效和/或疾病机制提供灵活性。
Introduction
该协议将演示如何通过在乳化佐剂中单次皮下注射视网膜抗原来诱导C57BL / 6J小鼠中的实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）。监测和评估疾病进展的方法将通过眼底成像和组织学检查进行详细说明，并在其中概述测量参数。此外，还将讨论荧光素血管造影，这是一种检查视网膜血管结构和通透性的技术。
该EAU模型概括了人类非感染性后葡萄膜炎在临床病理学特征以及驱动疾病的基本细胞和分子机制方面的核心特征。EAU由自反应CD4 + T淋巴细胞的Th1和/或Th17亚群介导，如过继转移实验和IFNγ耗尽小鼠所示1。我们对这些细胞在葡萄膜炎中潜在作用的大部分理解来自研究EAU2，其中在视网膜组织内检测到Th1和Th17细胞3。通常，EAU被用作临床前模型来评估新疗法在减轻疾病方面的效用。成功调节EAU疾病的治疗方法在临床上显示出一定的疗效，并达到了FDA批准的地位。例如一组免疫调节药物，例如T细胞靶向疗法：环孢素，FK-506和雷帕霉素4，5，6。最近，在该模型中还探索了针对新途径的干预措施，以研究对疾病结果的机制和影响。这些包括通过染色质读取器Bromodomain末端外（BET）蛋白和P-TEFb抑制剂靶向转录调节3。此外，更传统的方法（如VLA-4抑制剂）最近已证明通过调节效应CD4 + T细胞抑制EAU7。此外，还发现用 RORγt 反向激动剂 TMP778 靶向 Th17 细胞可显着抑制 EAU8。此外，该模型为研究视网膜中的慢性自身免疫性炎症以及伴随的潜在机制（如淋巴细胞启动）提供了机会。
EAU临床前研究的主要读数是通过进行视网膜眼底镜成像进行临床评估，较少通过光学相干断层扫描（OCT）评估视网膜完整性。然后在终止时通过流式细胞术进行视网膜组织病理学评估和视网膜细胞的免疫表型。眼底镜检查是一种易于使用的实时成像系统，可以对整个视网膜进行快速且可重复的临床评估。对于免疫组织化学评估，这些技术基于视网膜切片的制备，使我们能够研究炎症和结构损伤程度的组织结构9。该协议将概述所有所用技术的评估标准和常规评分系统。使用眼底镜成像记录的损伤程度通常与组织学变化密切相关。这种监测和评估疾病严重程度的双重方法提供了更高的灵敏度和更可靠的测量结果。
EAU是一种成熟的常用模型，用于免疫介导的眼病的临床前测试和调查。该模型可靠且可重复，疾病发病率>95%，并生成全面的数据，可用于验证或否定治疗眼内炎症性疾病的新疗法，这是全球工作年龄失明的主要原因10。
Protocol
Representative Results
Discussion
实验动物模型是研究疾病发病机制和新治疗范式临床前测试的必要工具。在当前的协议中，我们讨论了诱导，监测和评分EAU的方法，这是眼内炎症性葡萄膜炎的实验模型。当根据此处概述的方案执行所有程序时，该EAU模型具有超过95%的疾病发病率，并导致慢性单相EAU的发展。为了达到这一发生率水平，我们强调抗原制备和乳剂注射的重要性，这两者都在上面详细介绍。EAU在动物中的主要特征是视?…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
JG获得了UCL影响力学生奖学金和玫瑰树信托基金的资金，以支持CB。VC获得了Akari Therapeutics Inc.的研究合作资助。我们要感谢伦敦大学学院眼科研究所，生物服务部门，特别是Alison O’Hara女士和她的团队的技术支持。
Materials
| antisedan | ZOETIS, USA | for waking up | |
| Complete Freund’s Adjuvant; CFA | Sigma, UK | F5881 | for immunisation |
| Domitor | Orion Pharma, Finland | for anesthesia | |
| Flourescein | Sigma, UK | F2456 | for Angiography |
| IRBP1-20 | Chamberidge peptide, UK | peptide;antigen | |
| Ketamine | Orion Pharma, Finland | for anesthesia | |
| Micron III | Phoenix Research, USA | for fundoscopy | |
| Mouse Serum | Sigma, UK | M5905 | for immunisation |
| Mycobacterium terberculosis | Sigma, UK | 344289 | for immunisation |
| Pertussis Toxin | Sigma, UK | P2980 | for immunisation |
| phenylephrine hydrochloride 2.5% | Bausch & Lomb UK | PHEN25 | for dilation |
| Tropicamide 1% | SANDOZ | for dilation | |
| Viscotears | WELDRICKS Pharmacy, UK | 2082642 | for eye lubrication |
参考文献
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