Эта работа представляет собой протокол для выполнения стереотаксической, нейрохирургической имплантации микроэлектродных массивов в общей мармосет. Этот метод специально позволяет электрофизиологических записей в свободно себя животных, но может быть легко адаптированы к любой другой аналогичный нейрохирургического вмешательства в этом виде (например, канюля для введения наркотиков или электродов для стимуляции мозга).
Marmosets (Callithrix jacchus) являются небольшие нечеловеческие приматы, которые набирают популярность в биомедицинских и доклинических исследований, в том числе неврологии. Филогенетически, эти животные гораздо ближе к человеку, чем грызуны. Они также отображают сложное поведение, включая широкий спектр вокализаций и социальных взаимодействий. Здесь описана эффективная стереотаксическая нейрохирургическая процедура имплантации записывающих электродных массивов в общей мармосет. В этом протоколе также подробно описаны предоперационные и послеоперационные шаги по уходу за животными, которые необходимы для успешного выполнения такой операции. Наконец, этот протокол показывает пример локального потенциала поля и записи активности шипов в свободном процессе, который ведет себя в сурке через неделю после хирургической процедуры. В целом, этот метод дает возможность изучить функцию мозга в бодрствовании и свободно ведет себя мартыны. Тот же протокол может быть легко использован исследователями, работающими с другими мелкими приматами. Кроме того, он может быть легко изменен, чтобы другие исследования, требующие имплантатов, таких как стимулирование электродов, микроинъекций, имплантация optrodes или руководство канюли, или абляции отдельных регионов ткани.
Общие мартыцы (Callithrix jacchus) получают признание в качестве важного модельного организма во многих областях исследований, в том числе неврологии. Эти новомировые приматы представляют собой важную дополнительную модель животных как для грызунов, так и для других нечеловеческих приматов (NHPs), таких как макака-ресус. Как и грызуны, эти животные маленькие, легко манипулировать, и относительно экономичным для ухода и породы1,2,3,4, по сравнению с более крупными NHPs. Кроме того, эти животные имеют склонность к побратимству и высокой плодовитости по сравнению с другими NHPs1,2,3. Еще одно преимущество marmoset имеет над многими другими приматами являетсято,что современные инструменты молекулярной биологии3,4,5,6,7 и секвенированный геном2 ,3,4,5,8 были использованы для их генетической модификации. Оба стук-в животных, использующих lentivirus5, и нокаут животных, использующих цинк-палец nucleases (ЗФН) и транскрипционный активатор-как эффектитор nucleases (TALENS)7, дали жизнеспособных животных-основателей.
Преимущество по отношению к грызунам в том, что сурки, какприматы, филогенетически ближе к людям3,5,6,9,10,11. Как и люди, мартыны являются суточные животные, которые зависят от высокоразвитой визуальной системы, чтобы направлять большую часть их поведения10. Кроме того, мартынейские сурки проявляют поведенческую сложность, в ключая широкий спектр социального поведения, таких как использование различных вокализаций3,что позволяет исследователям решать вопросы, которые невозможны у других видов. С нейронаучной точки зрения, мартынес имеют лиссенцефалии мозги, в отличие от более часто используемых ресус макаки9. Кроме того, мармосеты имеют центральную нервную систему, похожую на человека, включая более высокоразвитую префронтальную кору9. Вместе все эти характеристики позиционировать сурков как ценную модель для изучения функции мозга в области здоровья и болезней.
Общий метод изучения функции мозга предполагает имплантацию электродов в анатомически конкретных местах с помощью стереотаксической нейрохирургии. Это позволяет хронической записи нейронной активности в различных целевых областях бодрствуя и свободно себя животных12,13. Стереотаксическая нейрохирургия является незаменимым методом, используемым во многих направлениях исследований, так как она позволяет точно ориентироваться на нейроанатомические области. По сравнению с макаки и грызунов литературы, Есть меньше опубликованных исследований, описывающих стереотаксической нейрохирургии, характерной для сурка, и они, как правило, обеспечивают редкие детали шагов, участвующих в операции. Кроме того, те, с более подробной основном сосредоточиться на процедурах для электрофизиологии записи в голову сдержанных животных14,15,16,17.
Для того, чтобы способствовать более широкому внедрению сурков в качестве образцового организма в исследованиях неврологии, настоящий метод определяет конкретные шаги, необходимые для успешной стереотаксической нейрохирургии у этого вида. В дополнение к имплантации записывающих массивов, как описано в настоящем методе, та же техника может быть адаптирована для многих других экспериментальных целей, включая имплантацию стимулирующих электродов для лечения заболеваний18 или причинно-следственной связи поведение цепи19; имплантация направляющих канюли для извлечения и количественной оценки нейротрансмиттеров20, инъекций реагентов, в том числе для индуцирования моделей заболеваний12 или для исследования трассировки цепи15; абляция отдельных областейтканей 21; имплантация оптободов для оптогенетических исследований22; имплантация оптических окон для коркового микроскопического анализа23; и имплантация электрокортикографических (ECoG) массивов24. Таким образом, общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы наметить хирургические шаги, участвующие в имплантации микроэлектродных массивов для хронических электрофизиологических записей в свободно мягоковых смарт-мили.
Эта работа дает подробное описание процедур, связанных с имплантацией микроэлектродных записывающих массивов в мозге сурка. Этот же протокол можно легко использовать при имплантации электродов, будь то домашние или коммерчески доступные, в других небольших приматов. Кроме того, он мо?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Бернардо Луиса за техническую помощь в съемках и монтаже. Эта работа была поддержана Институтом Сантоса Дюмона (ISD), Министерством образования Бразилии (MEC) и Coordena’o de Aperfei’oamento de Pessoal de N’vel Superior (CAPES).
Equipments | |||
683 Small Animal Ventilator | Harvard Apparatus, Inc. | 55-0000 | |
Anesthesia Assembly | BRASMED | COLIBRI | |
Barber Clippers | Mundial | HC-SERIES | |
Dental Drill | Norgen | B07-201-M1KG | |
Homeothermic Heating Pad and Monitor | Harvard Apparatus, Inc. | 50-7212 | |
Marmoset Stereotaxic Frame | Narishige Scientific Instrument Lab | SR-6C-HT | |
Patient Monitor and Pulse Oximeter | Bionet Co., Ltd | BM3 | |
Stereotaxic Micromanipulator | Narishige Scientific Instrument Lab | SM-15R | |
Surgical Microscope | Opto | SM PLUS IBZ | |
Instruments | |||
Allis tissue forceps | Sklar | 36-2275 | |
Alm Retractor, rounded point, 4×4 teeth | Rhosse | RH11078 | |
Angled McPherson Forceps | Oftalmologiabr | 11301A | |
Curved Surgial Scissors | Harvard Apparatus, Inc. | 72-8422 | |
Curved Tissue Forceps | Sklar | 47-1186 | |
Delicate Dissection forceps | WPI | WP5015 | |
Dental Drill Bit | Microdont | ISO.806.314.001.524.010 | |
Essring Tissue Forceps | Sklar | 19-2460 | |
FG 1/4 Dental Drill Bit | Microdont | ISO.700.314.001.006.005 | |
Halsey Needle Holder | WPI | 15926-G | |
Halstead Mosquito forceps | WPI | 503724-12 | |
Hemostatic Forceps, Straight | Sklar | 17-1260 | |
Jewler Forceps | Sklar | 66-7436 | |
McPherson-Vannas Optathalmic microscissor, 3 mm point | Argos Instrumental | ARGOS-4004 | |
Pereosteal Raspatory | Golgran | 38-1 | |
Scalpal Handle | Harvard Apparatus, Inc. | 72-8354 | |
Screwdrivers | Eurotool | SCR-830.00 | |
Sodering Iron | Hikari | 21K006 | |
Surgical Scissor | Harvard Apparatus, Inc. | 72-8400 | |
Toothed forceps | WPI | 501266-G | |
Disposables/Single Use | |||
1 ml sterile syringe with 26 G needle | Descarpack | 7898283812785 | |
130 cm x 140 cm surgical field, presterilized | ProtDesc | 7898467276344 | |
24G Needle, presterilized | Descarpack | 7898283812846 | |
50 cm x 50 cm surgical field, presterilized | Esterili-med | 110100236 | |
Cotton Tipped Probes, Presterilized | Jiangsu Suyun Medical Materials Co. LTD | 23007 | |
Cotton tipped Qutips | Higie Topp | 7898095296063 | |
Electrode Array | Home made | ||
Endotracheal tube without cuff, internal diameter 2.0 mm, outer diameter 2.9 mm | Solidor | 7898913077201 | |
Tinned copper wire, 0.15 mm diameter | |||
M1.4×3 Stainless steel screws | USMICROSCREW | M14-30M-SS-P | |
Medical Tape | Missner | 7896544910102 | |
Nylon surgical sutures | Shalon | N540CTI25 | |
Scalpal Blade, presterilized | AdvantiVe | 1037 | |
solder | Kester | SN63PB37 | |
Sterile Saline 0.9% | Isofarma | 7898361700041 | |
Sterile Surgical Gloves | Maxitex | 7898949349051 | |
Sterile Surgical Gown | ProtDesc | 7898467281208 | |
Surgical Gauze, 15 cm x 26 cm presterilized | Héika | 7898488470315 | |
Gelfoam | Pfizer | ||
Drugs/Chemicals | |||
0.25mg/ml Atropine | Isofarma | ||
10% Lidocaine Spray | Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda. | 7896676405644 | |
2.5% Enrofloxacino veterinary antibiotic | Chemitec | 0137-02 | |
Dexametasona Veterinary Anti inflammatory | MSD | R06177091A-00-15 | |
Hydrogen Peroxide | Farmax | 7896902211537 | |
Isoflourane | BioChimico | 7897406113068 | |
Jet Acrylic polymerization solution | Artigos Odontológicos Clássico | ||
Jet Auto Polymerizing Acrylic | Artigos Odontológicos Clássico | ||
Ketamine 10% | Syntec | ||
Lidocaine and Phenylephrine 1.8 ml local anesthetic | SS White | 7892525041049 | |
Povidone-Iodine solutiom | Farmax | 7896902234093 | |
Riohex 2% surgical Soap | Rioquímica | 7897780209418 | |
Silver Paint | SPI Supplies | 05002-AB | |
Tramadol chloride 50 mg/ml | União Química | 7896006245452 | |
Refresh gel (polyacrylic acid) | Allergan |