הקונפליקט חושי לטווח ארוך באופן חופשי להתנהג עכברים

כל ההליכים בבעלי חיים בעקבות תקנות בעלי חיים אוניברסיטת פריז דקארט. 1. התקן הרכבה הערה: המכשיר בשימוש פרוטוקול זה הוא מבנה דמוי הקסדה נעוצות גולגלות עכברים באמצעות headpost מושתל. באמצעות מדפסת תלת-ממד פוליפוני לבן אטום (חומצה לקטית) (PLA) פלסטיק, הדפסה באמצעות עיצוב מפרט הקבצים הניתנים כאן (ראה טבלה של חומרים) עבור התקן והן headpost.הערה: הממדים של ההתקן מוצגים באיור 1 והמידות של headpost באיור 2. מכשיר פסים כמו גם שאם הם להיות שנבדקו (איור 2א11). כדי להשיג את הדגם עם פסים, בעזרת לק שחור, צייר פסים אנכיים גדול 3 מ מ על פני השטח החיצוני של המכשיר. התנאי שאם אינו דורש כל שינוי המכשיר המודפס. 2. ניתוח ההשתלה Headpost כל החומרים המשמשים פרוטוקול זה מפורטים ברשימה חומרי המידע הנוסף. צעדים 2.7-2.9 שימוש את biomaterials הניתנים ההשתלה קיט (ראה טבלה של חומרים). להבטיח שימוש בכלים סטריליים, לארגן ניתוח ושחזור באזורים שונים. לאחר mastered, ההליך השרשה נמשכת כ- 30 דקות. על שיכוך כאבים, 30 דקות לפני תחילת הניתוח, subcutaneously להזריק הבופרנורפין (0.05 מ”ג/ק”ג), תחזיר את החיה בכלוב בבית שלה.הערה: תופעות כאבים של הבופרנורפין אחרונה כ 12 שעות, זמן רב לאחר סיום ההליך. מניסיוננו, עכברים לא מראים סימנים של מצוקה הקשורה להתערבות זו, אך מנה עוקבות של 0.05 מ”ג/ק”ג. הבופרנורפין מומלץ 24 שעות לאחר הניתוח. עזים ומתנגד החיה בתוך תא בגז איזופלוריין 2.5% – 3%. להמתין 3 דקות ולבדוק אם העכבר כראוי ומורדמת באמצעות התבוננות נשימה, חוסר תנועה בתוך החדר. להעביר את העכבר קונוס האף על שולחן ניתוחים עם כרית החימום, על-ידי צביטות מאמבטיה, לוודא שיש אין רפלקס הנסיגה ולאחר להוריד את איזופלוריין ל- 1.5%. לגלח את הראש של העכבר באמצעות מכונת גילוח חשמלית. כדי להשיג סביבה סטרילית, שפשפי האזור מגולח עם יוד פתרון ואחרי עם אלכוהול 70%. חזור על הליך זה פעמיים נוספות. להזריק לידוקאין הידרוכלוריד (2%, 2 מ”ג/ק”ג) מתחת לעור של הראש על הרדמה מקומית ולא לחכות 5 דקות בשביל האפקטים להתחיל. כדי למנוע נזק לעין עקב יובש, לכסות את העיניים של העכבר עם הוטרינר אופטלמולוגיות אקטואלי משחה. עם זוג מלקחיים בוטה, לתפוס העור בעורף, ועם זוג בוטה מספריים (או סכין), עושים חתך האורך של כ 1.5 ס מ כדי לחשוף את הגולגולת. בעזרת אזמל, לגרד קרום העצם. יש להיזהר לא לגרד חזק מדי, כפי הקיבעון של headpost יכולה להיות בסכנה אם הגולגולת מתחיל לדמם מעט. למרוח טיפת activator ירוק באמצע של הגולגולת. זה ישפר את הקיבעון של הצמנט על ידי הגדלת חדירות העצם. להכין את המלט: מערבבים כפית אחת (המסופק בערכה השרשה) של פולימר עם 5 טיפות של מונומר וטיפה אחת של catalyzer. בעזרת מברשת, למרוח כמות נדיבה של לערבב מלט בין למדא, bregma הגולגולת ציוני הדרך; במהירות מניחים את headpost על הבטון עם תנועה swiping הולך של למבדה bregma. לאחר headpost הושם, להחיל מחדש מלט יותר סביב החלק נחות על מנת להבטיח headpost כראוי מקלות בגולגולת. כדי להבטיח קיבוע נאות, ודא שהבטון מוחל בשפע שהוא מתייבש לפני שתמשיך לשלב הבא.הערה: באמצעות הליך זה הקיבעון, headpost לא ירד, לאפשר לבדיקות לטווח ארוך, חוזרות; בידיים שלנו, headpost להסרת היא < 10%. מכינים את תערובת שרף על-ידי החלת יחס אבקת-כדי-נוזל אשר מאפשרת עקביות חלקה של התערובת. להחיל את השרף שבו הונח צמנט, כמו גם בסביבה של headpost על מנת להגן על פני השטח שלו. המתן 3 דקות עבור שרף יבש ולסגור את העור מאחורי האוזניים monofilament בתפר. באמצעות מקלון צמר גפן, להחיל מדולל (10% – 20%) יודיפלור תמיסה לאזור המופעלים.הערה: ודא שהעור אינו נתקע שרף. כבה את ההרדמה ולמקם את החיה תחת אור אדום חם כדי למנוע היפותרמיה. המקום לחלח הידרוג ואוכל או מקור מים נוסף מבוסס ג’ל ברצפה של הכלוב. אין להשאיר את העכבר ללא השגחה עד שזה יחזור להכרה. ברגע החיה באופן מלא מתאושש מההליך (בדרך כלל, כדי h 1 לאחר 30 דקות), מקם אותו בכלוב עם קבוצות של שלושה או ארבעה לעורר אינטראקציות חברתיות. 3. התקן קיבוע 48 שעות לאחר הניתוח, תאבטח את המכשיר הראשי לפי הזמנה על גבי headpost. באמצעות זוג ברגים 1.2 מ מ, מברג (1.3 מ’מ הקסדצימאלי), יישר את החורים המכשיר פסים עם החורים headpost, למקם את הברגים ולאבטח אותם. כדי לתקן את התנאי העמדת פנים, הפוך את ההתקן, עם החלק האחורי (איור 1א’) של המכשיר פונה. לכיוון rostral, יישר את החורים המכשיר עם החורים headpost.הערה: מומלץ כי צעד זה להיעשות על ידי שני אופרטורים, שיחזיק את העכבר עם מעצורים בעכבר ביד אחת, בעוד האחר לאבטחת המכשיר headpost. אם הקיבעון נעשית על ידי מפעיל יחיד, ניתן להציב את המכשיר בעוד העכבר נמצא תחת גז הרדמה. ודא כי המכשיר מאובטח היטב, לא ניתן להסיר על ידי החיה כי המכשיר אינו חל לחץ ישירות על האף של העכבר, דבר העלול לגרום כאב, קושי לנשום, או עור פציעה.הערה: חשוב גם להבטיח שההתקן מוכנס באופן סימטרי על פני העכבר, כך עיניים מכוסות לחלוטין על ידי המכשיר הראשי. בדוק כי החיה לא מראים סימנים של מצוקה או כאב חריג. להשאיר את המכשיר על העכבר במשך 14 ימים. 4. בעלי חיים טיפול ומעקב לאחר חזרה בכלובים שלהם, עכברים תערוכת מסויימים חריגות בהתנהגות. בהתחלה, החיה עשויים להישאר וחלוש, נסה להסיר את ההתקן באמצעות לרדווד, אך זה צריך להפסיק אחרי השעה הראשונה. במהלך השעות הבאות, החיה בדרך כלל יציגו קשיים המכוונת עצמה בתוך הכלוב והוא מחפש מזון ומים. לכן, במהלך 48 שעות לאחר ההשתלה, לפקח על העכברים, מספקים גישה נוחה אל מים ומזון, על ידי הצבת שני ישירות על רצפת הכלוב, לדוגמה. לשמור על מעקב אחר של המשקולות של עכברים במהלך משך הזמן של הפרוטוקול. שוקל העכברים מיד לאחר ההשתלה, שוב כל ה 24 תשומת לב מיוחדת תינתן לבעלי-עונדת את המכשיר עם פסים, כפי שהם בדרך כלל חווים ירידה במשקל הגוף (1-2 גרם) במהלך ה 48 הראשון, אבל להתחיל לעלות במשקל בקצב נורמלי שוב הבאים באותה תקופה ראשונית (ראה איור 2ב’11). לאחר יומיים, צפויים עכברים לשוב הפקולטות הרגיל שלהם. בהתאם למערכת בשימוש במתקנים בעלי חיים, ההתקן עשויים למנוע גישה מזון ומים. להבטיח שהחיה היא בנוח בזמן אכילה ושתייה או להתאים את המערכת שחולק בהתאם.הערה: טווח תנועות ראש המיוצר על ידי בעלי החיים אחרי כמה ימים עם המכשיר על אינו משתנה על ידי ההתקן (ראה איור 211) (כלומר., טווח תנועות ראש המיוצר נשאר דומה תנועות ראש טבעי). כדי להבטיח המשך הרווחה של עכברים, להבטיח מעקב יומי ולהחיל את קנה המידה איכותי (טבלה 1) של רווחה בכל משך זמן של הפרוטוקול. להסיר עכבר של פרוטוקול מתמשך אם אחד או יותר מהקריטריונים הבאים חלים: עכברים שיש סך ציון גבוה יותר מאשר 4 נקודות בסולם איכותי הנ ל באופן מיידי לא ייכללו הניסוי (ראה טבלה 1). משנה התוצאה, אם העכבר לא להחזיר את המשקל ההתחלתי שלו אחרי 6 ימים, ההליך חייבים לעצור אותו המכשיר לא כראוי קבוע כדי headpost אם, למשל, headpost רועד כאשר נגע או חלק מתחילה לרדת. זה גורם את headpost לבוא מהראש של העכבר, כתוצאה מכך פסיקות בתהליך הלמידה, מה שמסביר למה ומארבי יומיות הכרחיות. כאשר העכבר יש את headpost שלה תלש במהלך כל חלק של הפרוטוקול. עקב הגולגולת הדימום קשור הניתוק, הניתוח לכירורג יש שיעור הצלחה נמוך ואינו שווה ניסיון. 5. הסרת ההתקן לאחר תקופת למידה (ב פרוטוקול זה, 14 ימים), הסר את ההתקן ועקוב אחר ההוראות אותו לגבי הקיבעון שלה (סעיף 3). ברגע הסרת ההתקן, מבחן העכברים עם ניסויים כגון בדיקות וידאו-oculography, או, למשל, עם במבחנה אלקטרופיזיולוגיה כפי שתואר לעיל11.הערה: ברגע המכשיר הוא המריא, עכברים חשופים בחזרה אל הסביבה, בלא הפרעה חזותית הרגילות. לכן, לבצע ניסויים שמטרתם לבחון את ההשפעה למידה של התקן זה ישירות לאחר הסרתו. 6-מפגשים וידאו-oculography הערה: וידאו-oculography הניסויים מתבצעים כדי להקליט את תנועות עיניים שנוצר בזמן להיות מסובבים את החיה בחושך (רפלקס vestibulo-העינים, וור) או על-ידי סיבוב הסביבה של החיה בעוד החיה עדיין (רפלקס optokinetic, OKR). כל עכבר נבדקה שני הרפלקסים האלה לפני ואחרי פרוטוקול הסתגלות. לקבלת פרטים נוספים אודות הגדרת הסרטונים-oculography, ראה דוחות שפורסמו בעבר12,13. על מנת habituate העכברים להקלטה מאופקת תנאים, יום לפני תחילת ההקלטות, במקום החיה על הצינור במרכזו של הפטיפון עבור 10minutes מבלי לבצע כל מבחן. לאבטח את העכבר על הפטיפון על-ידי ראש-מתקן אותו בעזרת ברגים מוכנס לתוך headpost. מניחים כיפה מסך המקיפים את החיה, לכבות את כל האורות בחדר למעט המקרן optokinetic.הערה: הקלטות וידאו-oculography לדרוש את החיה עדיין, עם עיניו פקוחות. ההפרעה הטלקהה ולשים החיה בחזרה על הכלוב שלה למקרה העכבר לא מרצון פקח את עיניו, או אם מראה העין מתדרדר במהלך להקלטות. ניסיון נוסף יכול להתבצע לאחר תקופה מנוחתו לפחות 12 שעות. להתחיל את OKR מלא-שדה גירוי (הקרנה דפוס נקודה לבנה) ואת רשומת במהירויות שונות מספר הכיוונים כיוון השעון השעון והן מונה. ברגע ההקלטות הסתיימו, להסיר את הכיפה. כדי שתוכל להקליט את הטייפ הזעיר בזפת כהה, חל ירידה של 2% פילוקרפין העיניים14. המתן לפחות 5 דקות על מנת לפעול ולהסיר אותו בעדינות באמצעות מקלון צמר גפן. פילוקרפין ישמור על התלמיד מכווץ עם גודל קבוע לאורך כל המדידות, המאפשר כימות הנכונה של התנועות בחושך. לכבות את כל האורות בחדר, להוסיף תיבה על גבי הפטיפון כדי לשמור את החיה על המגרש כהה. התחל את הטייפ הזעיר אופקי באמצעות sinusoidal זוויתי סיבובים סביב ציר אנכי עם תדרים שונים ו/או במהירויות שונות. לאחר סיום להקלטות, לחזור העכבר כלוב מואר כראוי עם מנורת אינפרא-אדום. החום יהיה למנוע היפותרמיה הנגרמת על ידי השפעות משניות מרחיב כלי דם פילוקרפין על גופו של העכבר.הערה: עקב החיה מרוסן, אולפן הקלטות לא יכולה להימשך יותר מ 90 דקות מתי הפעלות הבדיקה נוספים נדרשים, תן לשאר בעלי חיים במשך 24 שעות ביממה בין ההפעלות.