התאגדות של הליך ביופסיה בכבד שורדת בעכברים כדי להעריך Steatohepatitis אלכוהוליים (נאש) רזולוציה
概要
הגדרות קליני, ביופסיה של הכבד משמש כדי להעריך את שלבי steatohepatitis אלכוהוליים (steatosis, דלקת, hepatocyte מבצעים ו פיברוזיס). כאן, אנו ממחישים ביופסיה של הכבד שורדת בעכברים בהם ניתן להשתמש עבור ניתוחים היסטולוגית כדי לאפשר הערכה של סוכני טיפולית באופן יותר מיושר עם ניסויים קליניים.
Abstract
ניסויים קליניים הערכת טיפולים לטיפול steatohepatitis אלכוהוליים (נאש) לערב של הבסיס לבין סוף המחקר הכבד ביופסיה, והערכה של שיפור הקצה המחלה, שיקפה לעתים קרובות כאחוזים של כל זרוע טיפול זה משופר, החמירה. או נשאר ללא שינוי. מסורתי ללימודי טיפולים נאש בשם מכרסמים פרה מוגבלים לעיתים קרובות על ידי הידיעה הרמה של הכבד המחלה/נאש נוכח בתחילתו של התערבות טיפולית, במקום סידור אקראי של קבוצות הטיפול על הקצה למדידה בקלות כגון משקל הגוף, מצב מטבולית או דומה. כאן, אנו מתארים שיטה ביופסיה של הכבד במודל של דיאטה-induced נאש עכברים, להערכה של מחלה בסיסית כבד כדי לא לכלול עכברים כי לא התערוכה פיברוזיס, לחלק לא פחות חיות עם פיברוזיס דומה בין קבוצות הטיפול. רמות אלה ואז ניתן להשוות את רמות מסוף, התערבות שלאחר להבנה אמיתי של אפקטים תרופתי ויוו, ובכך יותר לשקף באופן מדויק את אסטרטגיות עיצוב הניסיון הקליני. העכבר כראוי מרדימים, שהוכנו עבור ניתוח שימוש בתנאים סטריליים. חתך קטן עשוי בבטן העליונה, לרוחב האונה השמאלית של הכבד הוא חשוף. טריז של הכבד הוא הוסר בניתוח, חתיכה בגודל דומה של ג’לטין שנספג זה את מקומו לעצור דימום. העכבר הוא בניתוח sutured, משודכים סגור, ישחזר לקדמותו תוך יום אחד. התהליך כולו לוקח 5-10 דקות לכל העכבר. כאן אנחנו להדגים את התועלת של הליך זה על-ידי מינוף את הביופסיה מחקר מקדים כדי להעריך את ההשפעה של דמוי גלוקגון פפטיד-1 (GLP-1) קולטן אגוניסט liraglutide על נקודות קצה נאש בעכברים.
Introduction
משקאות לא אלכוהוליים steatohepatitis (נאש) היא מחלת כבד מתקדמת, צורה חמורה יותר של מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD), זה הופך להיות יותר ויותר נפוץ עקב שיוך השמנת יתר וסוכרת סוג 2. ישנם אין טיפולים שאושרו NAFLD/נאש, או סמנים ביולוגיים שאושרו בקלות להעריך את התקדמות המחלה. נאש מאובחנת בהיסטולוגיה על-ידי הערכת דלקת, עודף שומנים בדם הכבד (steatosis), hepatocyte מבצעים ו-3,2,1,פיברוזיס4. בניסויים קליניים, אלה נקודות הקצה הם העריכו לפני המחקר במדגם הכבד שנאספו באמצעות ביופסיה, ומתוך ביופסיה של הכבד השני לאחר תקופה מסוימת לטיפול. לפיכך, האפקטיביות של הסוכן הבדיקה שקובעת באמצעות שינוי בפתולוגיה הכבד במקצועות עם בעבר זוהו/לכמת (קרי, ביופסיה מוכחת) נאש זה הם אקראי לקבוצות טיפול. אלה נקודות קצה היסטולוגית אותו משמשים לעתים קרובות במודלים מכרסמים, הערכת פוטנציאל הרפוי נאש במחקרים פרה, אבל רק בתוך הרקמה מסוף של עכברים לאללה ובכך ללא הבנה של מידת היעילות-בסיסית וחוסר יכולת כדי לשלוט על ההבדלים במצב מחלה בסיסית בין קבוצות הטיפול.
למרות 25% מהמבוגרים עם NAFLD הם בחזקת יש נאש המבוסס על רמות aminotransferase גבוהות בסרום, קיימות אין סופית שיטות אלטרנטיביות כדי לאשר נאש מלבד עדות היסטולוגית4. פותחו שיטות לא פולשנית, כגון שיטות רדיולוגים (אולטרסאונד, טומוגרפיה ו תהודה מגנטית) כדי לזהות steatosis הכבד, אבל השיטות האלה לא ניתן לאבחן נאש או לקבוע את השלב של פיברוזיס. Elastography ארעי מציע מודאליות פולשני מבטיח למדידת קשיות בכבד. זה הוכח להיות מדויקים המבדילים פיברוזיס בשלבים. עם זאת, הדיוק פוחתת עם גבוה מדד מסת הגוף (BMI), רקמת שומן. 5 זה בעייתי בשל רוב החולים נאש שלהיות מהשמנת יתר. מעבר הרלוונטיות הקלינית של גישות אלה, אף אחד האופנים האלה מנוצלים במחקרים פרה.
כדי להתגבר על זה, קבוצת המחקר של ד ר רוט יונתן היו הראשונים ליישם הליך ביופסיה של הכבד במודל עכבר Amylin נאש (כמו אידי אמין) של נאש-6,–7,–8. הם תיארו את תוקף ניבוי של הביופסיה עם דרגת המחלה נאש, קורלציה עם מחלה מטבולית. כאן נתאר בפירוט את ההליך ביופסיה של הכבד במודל כמו אידי אמין של נאש ואת השירות שלה בסביבה טיפולית, במיוחד כדי להעריך את היעילות של liraglutide.
Protocol
Representative Results
Discussion
כאן נתאר בפירוט ההליך ביופסיה בכבד עכבר תחילה מתוארת על ידי זיבה ואח10, להדגים את השירות שלה במודל של עכברים של נאש, הדומה הקודם דוחות6,9. הנוהל ביופסיה של הכבד הוא כלי חשוב להערכת פנוטיפ נאש מראש, שלאחר הטיפול, בצורה דומה לזו שבוצעה בניסויים קליניים טיפולית. הביופסיה מאפשר השוואה ישירה לכל נושא, קרי שהעכברים אותו ניתן להשתמש בשתי נקודות זמן. אנחנו גם להוכיח את פוטנציאל translational שלו. ב ניסוי קליני בנושאים נאש מוכחת ביופסיה, liraglutide elicited קצב תגובה 39% (חולים עם שיפור) ב- NAS, ואילו במחקר שלנו הבחנו שיעור למגיב 66% על NAS משופרת. יתר על כן, 26% מהחולים היה הציון פיברוזיס משופרת עם 9% החמרה, לעומת 14% ו- 36% בזרוע פלצבו, בהתאמה11. במחקר שלנו, הבחנו שיעור 17% שיפור עם טיפול liraglutide. השוואות אלה להדגיש את הכוח של בסיסית הכבד ביופסיה ואשר הבנה translational פוטנציאליים, לפחות עבור מחלקה זו של טיפולי.
זה קריטי כדי לקצור חתיכה גדולה מספיק של רקמת הכבד במהלך ההליך ביופסיה לנתח היטב את התכונות היסטולוגית, אבל גם לא גדול מדי של חתיכת כבד לסכן את תפקוד הכבד. הבחנו אפס-שיעורי התמותה עם הניתוח הזה, החיות הופיע שהחלמת באופן מלא בתוך יום אחד עם חידוש התנהגות אכילה נורמלית. לכן, הזמן בין ביופסיה, חניכה של המחקר התערבות הוא לא מוגבל על-ידי שחזור בעלי חיים אבל כבר נלקח מדגם עיבוד, ניתוח של אקראיות עוקבות.
ניצול הנוהל ביופסיה של הכבד כשיטת אישור של פיברוזיס לפני התערבות עזר להפחית את השתנות במחקר שלנו, המאפשר לנו לא לכלול עכברים זה לחלוטין לא לפתח מידה מסוימת של לייפת בעקבות הדיאטה בתדר נאש כמו אידי אמין. יתר על כן, זה שיפור היכולת שלנו להבין טוב יותר את ההשפעה של אפשרות שיפור נאש התערבות, לעומת רק לאחר דגימת כבד סופנית עם הציון נאש. עד טכניקות פולשני חדשות נוספות חקר, המקובלת, ביופסית הכבד הוא היחיד שהוכח דרך לקבוע נאש.
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים להכיר בהכרת תודה בסיוע לי סאלי, הולי Koelkebeck עבור המומחיות ברקמה אימונוהיסטוכימיה. המחברים גם תודה דונה Goldsteen ואת צוות מעבדה חיה משאבים (MedImmune, Gaithersburg, MD) לסיוע שלהם עם הליכים טכניים, גידול בעלי חיים וטיפול.
Materials
| Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
| 5-0 suture | Ethicon | J834G | |
| 7mm Wound Clips | Reflex | 203-1000 | |
| Absorbable gelatin sponge (GelFoam) | Pfizer | 09-0353-01 | Compressed, Any Size |
| Alcohol Prep Pad | VWR | 75856-902 | |
| Animal Clippers | Oster | 78005010002 | Size 40 Blade |
| Artificial Tears | Henry Schein | 048272 | Tube |
| Buprenorphine (Buprenex) | Reckitt Benckiser | NDC 12496-0757-5 | |
| Iodine Prep Pads | Nice Pak Products | C12400 | |
| Sterile Drapes | Stoelting | 50981 | |
| Surgical Gloves | Medline | 54720 |
参考文献
- Brunt, E. M., et al. Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and the histopathologic diagnosis in NAFLD: distinct clinicopathologic meanings. Hepatology. 53 (3), 810-820 (2011).
- Brunt, E. M. Pathology of nonalcoholic fatty liver disease. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 7 (4), 195-203 (2010).
- Kleiner, D. E., et al. Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 41 (6), 1313-1321 (2005).
- Diehl, A. M., Cause Day, C. Pathogenesis, and Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis. New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).
- Golabi, P., et al. Current complications and challenges in nonalcoholic steatohepatitis screening and diagnosis. Expert Reviews of Gastroenterology and Hepatology. 10 (1), 63-71 (2016).
- Roth, N. C., et al. Prediction of histologic alcoholic hepatitis based on clinical presentation limits the need for liver biopsy. Hepatology Communications. 1 (10), 1070-1084 (2017).
- Kristiansen, M. N., et al. Obese diet-induced mouse models of nonalcoholic steatohepatitis-tracking disease by liver biopsy. World Journal of Hepatology. 8 (16), 673-684 (2016).
- Trevaskis, J. L., et al. Glucagon-like peptide-1 receptor agonism improves metabolic, biochemical, and histopathological indices of nonalcoholic steatohepatitis in mice. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 302 (8), G762-G772 (2012).
- Tolbol, K. S., et al. Metabolic and hepatic effects of liraglutide, obeticholic acid and elafibranor in diet-induced obese mouse models of biopsy-confirmed nonalcoholic steatohepatitis. World Journal of Gastroenterology. 24 (2), 179-194 (2018).
- Clapper, J. R., et al. Diet-induced mouse model of fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis reflecting clinical disease progression and methods of assessment. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 305 (7), G483-G495 (2013).
- Armstrong, M. J., et al. Liraglutide safety and efficacy in patients with non-alcoholic steatohepatitis (LEAN): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 2 study. Lancet. 387 (10019), 679-690 (2016).
