إدراج إجراء خزعة الكبد البقاء في الفئران لتقييم القرار غير الكحولية Steatohepatitis (ناش)
概要
في إعدادات السريرية، يتم استخدام عينة من كبد لتقييم مراحل غير الكحولية steatohepatitis (ذلك والتهاب وتتمثل تضخم وتليف). نحن هنا، لتوضيح البقاء خزعة كبد في الفئران التي يمكن استخدامها لإجراء تحاليل نسيجية للتمكين من تقييم العوامل العلاجية بطريقة أكثر مواءمة مع التجارب السريرية.
Abstract
التجارب السريرية تقييم العلاجات للعلاج غير الكحولية steatohepatitis (ناش) تنطوي خط الأساس ونهاية الدراسة الكبد خزعة، وتقييم التحسن في النهاية المرض، غالباً ما تنعكس كنسبة مئوية من كل ذراع العلاج أن تتحسن، سوءا أو ظلت دون تغيير. دراسات القوارض السريرية التقليدية المفترضة ناش العلاجات غالباً محدودة بسبب عدم معرفة مستوى الكبد مرض/ناش الحالية في بدء التدخل العلاجي، بدلاً من التعشئه مجموعات العلاج في النهاية يمكن قياسها بسهولة مثل وزن الجسم، وحالة التمثيل الغذائي أو ما شابه ذلك. وهنا يصف لنا تقنية خزعة كبد في الناجمة عن النظام الغذائي ناش الفأر نموذجا، لتقييم أمراض الكبد الأساس بغية استبعاد الفئران التي لا تظهر التليف وتوزيعها بالتساوي مع التليف مماثلة بين مجموعات معاملة الحيوانات. يمكن بعد ذلك مقارنة هذه المستويات إلى مستويات المحطة الطرفية، بعد التدخل لفهم أصدق للتأثيرات الدوائية المجراة في ومما يعكس بشكل أدق استراتيجيات تصميم التجربة السريرية. الماوس بشكل صحيح تخديره وإعدادها لعملية جراحية باستخدام ظروف معقمة. يتم إجراء شق صغير في الجزء العلوي من البطن ويتم كشفها الفص الجانبي الأيسر للكبد. آسفين الكبد هو إزالتها جراحيا، وهو وضع قطعة مماثلة الحجم من الجيلاتين قابلة للامتصاص في مكان عمله لوقف أي نزيف. الماوس جراحيا خياطة وتدبيس مغلقة وسوف تسترد مرة أخرى إلى طبيعتها خلال يوم 1. تستغرق العملية كاملة 5-10 دقيقة للماوس. هنا نحن تجسد مدى فائدة هذا الإجراء بالاستفادة من خزعة قبل دراسة لتقييم تأثير مثل الجلوكاجون الببتيد-1 (GLP-1) مستقبلات مؤثر liraglutide في النهاية ناش في الفئران.
Introduction
عدم الكحولية steatohepatitis (ناش) هو مرض كبد تدريجيا، وشكلاً أكثر حدة من مرض الكبد الدهني (NAFLD)، التي أصبحت أكثر انتشارا بسبب ارتباطه بالسمنة ومرض السكري من النوع 2. هناك لا العلاجات المعتمدة ل NAFLD/ناش، أو المؤشرات الحيوية المعتمدة لتقييم تطور المرض سهولة. يتم تشخيص ناش الأشيع بتقييم التهاب، فائض الدهن الكبدي (ذلك) وتتمثل في تضخم وتليف1،2،،من34. في التجارب السريرية، ويتم تقييم هذه النهاية قبل الدراسة في عينة كبد التي جمعت عن طريق خزعة، ومن خزعة كبد ثانية بعد فترة زمنية معينة من علاج. وهكذا، تقييم فعالية عامل الاختبار عن طريق التغيير في أمراض الكبد في المواضيع مع الكمية المحددة مسبقاً (أي، ثبت في خزعة) ناش التي هي عشوائية لمجموعات العلاج. غالباً ما تستخدم هذه النهاية النسجية ذاتها في القوارض نماذج تقييم إمكانية التداوي ناش في الدراسات السريرية، ولكن فقط في الأنسجة الطرفية من الفئران euthanized وهكذا دون فهم لدرجة الفعالية في خط الأساس، وعدم القدرة للتحكم في وجود اختلافات بين مجموعات العلاج في حالة المرض الأساس.
على الرغم من أن 25% بالغين مع نافلد يفترض أن يكون ناش استناداً إلى مستويات aminotransferase المصل مرتفعة، توجد أية أساليب نهائية بديلة لتأكيد ناش خلاف الأدلة النسيجي4. أساليب موسع، مثل طرائق الإشعاعي (الموجات فوق الصوتية والتصوير المقطعي والتصوير بالرنين المغناطيسي) قد وضعت للكشف عن ذلك الكبد، ولكن هذه الأساليب لا يمكن تشخيص ناش أو تحديد مرحلة التليف. الاستوجرافي عابر يوفر طريقة غير الغازية واعدة لقياس صلابة الكبد. فقد ثبت أن تكون دقيقة في التفريق بين مراحل التليف. ومع ذلك، الدقة تتناقص مع ارتفاع مؤشر كتلة الجسم (BMI) والأنسجة الدهنية. 5 وهذه مشكلة نظراً لغالبية المرضى ناش يجري يعانون من السمنة المفرطة. تتجاوز أهمية سريرية لهذه النهج، تستخدم أيا من هذه الطرائق في الدراسات الإكلينيكية.
للتغلب على هذا، كانت المجموعة البحثية للدكتور جوناثان روث أول تنفيذ إجراء خزعة كبد في نموذج ناش6،،من78الماوس ناش أميلين (أملن). ووصفوا المصدوقية التنبؤية خزعة بدرجة من المرض ناش وترابط مع الأمراض الأيضية. هنا يصف لنا بالتفصيل الإجراء خزعة الكبد في نموذج أملن ناش وفائدتها في إعداد علاجية، على وجه التحديد لتقييم فعالية ليراجلوتيدي.
Protocol
Representative Results
Discussion
هنا يصف لنا بالتفصيل الإجراء خزعة الكبد الماوس أولاً وصف المصفق et al.10، وتجسد فائدتها في طراز ماوس ناش، مماثلة للتقارير السابقة6،9. الإجراء خزعة الكبد أداة قيمة لتقييم النمط الظاهري ناش قبل وبعد العلاج، بطريقة مشابهة للتي يؤديها في التجارب العلاجية السريرية. الخزعة يسمح للمقارنة المباشرة لكل موضوع، أي الفئران نفسها يمكن أن تستخدم لكل من النقاط الزمنية. كما نبدي إمكاناتها متعدية الجنسيات. في التجارب سريرية في مواضيع ناش خزعة-ثبت، أثارت liraglutide نسبة 39% استجابة (المرضى مع تحسن) في ناس، بينما لاحظنا في دراستنا بمعدل 66% مستجيب لناس محسنة. وعلاوة على ذلك، كان 26 في المائة مرضى درجة التليف تحسين مع 9 ٪ سوءا، مقابل 14 في المائة و 36 في المائة في الذراع الغفل، على التوالي11. لقد لاحظنا في دراستنا، بمعدل 17% تحسن مع العلاج ليراجلوتيدي. تسليط الضوء على سلطة خزعة الكبد الأساس هذه المقارنات وتأكيد التفاهم متعدية الجنسيات المحتملة، على الأقل لهذه الفئة من العلاجية.
أنها حاسمة بالنسبة لحصاد قطعة كبيرة بما يكفي من أنسجة الكبد أثناء إجراء خزعة لتحليل الميزات النسيجي بشكل صحيح، ولكن أيضا ليست كبيرة جداً من قطعة من الكبد بخرق وظيفة الكبد. لاحظنا بمعدل وفيات صفر مع هذه الجراحة، والحيوانات وبدأ تعافي تماما في يوم واحد مع استئناف السلوك العادي للأكل. هكذا، الوقت بين خزعة والشروع في الدراسة تدخل محدودة لا باسترداد الحيوان ولكن من المرجح بالوقت الذي يستغرقه تجهيز العينات والتحليل والعشوائية اللاحقة.
استخدام الإجراء خزعة الكبد كطريقة لتأكيد التليف قبل التدخل ساعد على الحد من تقلب في دراستنا، مما يسمح لنا باستبعاد الفئران التي لم تتطور تماما درجة التليف الكبدي نتيجة النظام الغذائي الذي يحفز ناش أملن. وعلاوة على ذلك، فإنه تعزيز قدرتنا على فهم أفضل لأثر التدخلات الممكنة تحسين ناش، مقابل فقط الحصول على عينة الكبد المحطة الطرفية ونقاط ناش. حتى يتم مواصلة استكشاف تقنيات جديدة غير الغازية ومقبولة على نطاق واسع، خزعة الكبد هو فقط ثبت طريقة لتحديد ناش.
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب الاعتراف بامتنان مساعدة هولي كولكيبيك ولي سالي للخبرة في مجال تجهيز الأنسجة وإيمونوهيستوتشيميستري. كما يشكر المؤلفون دونا جولدستين وموظفي “المختبر الموارد الحيوانية” (ميديموني، غايثرسبيرغ، دكتوراه في الطب) لمساعدتها مع الإجراءات التقنية وتربية الحيوانات والرعاية.
Materials
| Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
| 5-0 suture | Ethicon | J834G | |
| 7mm Wound Clips | Reflex | 203-1000 | |
| Absorbable gelatin sponge (GelFoam) | Pfizer | 09-0353-01 | Compressed, Any Size |
| Alcohol Prep Pad | VWR | 75856-902 | |
| Animal Clippers | Oster | 78005010002 | Size 40 Blade |
| Artificial Tears | Henry Schein | 048272 | Tube |
| Buprenorphine (Buprenex) | Reckitt Benckiser | NDC 12496-0757-5 | |
| Iodine Prep Pads | Nice Pak Products | C12400 | |
| Sterile Drapes | Stoelting | 50981 | |
| Surgical Gloves | Medline | 54720 |
参考文献
- Brunt, E. M., et al. Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and the histopathologic diagnosis in NAFLD: distinct clinicopathologic meanings. Hepatology. 53 (3), 810-820 (2011).
- Brunt, E. M. Pathology of nonalcoholic fatty liver disease. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 7 (4), 195-203 (2010).
- Kleiner, D. E., et al. Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 41 (6), 1313-1321 (2005).
- Diehl, A. M., Cause Day, C. Pathogenesis, and Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis. New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).
- Golabi, P., et al. Current complications and challenges in nonalcoholic steatohepatitis screening and diagnosis. Expert Reviews of Gastroenterology and Hepatology. 10 (1), 63-71 (2016).
- Roth, N. C., et al. Prediction of histologic alcoholic hepatitis based on clinical presentation limits the need for liver biopsy. Hepatology Communications. 1 (10), 1070-1084 (2017).
- Kristiansen, M. N., et al. Obese diet-induced mouse models of nonalcoholic steatohepatitis-tracking disease by liver biopsy. World Journal of Hepatology. 8 (16), 673-684 (2016).
- Trevaskis, J. L., et al. Glucagon-like peptide-1 receptor agonism improves metabolic, biochemical, and histopathological indices of nonalcoholic steatohepatitis in mice. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 302 (8), G762-G772 (2012).
- Tolbol, K. S., et al. Metabolic and hepatic effects of liraglutide, obeticholic acid and elafibranor in diet-induced obese mouse models of biopsy-confirmed nonalcoholic steatohepatitis. World Journal of Gastroenterology. 24 (2), 179-194 (2018).
- Clapper, J. R., et al. Diet-induced mouse model of fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis reflecting clinical disease progression and methods of assessment. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 305 (7), G483-G495 (2013).
- Armstrong, M. J., et al. Liraglutide safety and efficacy in patients with non-alcoholic steatohepatitis (LEAN): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 2 study. Lancet. 387 (10019), 679-690 (2016).
