여기, 우리는 bioinspired 실리 카 재료를 합성 하 고 거기에 효소를 무력화 하는 프로토콜을 제시. 실리 카는 규 산 나트륨 및 ‘첨가제’는 아민 제어 속도로 중화 결합 하 여 합성 됩니다. 제자리에서 효소 동원 정지 또는 캡슐화 된 첨가제의 합성 후 산 차입 하 여 물성 및 기능을 변경할 수 있습니다.
여기에 설명 된 프로토콜의 목표 bioinspired 실리 카 재료 합성, 효소 캡슐화를, 수행 하 고 부분적으로 또는 완전히 정화 같은 산 차입에 의해 것입니다. Polyfunctional bioinspired 첨가제와 규 산 나트륨을 결합 하 여 실리 카 중화 시 주변 조건에서 급속 하 게 형성 된다.
실리 카 수확량에 중화 및 biomolecule 추가 포인트의 효과 조사 하 고 biomolecule immobilization 효율성은 추가 포인트 변화에 대 한 보고. 다른 다공성 실리 카 합성 방법을 달리 온화한 조건 bioinspired 실리 카 합성에 필요한 섬세 한 생체의 캡슐화와 완벽 하 게 호환 되는지 표시 됩니다. 또한, 온화한 조건 만들기 bioinspired 실리 카 스케일 업 및 상용화 유망 대상 맨 자료와 적극적인 지원 매체 모든 합성 및 수정 단계에 걸쳐 사용 됩니다.
그러나 합성은 표시 조건, 즉, 중화 속도 최종 합성 pH에 매우 민감한에서 높은 재현성으로 이어지는 자동 적정 메서드를 사용 하 여 이러한 매개 변수 제어 시연 꽉 반응 진행 경로 항복입니다.
따라서 실리 카 bioinspired 우수한 활성 소재 지원 선택, 미래의 응용 프로그램에서 많은 현재 응용 프로그램을 시연, 그에 국한 되지 않음 그리고 힘으로 다양성을 보여주는입니다.
산업 촉매에 대 한 구조 지원으로 실리 카의 사용은 잘 설립 하 고, 향상 된 촉매 활동, 안정성 및 가공 성, 따라서 잠재적으로 운영 비용을 절감1 . 이러한 혜택으로 실리 카 기 공 시스템 내에서 스토리지 무료 그것의 대조 물 효소 수명에 상당한 혜택을 부여 수 있습니다 효소 동원 정지의 경우 혼합은. 따라서, 많은 노력 연결할 효소 실리 카 종, 규 산 고체 지원에 동원 정지의 다른 방법을 사용 하 여 조사를 비교 하는 여러 리뷰와 함께 가장 좋은 방법을 찾는 소비 되어 있다. 2 , 3 , 4
효소는 physisorption 또는 다공성 재료 내에서 캡슐화 이외에 공유 결합을 통해 일반적으로 연결 됩니다. 그러나 5 , 있다 각 방법에 관련 된 중요 한 단점: 실리 카와는 허용 되지 않는에 지도 하는 반응 조건에 의해 아주 쉽게 약화 수 있습니다 biomolecule 사이 과도 표면 상호 작용에 의존 하는 physisorption 효소 거 르 기입니다. 훨씬 더 강한 공유 첨부 활성 종의 감소 구조적 자유 때문에 낮은 활동 일반적으로 발생합니다. 캡슐화는 효소 어려움 또는 diffusional 한계 때문에 감소 된 활동에서 발생할 수 있습니다. 6
온화한 (종종 별명된 ‘ bioinspired’) 실리 카 종합의 분야에서 최근 개발 현장에서 의 캡슐화 생체 및 다른 활성 종 소재 합성 동안 설립 했다. 7 , 8 , 9 이 방법은 기존의 동원 정지의 단점의 많은 원소-chemisorption 접근 달리는 biomolecule의 구조적 자유 약한 noncovalent 상호 작용의 주위 공 구멍 형태로 사용에 의해 유지 된다 biomolecule, 여전히 방지 leaching. 사실, 캡슐화 생체 및 전체 셀,10 의 범위에 대 한 작동 하도록 입증 되었습니다 하 고 bioinspired 비활성화 때문에 가혹한 과정 등 실리 카 효과에 캡슐화를 통해 상태를 피할 수 있다. 7 , 11
여기 설명 하는 방법의 목표 bioinspired 유기 첨가제를 사용 하 여 주위 조건 하에서 제어할 수 있는 속성을 가진 다공성 실리 카를 준비 하는 것입니다. 메서드는 선택 표시 한다 무기 또는 bioorganic 분자의 캡슐화를 포함 하도록 쉽게 수정할 수 있습니다. 우리는 더 산 차입을 통해 유기 서식 파일을 제거 하 여 원하는 대량 속성 및 정화를 달성 하기 위해로 synthesised 자료를 수정 하기 위한 손쉬운 방법을 보여줍니다.
템플릿 다공성 실리 카 지원 (예:실리 카 재료 MCM-41 또는 SBA-15 같은 supramolecular 계면 활성 어셈블리를 통해 템플릿)12 이 방법은 훨씬 빠르고 더 온화한, 사용의 전통적인 합성에 비해 맞게, 수많은 immobilization 단계와 힘 드는 정화에 대 한 필요 없이 현장에서 캡슐화. 또한, calcination 보다 산 차입의 사용 유기 표면 기능화의 가능성을 엽니다.
이 방법은 매우 physisorption 발견 누가 활성 종 동원 정지 또는 효과적 이도록 화학식 동원 정지에서 이러한 작업에 적용 됩니다. Bioinspired 합성은 유일 하 게 기존의 템플릿 실리 카 재료에 비해 산업화에 대 한 배치 프로세스 스케일-업 연구 들도 유용 합니다. 13 , 14 이 방법은 포토닉스, 자료 구조에 대 한 내는 소재 예:숨 구멍의 정렬 된 배열이 필요로 하는 응용 프로그램을 권장 하지 않습니다 대량 속성에 어떤 유사성에도 불구 하 고 무질서 이다.
현재 작업에서 우리는 빠르게 계기 bioinspired 실리 카 재료 및 생체의 캡슐화 거기에 하는 방법 제시. 절차, 즉 반응 시작 산을 추가할 수 및 biomolecule 모듈의 추가의 타이밍의 금액 내에서 중요 한 단계를 설명 합니다. 우리 모두 반응 진행 및 수율에 산 추가 금액의 효과 보여 (그림 4 및 그림 5, 각각), 합성 조건,이 감도도 불구 하 고 일관성 있게 꽉 제어 하는 방법을 시연 했다. 그러나 활성 종 캡슐화에 관한 절차의 측면에서 간단 하지만 캡슐화 표시 됩니다 (또한, 또한, 환경 조건 pH의 순서), 실험 조건에 민감한, 자료의 일관성 속성은 다시 달성 이다.
합성 조건15 형태학 및 porosities의 범위를 제공 하는 많은 출판 되었습니다 다른 곳, 다른 첨가제를 사용 하 여 수정할 수 있습니다. 온화한 정화13 및 표면 아민 장식 등 추가, 이후 합성 기술은 수정 하 고 bioinspired 실리 카 재료를 화학적으로 맞게 보고 되었습니다. 20 마지막으로, 온화 하 고, 수성의 특성상 합성, 제자리에서 캡슐화 가능 하다 그 효소17,18 에서21 , 전체 세포에 이르기까지 여기, 시연 보다는 기판의 광범위에 대 한 금속 염,22 활성 제약 성분,23 및 양자 점. 24
(같은 자료의 MCM-41 또는 SBA 15 가족) 다른 중재 유기 실리 카 종합, 달리 첨가제 생산 수 없습니다 bioinspired의 polyfunctional 자연 주문 기 공 구조도 높은 단 분산 입자 크기 분포 Stöber-타입 실리 카의 특성입니다. 25 이 bioinspired (특별 한 경우) 이외의 첨가물26 의 잘 정의 된 micellization 동작의 부족와 결합의 증가 촉매 활동 monofunctional 포함 하는 아민 첨가제를 통해. 26
다른 한편으로,이 polyfunctional 첨가제 자연 짧은 반응 시간 및 더 온화한 온도 및 다른 중재 유기 실리 카 종합에 비해 압력의 사용을 수 있습니다. 이것 또한 리드 룸 온도 첨가제 차입의 가능성에, 위에서 설명한 대로 아직이 다른 실리 카 가족 때문에 구체적인 그들의 표면 화학에 대 한 달성 될 수 있다. 27 , 28 , 29 따라서, bioinspired 실리 카 재료 표시 되었습니다 모두 더 경제적이 고 실용적인 쉽게 상용화 및 개발으로 이어지는 큰 규모에서 생산 될. 14
요약 하자면, bioinspired 실리 카 합성 활성 종 지원 또는 가스 매 미디어 생산에 대 한 신속 하 고 손쉬운 방법을 나타냅니다. 중 고 반응 후 pH의 꽉 컨트롤을 통해 다양 한 실리 카 아민 합성 종합 될 수 다양 한 속성, 제자리에서 캡슐화의 다른 유기의 가능성에 의해 보완 추가, 무기, 또는 바이오-유기 재료. 비록 bioinspired 첨가제 및 모듈 농도의 독립 후 합성 수정 아직 달성 될, 이러한 방법은 환경 양성 화학 공정으로 유망한 단계를 나타냅니다.
The authors have nothing to disclose.
저자는 화학의 부 및 생물 공학 (셰필드의 대학), EPSRC (EP/L017059/1 및 EP/P006892/1)에서 금융 지원을 감사합니다.
Silica synthesis | |||
Sodium silicate pentahydrate | Fisher scientific | 10070470 | |
Pentaethylene hexamine (PEHA) | Sigma-Aldrich | 292753 | |
Diethylenetriamine (DETA) | Sigma-Aldrich | D93856 | Toxic |
Triethylenetetraamine (TETA) | Sigma-Aldrich | 90460 | |
Poly(ethyleneimine) (PEI) | Polysciences | 6088 | 1.2K MW |
Poly(allylamine hydrochloride) (PAH) | Sigma-Aldrich | 283215 | 17.5k MW |
Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A2153 | |
Hydrochloric acid (HCl) 1M | Fisher Scientific | 10487830 | |
Silicomolybdic acid assay | |||
Ammonium molybdate tetrahydrate | Sigma-Aldrich | A7302 | Product replaced by M1019 |
Hydrochloric acid (HCl) 37.0%wt | Fluka Analytical | 84436 | |
Anhydrous oxalic acid | Sigma-Aldrich | 75688 | |
Para-aminophenol sulphate | Fisher Scientific | 10446880 | |
Sodium sulphite | Fisher Scientific | 10234400 | |
Sulphuric acid | Sigma-Aldrich | 84727 | |
Bradford assay | |||
Bradford reagent | Sigma-Aldrich | B6916 | |
Equipment | |||
Autotitrator Titrando 902 | Metrohm | 2.902.0010 | |
801 magnetic stirrer plate | Metrohm | 2.801.0040 | For use with above |
800 Dosino | Metrohm | 2.800.0010 | For use with above |
Aquatrode Plus | Metrohm | 6.0253.100 | For use with above |
Centrifuge Sorvall ST16 | Thermo Scientific | 11814243 | Code is for Fisher scientific |
UV-Vis spectrophotometer Genesys 10A | Thermo scientific | 12104972 | Code is for Fisher scientific |