Implante coclear na cobaia

Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo comitê local de bem-estar animal e o Ministério Federal austríaco de ciência, pesquisa e economia. 1. preparar o equipamento e a configuração necessária para a cirurgia Posicione o microscópio cirúrgico, broca, chapa de aquecimento e pulso oxímetro para permitir a fácil e eficiente manipulação durante a cirurgia. Verificar a função dos dispositivos com base no manual do fabricante. Certifique-se de que a placa de aquecimento é definida a 38 ° C, a fim de proteger o animal de hipotermia durante a cirurgia. Vestir um capuz e uma máscara. Realize a desinfecção cirúrgica da mão. Lave as mãos meticulosamente com sabão. Seque as mãos e usar um desinfetante alcoólico para desinfectar as mãos. Coloque luvas depois que as mãos estão secas. Prepare os instrumentos cirúrgicos esterilizados e os equipamentos necessários para um implante coclear. Consulte a Tabela de materiais para os instrumentos cirúrgicos e equipamentos utilizados para implantação de CI cobaia neste protocolo. Quando destinam-se a medições de potencial de ação composto (CAP), preparar um aproximadamente 3.5 cm de comprimento pedaço de fio de ouro Teflon-isolados, cuidadosamente, removendo partes do isolamento de ambos os lados usando um micro fórceps (aproximadamente de uma ponta de 3 mm e 5 mm de a outra extremidade). Prepare um segundo pedaço de fio de ouro (aproximadamente 2,5 cm) com extremidades não isoladas de aproximadamente 5 mm. lugar os fios preparados em álcool ou desinfetante. 2. anestesia, medicação e preparação de animais Pese o animal.Nota: Animais utilizados são femininos Dunkin-Hartley cobaias albinas. O peso dos animais utilizados, que são aproximadamente 4-6 semanas de idade, varia de 300 a 400 g. Prepare a anestésicos e medicamentos necessários para a cirurgia, com base no peso do animal. Prepare 0,72 mL da mistura anestésica, consistindo de cetamina 0,06 mL (100 mg/mL), 0,18 mL medetomidina (1 mg/mL), 0,12 mL de midazolam (5 mg/mL) e 0,36 mL de fentanil (50 µ g/mL) para a cirurgia em uma cobaia de 400g. Consulte a tabela 1 para doses baseadas no peso dos anestésicos. Injete a mistura de cetamina, medetomidina, midazolam e fentanil por via subcutânea para a almofada de gordura no pescoço do animal usando uma agulha 27G. Ver tabela 1 para peso baseado doses dos anestésicos. Cobrir a gaiola e deixe o animal em um lugar calmo para 10 min antes de prosseguir. Lubrificar os olhos do animal e mantê-los lubrificados durante todo o processo. Raspe a cabeça do animal, concentrando-se na região retroauricular para permitir um acesso cirúrgico suficiente para o bulla. Posição do animal na chapa de aquecimento na posição prona e certifique-se de que o animal não está em contato direto com a chapa de aquecimento para evitar queimaduras térmicas. Coloque a sonda de oxímetro de pulso com um pé do animal. Em seguida, abra cuidadosamente a boca do animal com um laringoscópio pequeno e limpar toda a cavidade oral de alimentos baseia-se usando uma trouxa. Mantenha a boca do animal aberto com o laringoscópio. Insira cuidadosamente um tubo de estômago para o esôfago do animal e lentamente empurre-os na direção do estômago até sentir uma resistência. Monitorar o O2-saturação do animal para certificar-se de que o tubo de estômago não é na traqueia. Retire o tubo de estômago, se houver uma diminuição na saturação de O2 e tente novamente depois que o animal é completamente oxigenado. Injete uma mistura de soro fisiológico, glicose 5% e enrofloxacina a almofada de gordura no pescoço do animal usando uma agulha 23G. Use desinfetante alcoólico para desinfectar as mãos novamente. Colocar novas luvas limpas. Preparar o campo cirúrgico com a alternância de esfoliantes de povidona iodo e 70% de etanol e cobrir o animal. Uso autoadesiva drapeja ou braçadeiras de toalha para certificar-se de que somente o campo cirúrgico fica descoberto durante o procedimento. Por via subcutânea injetar 0,1 mL de solução de lidocaína a 2% para a área da incisão planejada para a anestesia local suficiente e posicionar o animal para o lado. Re-dose o animal com ¼ da dose inicial da mistura anestésica cada 30 min após a primeira injeção para manter a anestesia suficiente. 3. coclear implantação Executar um aproximadamente 2-3 cm incisão da pele 3-5 mm posterior ao pavilhão auricular usando um bisturi. Use o cautério bipolar quando necessárias para minimizar o sangramento.Nota: A profundidade anestésica deve ser confirmada pela falta de pedal retirada antes da primeira incisão. Este teste deve ser repetido a cada 15-20 minutos para monitorar a profundidade anestésica durante o procedimento. Corte com cuidado os músculos na área retroauricular após palpar o auditório bulla usando um bisturi 15 ou tesoura cirúrgica.Nota: Palpe o auditório bulla como uma proeminência sob os músculos. Disse os músculos desde o bulla, empurrando-os delicadamente lado usando um raspatory ou um cotonete. Use um retrator para expor toda a extensão da incisão e ter desimpedido o acesso para o bulla. Use a ponta de um bisturi 15 para perfurar um buraco o bulla. Rode cuidadosamente o bisturi até o osso é perfurado para permitir a inspeção das estruturas do ouvido médio. Ampliar o bullostomy conforme necessário para garantir que a curva basal da cóclea e o nicho da janela redonda pode ser visualizado adequadamente. Posicione a cabeça do animal em posição flexionada para ter acesso a estas estruturas. Cobrir a área da bullostomy com um pequeno pedaço de uma compressa para evitar que sangue e fluido extracelular correndo para o ouvido médio.Nota: A posição flexionada da cabeça pode obstruir as vias aéreas do animal. Portanto, a saturação de oxigênio do animal deve ser verificado com frequência. Posicione o animal em posição de bruços. Expor o vértice do animal, realizando uma incisão rectangular e removendo a pele. Dissecar o periósteo e limpar o osso de qualquer outro tipo de tecido ou sangue usando um bisturi. Quando destinam-se a medições de CAP, termine a preparação do fio de ouro teflon isolados de 3,5 cm, formando um pequeno gancho com um micro pinça na extremidade do fio, que tem sido não isolada de 3 mm. Quando destinam-se a medições de CAP, guia o fim do fio de ouro, que tem sido não isolado para 5 mm, por via subcutânea para o vértice através de um cateter venoso periférico 18g usando um micro fórceps. Use outra pinça micro com a outra mão para guiar o gancho final do fio cuidadosamente em para o ouvido médio. Quando destinam-se a medições de CAP, flexionar a cabeça do animal para visualizar a área de nicho de janela redonda através da bullostomy. Use a outra mão para ligar o fio de ouro para a proeminência óssea do nicho janela redonda, usando um micro fórceps. Manter uma tensão suave e o fio de ouro e fixá-la à beira cranial da bullostomy com 10-15 µ l de cola de tecido, usando uma seringa de 1 mL com agulha 27G. Evite o deslocamento de cola na orelha média. Veja a Figura 1 para uma imagem intraoperatória da área de janela redonda com o fio de ouro no local. Quando destinam-se a medições de CAP, conecte a extremidade não isolada do fio de ouro para o equipamento utilizado para medir o potencial auditivo e executar medidas de CAP de linha de base. Ver Honeder et al, 2016, para obter uma descrição detalhada das medidas do CAP rotineiramente realizada em nosso laboratório. 12 Posicione o animal em posição prona. 2 furos 1 mm anterior a sutura de lambda usando uma rebarba de 1 mm sem causar danos para a dura-máter. 2 parafusos de aço inoxidável 2mm do implante no crânio.Nota: Os parafusos servem como pontos de fixação para o conector do eléctrodo. Adaptar-se a distância entre os parafusos em relação ao tamanho do conector. Use um cateter venoso periférico de 18 G para guiar o eletrodo do conector para o bulla em uma camada de tecido mais próximo do crânio quanto possível. Misture o pó de cimento dental com o fluido para o pó de cimento dental, usando uma espátula de acordo com o manual do fabricante. Coloque 0,5 – 0,7 mL de cimento dental semilíquida adquirir consistência entre os parafusos, usando uma espátula. Posição do conector do eletrodo entre os parafusos. Mantenha o conector em posição até o cimento dental é endurecido. Certifique-se que os parafusos são encerrados pelo cimento para permitir a fixação estável do conector. Posição do animal para o lado. Fure cuidadosamente o cochleostomy 1 mm desde o nicho da janela redonda usando uma rebarba de diamantes de 0,5 mm a uma taxa de rotação de 5000 tiros por minuto. Insira cuidadosamente o eletrodo em que o scala tympani até uma profundidade de 4 mm. Retirar o eletrodo e repetir a inserção. Consulte a Figura 2 para o eletrodo utilizado para cobaia de implante coclear. Usando uma agulha reta, sele a área de cochleostomy com um pequeno pedaço de músculo. Corrigi o eléctrodo de craniana prestes a bullostomy com 10 µ l de cola de tecido, usando uma seringa de 1 mL com agulha 27G. Prepare o cimento dental como mencionado em 3,14. Feche com cuidado o bullostomy com cerca de 0,3 mL de cimento dental, usando uma espátula. Feche a incisão retroauricular usando 5-0 reabsorvível. Vire o animal para a posição prona. Quando as medições CAP destinam-se, pegue a borda posterior da incisão rectangular no vértice do animal usando uma pinça de tecido. Use uma tesoura com a outra mão para fazer um túnel subcutâneo de aproximadamente 2 cm de comprimento no pescoço do animal. Quando destinam-se a medições de CAP, implante fio ouro 2,5 cm por via subcutânea no pescoço do animal usando uma pinça. Solde a extremidade mais curta não isolada para o designado pino do conector no vértice do animal. Quando destinam-se a medições de CAP, solda eletrodo de nicho a janela redonda (fio de ouro) para o apropriado pino do conector no vértice do animal. Aplica uma quantidade adicional de cimento dental na parte superior do conector para cobrir totalmente os pinos isolados e o eletrodo. Quando destinam-se a medições de CAP, realiza medições no pós-operatório, de acordo com o protocolo de pesquisa. 4. pós-operatório cuidados Aplica atipamezole e flumazenil por via subcutânea após a cirurgia e medições para antagonizar a anestesia. Aplica solução salina fisiológica como substituição de fluido para apoiar a recuperação do animal da cirurgia. Coloca o animal sob uma lâmpada de aquecimento até que se recuperou totalmente de anestesia e começa a se mover dentro da gaiola. Evitar a hipertermia ou queimar, colocando a lâmpada de aquecimento aproximadamente 50 cm para o animal. Certifique-se que a temperatura do corpo do animal é sempre entre 37,5 ° e 39 ° C. Verifique se o animal para sintomas de lesão vestibular como nistagmo, circulando ou capotamento. 13 , 14 Aplica a buprenorfina para analgesia duas vezes por dia para dois mais dias depois da cirurgia.Nota: Antes da primeira aplicação de buprenorfina pós-cirurgia certifique-se que o animal se recuperou completamente e tem respiração estável. Aplicação da medicação enquanto o animal ainda está sob anestesia pode conduzir a depressão respiratória. Pese o animal durante o primeiro 3 dias depois da cirurgia para detectar a perda de peso possível como marcador substituto da aflição durante este tempo.Nota: Perda de peso de cerca de 10% durante os primeiros 3 dias depois da cirurgia pode ser esperada e deve ser considerada comum. Esta perda de peso é temporária e vai se recuperar em poucos dias.