モルモットの内耳

すべての動物実験は、科学・研究・経済動物愛護委員会とオーストリアの中央政府大臣によって承認されました。 1. 機器と手術に必要なセットアップを準備します。 手術顕微鏡、ドリル、加熱プレートを置き、パルスオキシメータ簡単で効率的な手術中に処理できるようにします。製造元のマニュアルに基づくデバイスの機能を確認します。手術中に低体温症から動物を保護するために 38 ° C で加熱プレートが設定されていることを確認します。 フードとマスクを置きます。 手術の手の消毒を行います。細かいところまで石鹸で手を洗います。手を乾燥し、手を消毒するアルコール手消毒剤を使用します。手が乾燥した後に手袋を入れてください。 滅菌手術用器具、人工内耳に必要な機器を準備します。手術器具、このプロトコルではモルモット CI 注入用の装置のための材料表を参照してください。 複合活動電位 (CAP) の測定を目的とするときは慎重に (約 1 つの端から 3 mm と 5 mm のマイクロ鉗子を用いた両端から絶縁材の部分を削除することによって金ワイヤのテフロン絶縁の約 3.5 cm の長い作品を準備します。もう一方の端)。アルコールまたは消毒剤の準備ワイヤ絶縁両端の約 5 mm. の場所で金線 (約 2.5 cm) の 2 番目の部分を準備します。 2. 麻酔、薬、動物の準備 動物の重量を量る。注: 使用される動物、女性ダンキン ・ ハートレー アルビノ モルモットです。約 4-6 週間の古いである、動物の重量は、300 から 400 g の範囲します。 麻酔薬および動物の重量に基づいて手術に必要な薬物を準備します。麻酔薬の混合物、0.06 mL ケタミン (100 mg/mL)、メデトミジン 0.18 mL (1 mg/mL)、ミダゾラム (5 mg/mL) とフェンタニル (50 μ g/mL) 400 g モルモットの手術のための mL の 0.36 0.12 mL から成る 0.72 mL を準備します。麻酔薬の投与量を重量ベースの表 1を参照してください。 ケタミン、メデトミジン、ミダゾラム、27 G 針を使用して動物の首の脂肪パッドの皮下にフェンタニルの混合物を注入します。重量の表 1による麻酔薬の用量を参照してください。ケージをカバーし、続行する前に 10 分の静かな場所に動物を残します。 動物の目を注油し、それら全体の手順中に潤滑を保ちます。ブラに十分な外科的アクセスを許可する着けた地域に焦点を当て、動物の頭部を剃る。 腹臥位で加熱プレートに動物を置き、動物が低温火傷を防ぐために加熱板との直接接触にないことを確認してください。動物の足にパルス パルスオキシメータ プローブを配置します。動物の口の中を慎重に小さな喉頭鏡に開き、吸盤を使用してクリーンな食品から全体の口腔内がかかっています。 喉頭鏡で開かれた動物の口を保ちます。慎重に動物の食道に胃管を挿入し、胃の方向に抵抗を感じるまでゆっくりと差し込みます。 モニター O2-胃管が気管ではないことを確認してください動物の飽和。O2飽和の減少がある場合、胃管を削除および動物は完全に酸素化した後にもう一度試してください。 23 G 針を使用して動物の首の脂肪パッドに生理食塩液、5% ブドウ糖、エンロフロキサシンの混合物を注入します。 再び手を消毒するのにアルコール手消毒剤を使用します。新しいきれいな手袋を入れてください。 ポビドン ヨード、70% エタノールのスクラブを交互に手術野を準備し、動物をカバーします。プロシージャの間に覆いを取られた外科分野だけにとどまることを確認する使用粘着シーツやタオルにクランプします。 皮下十分な局所麻酔のため予定の切開部に 2% リドカイン液の 0.1 mL を注入し、動物を横に配置します。 十分な麻酔を維持するために最初の注射後麻酔薬の混合物 30 分毎の初回投与量の 1/4 で動物を線量再。 3. 人工内耳 実行、約 2-3 cm の皮膚切開 3 ~ 5 mm、メスによる耳介の後方。焼灼の出血を最小限に抑える必要があるときに使用します。注: 最初の切開前にペダルの撤退の欠如によって麻酔の深さを確認すべき。このテストは、プロシージャ全体で麻酔の深さを監視する 15-20 分ごと繰り返す必要があります。 15 メスや手術用ハサミを使用して聴覚のブラを触診した後地区に着けた筋肉を慎重にカットします。注: は、筋肉の下で隆起として聴覚ブラを触診します。 そっと脇を raspatory を使用してまたは綿棒を押してブラから筋肉を解剖します。切開のフルの長さを公開し、ブラへのアクセスが妨げられることがなく、リトラクターを使用します。 15 メスの先端を使って、ブラに穴を開けます。中耳の構造の検査をすることに骨を穿孔まで慎重にメスを回転させます。 確認する蝸牛の基部の回転に応じて、bullostomy を拡大して丸い窓のニッチを的確に視覚化できます。これらの構造体にアクセスするために動物の頭を屈折位置に置きます。血液と細胞外液が中耳にで実行されていることを防ぐために圧縮の小片と bullostomy の領域をカバーします。注: 頭の屈折位置動物の気道を妨害する可能性があります。したがって、動物の酸素飽和度は、頻繁にチェックする必要があります。 腹臥位で動物を配置します。長方形の切開を行うと、皮膚を取り除くことによって動物の頂点を公開します。骨膜を解剖し、メスを使用して、他の種の組織や血液から骨をきれい。 キャップ測定をしようとするときは、3 mm の絶縁されているワイヤの終わりにマイクロ鉗子で小さなフックを形成することにより 3.5 cm テフロン絶縁の金ワイヤの準備を完了します。 キャップ測定をしようとするとき、5 mm の皮下にマイクロ鉗子を使用して、18 G の末梢の静脈カテーテルを頂点に絶縁されているゴールドのワイヤーの端をガイドします。もう片方の手で慎重にワイヤのフックの端をガイドに別マイクロ鉗子を使用、中耳に。 キャップの測定を目的とする場合、bullostomy で丸い窓のニッチの領域を視覚化するための動物の頭に活用し。マイクロ鉗子を使用してラウンド ウィンドウのニッチの骨隆起に金ワイヤをフックをもう一方の手を使用します。 金ワイヤで穏やかな緊張感を維持し、27 G の針を用いて 1 mL 注射器を使用して組織接着剤の 10-15 μ L で、bullostomy の頭蓋の寸前にそれを修正します。中耳の中に接着剤の変位を避けてください。その場でゴールドのワイヤーで丸い窓領域の術中画像の図 1を参照してください。 キャップの測定を目的とするときは、聴覚電位を測定し、ベースライン キャップ測定を実行するために使用する機器に金ワイヤの絶縁されていない端を接続します。Honeder et al., 2016, 詳細については日常的に私たちの研究室で実行キャップ測定を参照してください。12 腹臥位で動物を配置します。硬膜への損傷を引き起こすことがなく 1 mm バリを使用してラムダ縫合前方 1 mm 2 穴をあけます。頭蓋骨に 2 のステンレス鋼ねじ 2 mm を注入します。メモ: ネジは、コネクタの電極の注視点として機能します。コネクタのサイズに関してはネジの間の間隔を合わせます。 18 G 末梢静脈カテーテルを使用して、可能な限り頭蓋骨に近い組織層で水疱にコネクタから電極を進めます。 製造元のマニュアルによるとへらを使用して歯科用セメント粉体の流体と歯科用セメントの粉を混ぜます。 場所 0.5 – 0.7 mL スパチュラを使用してネジ間 semifluid 歯科用セメントの。ネジ間電極コネクタを配置します。 歯科用のセメントが固まるまでは、コネクタ位置にしてください。ネジがコネクタの安定固定できるようにセメントで包まれていることを確認します。 動物を横に配置します。慎重に cochleostomy 毎分 5000 発の回転率で 0.5 mm ダイヤモンド バリを使用して丸い窓のニッチから 1 mm をドリルします。 慎重に 4 mm の深さにスカラー座索に電極を挿入します。電極を撤回し、挿入を繰り返します。モルモット内耳用電極の図 2を参照してください。 ストレート針を使用して、筋肉の小片を cochleostomy 領域をシールします。27 G の針を用いて 1 mL 注射器を使用して組織接着剤の 10 μ L で、bullostomy の頭蓋寸前に電極を修正します。 前述の 3.14 では、歯科用セメントを準備します。慎重にヘラを使用して、歯科用セメントの約 0.3 ml bullostomy を閉じます。5-0 吸収性縫合糸を使用して着けた切開を閉じる。 腹臥位に動物をオンにします。 キャップの測定を目的とするときは、組織鉗子を使用して動物の頂点に長方形の切開の後部の端をつかみます。片方の手でハサミを使用して、動物の首に約 2 cm の長さの皮下トンネルを作る。 キャップ測定をしようとするとき、インプラント、鉗子を使用して動物の首に皮下 2.5 cm ゴールド ワイヤー。動物の頂点にコネクタの指定されたピンに短い方の絶縁されていない端をはんだ付けします。 キャップの測定を目的とするときは、適切な動物の頂点上のコネクタのピンに丸い窓のニッチ電極 (金線) をはんだ付けします。 追加の絶縁端子と電極を完全にカバーするコネクタ上に歯科用セメントの量を適用します。 キャップの測定を目的とするときは、研究計画書によると術後測定を実行します。 4. 術後のケア 適用に対するアチパメゾールおよびフルマゼニル皮下の手術と測定後麻酔の反感を買います。 動物の手術からの回復をサポートする流体置換として生理食塩水を適用します。 完全に麻酔から回復し、ケージ内で移動を開始するまでは、加熱ランプの下で動物を配置します。 温熱療法を防ぐため焼いたり、加熱ランプを配置することによって動物に約 50 cm。動物の体温は 37.5 ° C から 39 ° C の間に常にことを確認してください。 眼振、旋回やロール オーバーのような前庭障害の症状のための動物を確認します。13,14 1 日 2 回より多くの 2 つの日の手術後の鎮痛に対するブプレノルフィンを適用します。注: ブプレノルフィン手術後の最初のアプリケーションの前に動物が完全に回復しているおり安定した呼吸であることを確認してください。この薬中動物は麻酔のアプリケーションは呼吸うつ病につながる可能性があります。 この時間の間に苦痛のサロゲート マーカーとして可能な重量の損失を検出する最初の 3 日後手術中に動物の重量を量る。注: 最初の 3 日後の手術中に約 10% の減量が期待できる、一般的な考慮する必要があります。この減量は一時的で、数日以内に回復されます。