Impianto cocleare nella cavia

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal comitato locale benessere degli animali e il Ministero federale austriaco per economia, scienza e ricerca. 1. preparare l’attrezzatura e la configurazione necessaria per chirurgia Posizionare il microscopio operatorio, trapano, piastra riscaldante e pulsossimetro per consentire facile ed efficiente movimentazione durante la chirurgia. Controllare il funzionamento dei dispositivi basati sul manuale del produttore. Assicurarsi che la piastra riscaldante è impostata a 38 ° C al fine di proteggere l’animale da ipotermia durante l’intervento chirurgico. Mettere su un cappuccio e una maschera. Eseguire la disinfezione chirurgica delle mani. Lavarsi le mani accuratamente con il sapone. Asciugare le mani e quindi utilizzare un disinfettante alcolico per disinfettare le mani. Indossare guanti dopo che le mani siano asciutte. Preparare gli strumenti chirurgici sterilizzati e le attrezzature necessarie per l’impianto cocleare. Vedi la Tabella materiali per gli strumenti chirurgici e attrezzature utilizzate per l’impianto di CI di cavia in questo protocollo. Quando si intendono misure di potenziale di azione composto (CAP), preparare un pezzo di circa 3,5 cm di lunghezza del filo d’oro isolato in Teflon rimuovendo con attenzione parti dell’isolamento da entrambe le estremità usando un micro forcipe (circa 3 mm da un’estremità e 5 mm dal l’altra estremità). Preparare un secondo pezzo di filo d’oro (circa 2,5 cm) con estremità non isolata di circa 5 mm. posto i fili disposti in alcol o disinfettante. 2. anestesia, farmaci e preparazione degli animali Pesare l’animale.Nota: Gli animali utilizzati sono femmina Dunkin-Hartley albino cavie. Il peso degli animali usati, che sono circa 4-6 settimane di vita, varia da 300 a 400 g. Preparare gli anestetici e medicinali necessari per la chirurgia in base al peso dell’animale. Preparare 0,72 mL della miscela anestetica, consistente di ketamina 0,06 mL (100 mg/mL), medetomidina 0,18 mL (1 mg/mL), 0,12 mL di midazolam (5 mg/mL) e 0,36 mL di fentanyl (50 µ g/mL) per la chirurgia su una cavia di 400g. Vedere la tabella 1 per dosi basata sul peso degli anestetici. Iniettare la miscela di ketamina, medetomidina, midazolam e fentanil per via sottocutanea per il cuscinetto di grasso nel collo dell’animale usando un ago 27G. Vedere tabella 1 per peso base dosi degli anestetici. Coprire la gabbia e lasciare l’animale in un posto tranquillo per 10 min prima di procedere. Lubrificare gli occhi dell’animale e mantenerli lubrificati durante l’intera procedura. Radere la testa dell’animale, concentrandosi sulla regione retroauricular per consentire un sufficiente accesso chirurgico alla bulla. Posizionare l’animale sulla piastra di riscaldamento in posizione prona e assicurarsi che l’animale non è a diretto contatto con la piastra di riscaldamento per evitare ustioni termiche. Posizionare la sonda dell’ossimetro di impulso su un piede dell’animale. Quindi aprire con cautela la bocca dell’animale con un laringoscopio piccolo e pulito che l’intera cavità orale dal cibo riposa utilizzando un pollone. Tenere la bocca dell’animale aperto con il laringoscopio. Inserire con cura un tubo di stomaco nell’esofago dell’animale e spingere lentamente in direzione dello stomaco fino a quando si avverte una resistenza. Monitorare l’O2-saturazione dell’animale per assicurarsi che il tubo di stomaco non è nella trachea. Rimuovere il tubo di stomaco se c’è una diminuzione nella saturazione di O2 e riprovare dopo che l’animale è completamente ossigenato. Iniettare una miscela di soluzione fisiologica, glucosata al 5% ed enrofloxacina il cuscinetto di grasso nel collo dell’animale usando un ago di 23 G. Utilizzare disinfettante alcolico per disinfettare le mani nuovamente. Indossare guanti puliti nuovi. Preparare il campo operatorio con alternanza di scrub di povidone iodio e 70% di etanolo e coprire l’animale. Uso autoadesivi tende o asciugamano morsetti per assicurarsi che solo il campo chirurgico rimane scoperto durante la procedura. Per via sottocutanea iniettare 0,1 mL di soluzione di lidocaina 2% nell’area dell’incisione pianificata per l’anestesia locale sufficiente e posizionare l’animale lateralmente. Ri-dosare l’animale con ¼ della dose iniziale della miscela anestetica ogni 30 min dopo la prima iniezione per mantenere l’anestesia sufficiente. 3. cocleare Eseguire un’incisione di circa 2-3 cm della pelle 3-5 mm posteriore a pinna usando un bisturi. Utilizzare cauterio bipolare quando necessario ridurre al minimo il sanguinamento.Nota: Profondità anestetica dovrebbe essere confermata dalla mancanza di recesso pedale prima la prima incisione. Questo test deve essere ripetuto ogni 15-20 minuti per controllare la profondità anestetica durante tutta la procedura. Tagliare con cura i muscoli nella zona retroauricular dopo palpating la bulla uditiva usando un bisturi 15 o forbici chirurgiche.Nota: Palpare la bulla uditiva come una protuberanza sotto i muscoli. Sezionare i muscoli dal bulla spingendo delicatamente da parte utilizzando un raspatory o un batuffolo di cotone. Utilizzare un riavvolgitore per esporre l’intera lunghezza dell’incisione e hanno libero accesso a bulla. Utilizzare la punta di un bisturi 15 per un foro nel bulla. Ruotare delicatamente il bisturi, fino a quando l’osso è perforato per consentire l’ispezione di strutture dell’orecchio medio. Ingrandire il bullostomy come necessaria per assicurarsi che il giro basale della coclea e la nicchia della finestra rotonda possa essere visualizzata in modo adeguato. Posizionare la testa dell’animale in posizione flessa per poter accedere a queste strutture. Coprire l’area di bullostomy con un piccolo pezzo di un impacco per impedire l’esecuzione all’orecchio medio di sangue e liquido extracellulare.Nota: La posizione flessa della testa può ostruire le vie respiratorie dell’animale. Di conseguenza, la saturazione di ossigeno dell’animale deve essere controllato frequentemente. Posizionare l’animale in posizione prona. Esporre il vertice dell’animale eseguendo un’incisione rettangolare e togliendo la pelle. Sezionare il periostio e pulire l’osso da qualsiasi altro tipo di tessuto o di sangue usando un bisturi. Quando si intendono misure CAP, terminare la preparazione del teflon isolati 3,5 cm oro filo formando un piccolo gancio con un forcipe micro all’estremità del filo, che è stato non isolato per 3 mm. Quando si intendono misure CAP, Guida alla fine del filo d’oro, che è stato non isolata per 5 mm, per via sottocutanea al vertice attraverso un catetere venoso periferico di 18 G utilizzando un micro forcipe. Utilizzare un altro micro forcipe con l’altra mano per guidare l’uncino estremità del filo con attenzione all’orecchio medio. Quando si intendono misure CAP, flettere la testa dell’animale per visualizzare l’area della nicchia finestra rotonda attraverso la bullostomy. Usare l’altra mano per agganciare il filo d’oro per la protuberanza ossuta della nicchia finestra rotonda utilizzando un micro forcipe. Mantenere leggera tensione presso il filo d’oro e fissarlo sull’orlo cranica della bullostomy con 10-15 µ l di colla tessuto utilizzando una siringa da 1 mL con ago 27G. Evitare lo spostamento di colla nell’orecchio centrale. Vedere la Figura 1 per ottenere un’immagine intraoperatoria della zona finestra rotonda con il filo d’oro in situ. Quando si intendono misure CAP, collegare l’estremità non isolata del filo d’oro per l’attrezzatura utilizzata per misurare i potenziali uditivi ed eseguire misurazioni di base CAP. Vedere Honeder et al., 2016, per una descrizione dettagliata delle misure CAP ordinariamente effettuate nel nostro laboratorio. 12 Posizionare l’animale in posizione prona. Praticare 2 fori 1 mm in avanti facendo la sutura di lambda utilizzando una bava di 1 mm senza causare danni al dura. Impianto 2 viti in acciaio inox 2mm nel cranio.Nota: Le viti servono come punti di fissaggio per il connettore dell’elettrodo. Adattare la distanza tra le viti rispetto alla dimensione del connettore. Utilizzare un catetere venoso periferico di 18 G per guidare l’elettrodo dal connettore di bulla in uno strato di tessuto più vicino il cranio come possibile. Mescolare la polvere di cemento dentale con il fluido per polvere di cemento dentale con una spatola secondo il manuale del produttore. Posto 0.5 – 0.7 mL di cemento dentale semifluido tra le viti utilizzando una spatola. Posizionare il connettore dell’elettrodo tra le viti. Mantenere il connettore in posizione fino a quando il cemento dentale è indurito. Assicurarsi che le viti sono incassate dal cemento per consentire la fissazione stabile del connettore. Posizionare l’animale lateralmente. Trapano con attenzione il cochleostomy 1 mm dalla nicchia finestra rotonda utilizzando una sfera diamantata 0,5 mm a una velocità di rotazione di 5000 giri al minuto. Inserire con cautela l’elettrodo al tympani di scala ad una profondità di 4 mm. Ritirare l’elettrodo e ripetere l’inserimento. Vedere la Figura 2 per l’elettrodo utilizzato per l’impianto cocleare cavia. Utilizzando un ago dritto, sigillare la zona cochleostomy con un piccolo pezzo di muscolo. Difficoltà l’elettrodo sull’orlo cranica della bullostomy con 10 µ l di colla tessuto utilizzando una siringa da 1 mL con ago 27G. Preparare il cemento dentale come accennato in 3.14. Chiudere accuratamente il bullostomy con circa 0,3 mL di cemento dentale utilizzando una spatola. Chiudere l’incisione retroauricular utilizzando suture assorbibili 5-0. Ruotare l’animale nella posizione incline. Quando si intendono misure CAP, afferrare il bordo posteriore dell’incisione rettangolare al vertice dell’animale utilizzando un tessuto forcipe. Utilizzare una forbice con l’altra mano per fare un tunnel sottocutaneo di circa 2 cm di lunghezza del collo dell’animale. Quando si intendono misure CAP, impiantare il filo 2,5 cm oro per via sottocutanea nel collo dell’animale utilizzando una pinza. Saldare l’estremità più corta non isolata al designato pin del connettore sul vertice dell’animale. Quando si intendono misure CAP, saldare l’elettrodo di nicchia della finestra rotonda (filo d’oro) per il pin del connettore sul vertice dell’animale. Applicare una quantità aggiuntiva di cemento dentale nella parte superiore del connettore per coprire integralmente i perni isolati e l’elettrodo. Quando si intendono misure CAP, eseguire misurazioni postoperatorie secondo il protocollo di ricerca. 4. postoperatoria Applicare atipamezolo e flumazenil per via sottocutanea dopo la chirurgia e le misurazioni per antagonizzare l’anestesia. Applicare la soluzione fisiologica come sostituzione fluido per sostenere il recupero dell’animale dalla chirurgia. Metti l’animale sotto una lampada di riscaldamento finché ha recuperato pienamente dall’anestesia e inizia a muoversi all’interno della gabbia. Prevenire l’ipertermia o masterizzare inserendo la lampada di riscaldamento di circa 50 cm per l’animale. Assicurarsi che la temperatura del corpo dell’animale è sempre compresa tra 37,5 ° C e 39 ° C. Controllare l’animale per sintomi di lesioni vestibolari come nistagmo, un cerchietto o ribaltamento. 13 , 14 Applicare buprenorfina per analgesia due volte al giorno per due ulteriori giorni dopo l’intervento.Nota: Prima della prima applicazione di buprenorfina post-chirurgia assicurarsi che l’animale ha completamente recuperato e ha respirazione stabile. Applicazione di questo farmaco mentre l’animale è ancora sotto anestesia può portare a depressione respiratoria. Pesare l’animale durante il primo post-ambulatorio 3 giorni per rilevare la perdita di peso possibile come un marker surrogato di afflizione durante questo tempo.Nota: Perdita di peso di circa il 10% durante il primo post-ambulatorio 3 giorni può essere previsto e dovrebbe essere considerato comune. Questa perdita di peso è temporanea e recupererà entro pochi giorni.