Cochlea-Implantation in das Meerschweinchen

Alle Tierversuche stimmten mit der lokalen Tierschutz-Ausschuss und dem österreichischen Bundesministerium für Wissenschaft, Forschung und Wirtschaft. 1. Vorbereiten der Ausrüstung und Einrichtung für eine Operation erforderlich Positionieren Sie das Operationsmikroskop, Bohrer, Heizplatte und Puls Oximeter ermöglicht einfache und effiziente Handhabung während der Operation. Überprüfen Sie die Funktion der Geräte anhand der Bedienungsanleitung des Herstellers. Stellen Sie sicher, dass die Heizplatte bei 38 ° C eingestellt ist, um das Tier während der Operation vor Unterkühlung zu schützen. Setzen Sie auf eine Motorhaube und eine Maske. Durchführen Sie chirurgische Händedesinfektion. Waschen Sie Hände sorgfältig mit Seife. Trockene Hände und dann mit einem alkoholischen Händedesinfektionsmittel Hände zu desinfizieren. Handschuhe ziehen Sie an, nachdem die Hände trocken sind. Bereiten Sie die sterilisierten chirurgischen Instrumente und die notwendige Ausstattung für Cochlea-Implantation. Sehen Sie die Tabelle der Materialien für den chirurgischen Instrumenten und Geräten für Meerschweinchen CI Implantation in diesem Protokoll verwendet. Bei zusammengesetzten Aktionspotentials (CAP) Messungen bestimmt sind, bereiten Sie eine ca. 3,5 cm langes Stück Teflon-isolierte Golddraht durch sorgfältig entfernen von Teilen der Isolierung von beiden Enden mit einem Mikro Zangen (ca. 3 mm von einem Ende und 5 mm aus das andere Ende). Bereiten Sie einem zweiten Stück Golddraht (ca. 2,5 cm) mit abisolierten enden von ca. 5 mm. Ort der vorbereiteten Drähte in Alkohol oder Desinfektionsmittel. (2) Anästhesie, Medikamente und tierische Vorbereitung Wiegen Sie das Tier.Hinweis: Tiere sind weibliche Dunkin Hartley Albino-Meerschweinchen. Das Gewicht der Tiere verwendet, die ca. 4-6 Wochen alt sind, reicht von 300 bis 400 g. Bereiten Sie die Narkosemittel und Medikamente für die Chirurgie, die bezogen auf das Gewicht des Tieres erforderlich. Bereiten Sie 0,72 mL der Narkose Mischung, bestehend aus 0,06 mL Ketamin (100 mg/mL), 0,18 mL Medetomidine (1 mg/mL), 0,12 mL Midazolam (5 mg/mL) und 0,36 mL von Fentanyl (50 µg/mL) für eine Operation auf einem 400 g Meerschweinchen. Siehe Tabelle 1 für gewichtsbezogenen Dosen von der Anästhesie. Die Mischung von Ketamin, Medetomidine, Midazolam und Fentanyl subkutan, die Fettpolster am Hals des Tieres mit einer 27 G Nadel zu injizieren. Siehe Tabelle 1 für Gewicht Dosen von der Anästhetika basiert. Decken Sie den Käfig und lassen Sie das Tier in einen ruhigen Ort für 10 Minuten, bevor Sie fortfahren. Schmieren Sie die Augen des Tieres zu, und halten sie während des gesamten Verfahrens geschmiert. Rasieren Sie den Kopf des Tieres, mit Schwerpunkt auf der retroaurikulären Region, um einen ausreichenden chirurgischen Zugang zu der Bulla zu ermöglichen. Positionieren Sie das Tier auf der Heizplatte in Bauchlage und stellen Sie sicher, dass das Tier nicht in direktem Kontakt mit der Heizplatte, um Verbrennungen zu vermeiden. Platzieren Sie die Pulsoximeter Sonde auf einem Fuß des Tieres. Dann öffnen Sie vorsichtig das Maul des Tieres mit einem kleinen Laryngoskop und sauber die gesamte Mundhöhle aus der Nahrung ruht mit einem Saugnapf. Halten Sie den Mund des Tieres mit dem Laryngoskop eröffnet. Legen Sie eine Magensonde in die Speiseröhre des Tieres, und drücken Sie es langsam in Richtung des Magens, bis ein Widerstand spürbar ist. Überwachen der O2-Sättigung des Tieres um sicherzustellen, dass die Magensonde nicht in der Luftröhre ist. Die Magensonde zu entfernen, ist eine Abnahme der O2 Sättigung und versuchen Sie es erneut, nachdem das Tier völlig Sauerstoff ist. Injizieren Sie eine Mischung aus physiologischer Kochsalzlösung, 5 % Traubenzucker und Enrofloxacin in die Fettpolster am Hals des Tieres mit einer 23 G Nadel. Verwenden Sie alkoholischen Händedesinfektionsmittel Hände erneut zu desinfizieren. Neue saubere Handschuhe anziehen. Bereiten Sie das OP-Feld mit abwechselnden Peelings von Povidon-Jod und 70 % Ethanol und decken Sie das Tier zu. Verwendung selbstklebende drapiert oder Handtuch Klemmen um sicherzustellen, dass nur das OP-Feld während des Verfahrens unbedeckt bleibt. Subkutan injizieren Sie 0,1 mL 2 % Lidocain-Lösung in den Bereich der die geplante Schnittführung für ausreichende Lokalanästhesie und positionieren Sie das Tier seitlich zu. Neu Dosieren Sie das Tier mit ¼ der ursprünglichen Dosis der Narkose Mischung alle 30 Minuten nach der ersten Injektion weiterhin ausreichende Anästhesie. (3) Cochlea-Implantation Führen Sie eine etwa 2-3 cm Hautschnitt ca. 3-5 mm hinten auf die Ohrmuschel mit einem Skalpell. Verwenden Sie bipolar Cautery wenn notwendig, um Blutungen zu minimieren.Hinweis: Durch das Fehlen von Pedal Rückzug vor der erste Schnitt sollte Narkose Tiefe bestätigt werden. Dieser Test sollte alle 15-20 Minuten wiederholt werden, um die Narkose Tiefe während des Verfahrens zu überwachen. Schneiden Sie vorsichtig die Muskeln im Bereich retroaurikulärer nach dem Abtasten der auditiven Bulla mit einem 15 Skalpell oder chirurgische Scheren.Hinweis: Palpate der auditiven Bulla als eine Prominenz unter den Muskeln. Zerlegen Sie die Muskeln von der Bulla durch Drücken sie sanft zur Seite mit einem raspatoriums oder einem Wattestäbchen. Verwenden Sie einen Retraktor zu entlarven die volle Länge des Schnittes und haben Zugriff auf die Bulla ungehindert. Verwenden Sie die Spitze des 15 Skalpell, Bohren Sie ein Loch in der Bulla. Drehen Sie vorsichtig das Skalpell, bis die Knochen perforiert ist, um eine Inspektion der Mittelohr Strukturen ermöglichen. Die Bullostomy zu vergrößern, wie notwendig, um sicherzustellen, dass die basalen Ende der Cochlea und der runden Fensternische angemessen visualisiert werden. Positionieren Sie den Kopf des Tieres in einer gebeugten Position, um diese Strukturen zu gelangen. Decken Sie den Bereich der Bullostomy mit einem kleinen Stück einer Kompresse zu verhindern, dass Blut und der extrazellulären Flüssigkeit zum mittleren Ohr einfahren.Hinweis: Die gebeugte Position des Kopfes kann die Atemwege des Tieres behindern. Die Sauerstoffsättigung des Tieres muss daher häufig überprüft werden. Positionieren Sie das Tier in Bauchlage. Setzen Sie den Scheitelpunkt des Tieres durch einen rechteckigen Einschnitt und die Haut entfernen. Das Periost zerlegen und Reinigen des Knochens von jeder anderen Art von Gewebe- oder Blutproben mit einem Skalpell. CAP-Messungen bestimmt sind, die Vorbereitung der 3,5 cm Teflon isoliert Golddraht abschließend bilden einen kleinen Haken mit einem Mikro Zangen am Ende des Drahtes, die für 3 mm unisoliert wurde. CAP-Messungen bestimmt sind, führen Sie zum Jahresende Golddraht, unisoliert für 5 mm, subkutan zum Scheitel durch eine 18 G peripheren Venenkatheter mit einem Mikro Pinzette wurde. Verwenden Sie ein anderes Mikro Zange mit der anderen Hand um das hakenförmige Ende des Drahtes sorgfältig in führen zum mittleren Ohr. CAP-Messungen bestimmt sind, beugen Sie den Kopf des Tieres, das Gebiet von der runden Fensternische durch die Bullostomy zu visualisieren. Verwenden Sie andererseits, Golddraht, der knöchernen Vorsprung von der runden Fensternische Haken mit einem Mikro Zangen. Sanfte Spannung an den Golddraht zu erhalten und an den kranialen Rand der Bullostomy mit 10-15 µL Gewebekleber mithilfe eine 1 mL Spritze mit einer 27 G Nadel befestigen. Vermeiden Sie Verschiebung des Leims ins Mittelohr. Siehe Abbildung 1 für eine intraoperative Bild des Bereichs Rundfenster mit in-situ Golddraht. CAP Messungen bestimmt sind, schließen Sie das ungedämmte Ende der Golddraht an den Geräten zur Messung akustisch Potentials und Baseline-CAP-Messungen durchführen. Siehe Honeder Et Al., 2016, für eine detaillierte Beschreibung der CAP-Messungen in unserem Labor routinemäßig durchgeführt. 12 Positionieren Sie das Tier in Bauchlage. Bohrungen Sie 2 1 mm anterior der Lambda-Naht mit einem 1-mm-Grat ohne dass Schäden an der Dura. Implantat-2 Edelstahl-Schrauben 2mm in den Schädel.Hinweis: Die Schrauben dienen als Befestigungspunkte für den Anschluss der Elektrode. Passen Sie den Abstand zwischen den Schrauben im Verhältnis zur Größe des Steckers. Verwenden Sie einen peripheren Venenkatheter 18 G, um die Elektrode aus dem Anschluss zu Bulla in einer Gewebeschicht möglichst nahe an den Schädel wie möglich zu führen. Das dental Zement-Pulver mit Flüssigkeit für dental Zementpulver mit einem Spatel laut Handbuch des Herstellers. Platz 0,5 – 0,7 mL zähflüssig dental Zement zwischen die Schrauben mit einem Spatel. Positionieren Sie den Stecker der Elektrode zwischen den Schrauben. Halten Sie den Connector in Position, bis der dental Zement ausgehärtet wird. Stellen Sie sicher, dass die Schrauben durch den Zement, um stabile Fixierung des Steckers ermöglichen ummantelt sind. Positionieren Sie das Tier zur Seite. Bohren Sie vorsichtig die cochleostomie 1 mm von der runden Fensternische mit diamantkugel ein 0,5 mm bei einer Drehzahl von 5000 Schuss pro Minute. Legen Sie die Elektrode in die Scala-Pauke bis zu einer Tiefe von 4 mm. Abziehen der elektrodendurchmessers und wiederholen Sie das Einfügen. Siehe Abbildung 2 die Elektrode für Meerschweinchen Cochlea-Implantation verwendet. Mit einer geraden Nadel, Versiegeln der cochleostomie Bereich mit einem kleinen Stück des Muskels. Befestigen Sie die Elektrode an den kranialen Rand der Bullostomy mit 10 µL Gewebekleber mithilfe eine 1 mL Spritze mit einer Nadel 27 G. Vorbereiten des dental Zements wie in 3.14 erwähnt. Schließen Sie Bullostomy mit ca. 0,3 mL dental Zement vorsichtig mit einem Spatel. In der Nähe des retroaurikulärer Schnittes mit 5: 0 resorbierbaren Fäden. Drehen Sie das Tier in der Bauchlage. CAP-Messungen bestimmt sind, greifen Sie hinteren Rand des rechteckigen Einschnitt auf den Scheitelpunkt des Tieres mit einem Gewebe-Zangen. Verwenden Sie eine Schere mit der anderen Hand einen subkutanen Tunnel von ca. 2 cm Länge in den Hals des Tieres zu machen. CAP-Messungen bestimmt sind, Implantat-2,5 cm gold Draht subkutan in den Hals des Tieres mit einer Pinzette. Löten Sie das kürzere unisolierte Ende an den dafür vorgesehenen Pin des Steckers auf den Scheitelpunkt des Tieres. CAP-Messungen bestimmt sind, Löten Sie die Rundfenster Nische Elektrode (Golddraht) der entsprechende Pin des Steckers auf den Scheitelpunkt des Tieres. Beantragen Sie einen zusätzlichen Betrag von dental Zement auf der Oberseite der Connector die isolierte Pins und der Elektrode vollständig abdecken. CAP-Messungen bestimmt sind, führen Sie postoperative Messungen nach der Forschungs-Protokoll. 4. postoperative Pflege Atipamezol und Flumazenil subkutan nach Auftragen der Chirurgie und Messungen um die Narkose zu antagonisieren. Wenden Sie physiologische Kochsalzlösung als Fluid Substitution auf die Erholung des Tieres aus der Chirurgie zu unterstützen. Legen Sie das Tier unter einer Wärmelampe, bis es vollständig aus der Narkose erholt hat und beginnt sich zu bewegen in den Käfig. Verhindern, dass Hyperthermie oder indem man die Heizung Lampe brennen ca. 50 cm zum Tier. Stellen Sie sicher, dass die Körpertemperatur des Tieres immer zwischen 37,5 ° C und 39 ° C. Überprüfen Sie das Tier für Symptome der vestibulären Verletzungen wie Nystagmus, Kreisen oder überrollen. 13 , 14 Buprenorphin für Analgesie zweimal täglich für zwei weitere Tage nach der Operation anwenden.Hinweis: Vor der ersten Anwendung von Buprenorphin nach der Operation stellen Sie sicher, dass das Tier sich komplett erholt hat und stabile Atmung hat. Anwendung dieser Medikamente zwar das Tier noch in Narkose kann zu Atemdepression führen. Wiegen Sie das Tier während der ersten 3 Tage nach der Operation möglich Gewichtsverlust als Surrogat-Marker für die Not in dieser Zeit zu erkennen.Hinweis: Gewichtsverlust von etwa 10 % während der ersten 3 Tage nach der Operation zu erwarten und gemeinsame betrachtet werden. Dieser Gewichtsverlust ist temporär und wird innerhalb weniger Tage erholen.