Целью протокола является подготовить гидролизат кератина от куриные перья в щелочной ферментативный гидролиз и проверить ли добавление гидролизат кератина в косметике мазь базовый улучшает барьерные функции кожи (повышение гидратации и снижается трансэпидермальную потерю воды). Испытания проводятся на мужчин и женщина добровольцев.
Гидролизаты кератина (KHs) являются установленных стандартных компонентов в Косметика для волос. Понимание увлажняющий эффект KH выгодно для косметики, ухода за кожей. Целями Протокола являются: (1) для обработки куриные перья в KH, щелочные ферментативный гидролиз и очищения методом диализа и (2) для проверки, если добавление KH в базу мазь (OB) повышает гидратацию кожи и улучшает барьерные функции кожи, уменьшение трансэпидермальную потерю воды (TEWL). В щелочной ферментативный гидролиз перья инкубируют при более высокой температуре в щелочной среде, а затем в группе мягких условиях, гидролизуется с протеолитических ферментов. Dialyzed решение KH, вакуумные сушеные и молотые в мелкий порошок. Косметических препаратов, включающий от нефти в водной эмульсии (O/W), содержащий 2, 4 и 6% Вес кН (на основании веса Обь) готовы. Проводится тестирование увлажняющими свойствами KH на 10 мужчин и 10 женщин промежутки времени 1, 2, 3, 4, 24 и 48 ч. протестированных составов распространяются на участках обезжиренной ладонной предплечья. Увлажнение кожи рогового слоя (SC) оценивается путем измерения емкости кожи, которая является одним из наиболее мире используется и простых методов. TEWL основан на измерении количество воды, перевозимых в определенный район и период времени от кожи. Оба метода являются полностью неинвазивной. KH делает отличные окклюзионной; в зависимости от добавления KH в Обь она приносит сокращение на 30% в TEWL после применения. KH также функционирует как увлажнитель, как он связывает воду из нижних слоев эпидермиса к SC; в оптимальное дополнение KH в Обь до 19% рост в гидратации в мужчин и 22% рост женщин происходит.
Скотобойни, пищевой промышленности и Кожевенная промышленность ежегодно производят огромное количество твердых кератин побочных продуктов – шерсть, перья, щетина, копыта, когти, рога и тому подобное. Согласно последним статистическим данным общая живой вес кур, индеек, уток и другие убой птицы в США составляет 62,5 миллиарда фунтов за год1; в ЕС это примерно 28,7 млрд фунтов в год. Учитывая, что перья до 8,5% от веса всего птицы, США только ежегодно производит около 5,3 млрд фунтов отходов перья2.
Кератин является белок экспонируется высокая химическая стойкость, потому что это сильно Пенополиолефины с мосты дисульфида, которые затрудняют его обработки. Получения растворимых продуктов требует раскалывание перекрестные ссылки и возможно проведение гидролиза пептидных связей3. Расщепление мосты дисульфида может действовать через реакции анионов тиоловых согласно следующим шаблон4,5:
S– + – SbSc– ↔ – Sb– + – SSc–
С очень высоким рН гидролиз мосты дисульфида также появляется в соответствии с узором6
-SS– + → OH– –– S-Сох
В мягких условиях (рН около 8) даже sulfitolysis проходит по следующей схеме:
-SS – + HSO →3– – ш + – SSO3–
Наиболее экономичным способом унижающего достоинство Кератин является микробных разбивка, который характеризуется мягкая реакция условий во время обработки и высокой разбивка КПД (около 90%)7,8. Keratinases производятся некоторые бактерии, изолированный от почвы и кератин отходов9. Микробной keratinases гидролизуют жесткой и сильно сшитого кератин структур10 и результирующая KH подготовлен богаты растворимые белки, без потери незаменимых аминокислот, обнаруженных в нем11.
Для того, чтобы включать белка в косметических препаратов (например, эмульсии, лосьоны и гели), требования обеспечить, что такие белки, растворимые в воде, данные системы являются прозрачными и что повторное агрегирование пептидов избегать из-за гидрофобных взаимодействий. Таким образом обычной практикой является применение гидролизатов белков, таких как гидролизованный коллаген, эластин и кератина. При добавлении гидролизаты в косметические эмульсии, предпринимаются шаги для обеспечения что гидролизат сначала растворяется в воде. В некоторых случаях желательно, что белок (или гидролизата) растворяется в спирте или других органических растворителей12.
KH обычно характеризуется в шампуни, кондиционеры, лосьоны и Питательная сыворотка для волос, а также туши для ресниц, ногтей и агентов макияж глаз. Эффекты KH, объявил обычно включают в себя, образуя защитную пленку, разглаживание волос или ногтей структуры, повышенной пластичностью и внешний вид обработанной формирования, регулирующих последовательность продуктов и поощрение формирования пены13 , 14. также было доказано, что KH уменьшает поверхностное натяжение, следовательно добавок в косметике могут способствовать сокращение эмульгатор добавляется стабилизировать кремов. KH ограничить последствия раздражения, вызванные моющие средства (ПАВ) кожи, глаз и волос, таким образом уменьшая любые потенциальные побочные эффекты чистящих средств на ткани (например, обезвоживание кожи, твердости и снижение барьерной функции кожи). Высокая буферизации способности гидролизаты также использована для стабилизации рН косметики; пептиды короче длины имеют большую буферизации эффект15,16. Хотя как стандартные компоненты становятся установили KHs в волос и косметика для ногтей, а также используются в продуктах для ухода за кожей, исследования на увлажняющий эффект KH не появляются в современной литературе.
Щелочная ферментативный технология была разработана для обработки субпродуктов кератин в KH, и активное тестирование в процесс по воздействию целого ряда косметических добавки17,18,19,20 , 21 , 22. преимущество щелочной ферментативный гидролиз два этапа с помощью микробных протеазы для куриные перья достигает высокую эффективность в условиях мягкая реакция и качество KH является очень высоким, в отличие от гидролиза, занятых в сильных кислот или щелочей. На первом этапе перья инкубируют при более высокой температуре в щелочной среде, которая частично разрушает структуру кератина и набухает перья; После корректировки рН, перья гидролизуется с протеолитического фермента мягкая условиях на втором этапе. Dialyzed KH обладает высоким содержанием белков.
В целях метода, описанного здесь переработки птицы перья в KH через щелочные ферментативный гидролиз и тестирование эффект увлажняющими свойствами KH, применяется к косметическая Эмульсия O/W. Увлажняющие свойства расследуются инструментальные неинвазивные методы в естественных условиях. Наиболее частые методы для измерения кожи гидратации и барьер функция SC включают измерения электрических свойств кожи (проводимости или емкости). Различные методы для изучения гидратации SC включают вблизи инфракрасные многоспектральные воображая метод (NIM), спектроскопии ядерного магнитного резонанса, оптическая когерентная томография или переходных термотрансферные23. Барьерная функция SC коррелирует с TEWL SC и она измеряется вентилируемых палата метод, метод непроветриваемой камере и открытой камерой метод24.
Свойства модели составов определяются с помощью зонда Multi адаптера 5 МПа с тремя типами датчиков. Первая, измерялся см 825, увлажнения кожи меры путем оценки изменений в электрическую мощность на поверхности кожи; измерительного конденсатора показывает изменения в емкость поверхности кожи в единицах corneometric. Измерялся дает только относительной оценки гидратации кожи25. Для TEWL второй зонд, tewameter TM 300, используется для измерения градиента плотности испарения воды (в открытой камерой инструмент, основанный на закон Фика диффузии) из кожи косвенно две пары датчиков (температура и относительная влажность) Указывает количество воды, перевозимого в определенный район и период времени (г/м2/ч). Этот метод может обнаружить даже малейшее нарушение функции барьера кожи26. РН кожи является одним из показателей барьера и антимикробная функции SC27. Кислотность кожи мантии измерялась (третий) кожи 905 рН зонд, подключен к станции 5 МПа. Это специально разработанные зонд состоит из стекла с плоской вершиной электрода для контакта с полной кожей, подключенных к вольтметра. Система измеряет потенциальные изменения благодаря деятельности водорода катионов, окружающих очень тонкий слой твердых форм, измеренных в верхней части зонда. Изменения напряжения в отображаются как рН28.
Мы представляем эксперименты, разделены на три категории: (1) подготовка KH из курицы перья-двухступенчатый щелочной ферментативный гидролиз и его очистки методом диализа (удаление солей и низкомолекулярных фракций), (2) подготовка косметических составы, содержащие 2, 4 и 6% KH и (3) тестирование свойств KH, измеряя увлажнения, TEWL, кожи и кожи рН. Тестирование проводилось на 10 женщин, средний возраст 27,2 лет и 10 мужчин, средний возраст 26.2 лет. Метод отбора добровольцев и тестирования самой были проведены международные этические принципы био медицинских исследований, использование человеческих субъектов29; все лица дали их осознанного согласия до включения в исследование. Перед началом тестирования начался, добровольцев было предложено заполнить вопросник о состоянии их здоровья. Добровольцы, обязались избегать применения любых косметических продуктов испытательных участков и прилегающих районах в течение 24 ч до и во время периода испытаний; Кроме того они были лишь краткое вечером автомойки с проточной водой.
Преимуществом щелочных ферментативный гидролиз является, что он может быть изменен согласно будущих приложений KH. Например в приложениях Косметика Уход за волосами, где слегка коричневого цвета продукта не является препятствием, более высокую температуру в гидролиза могут быть приме…
The authors have nothing to disclose.
Эта статья была написана с поддержкой проекта IGA/FT/2017/007 Томас Бата университета в Злине.
Material or chemicals | |||
LIPEX 100T | Novozymes | LJP30020 | Lipex – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g |
Savinase Ultra 16L | Novozymes | PXN40001 | Savinase – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g |
Potassium hydroxide, KOH | Sigma-Aldrich | 302510289 | Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11 |
Phosphoric acid solution, H3PO4 | Sigma-Aldrich | W290017 | Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00 |
Sodium chloride physiological solution | Sigma-Aldrich | 52455 | Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl |
Sodium hydroxide, NaOH | Penta s.r.o. | 40216 | Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00 |
AmiFarm (Cremor base-A) | Fagron | 608425 | Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben. |
Name | Company | Catalog Number | コメント |
Equipment | |||
IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers | IKA-labortechnik | Z404020 | Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs |
IKA Propeller stirrer, 3-bladed | IKA-labortechnik | R 1381 | Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer Ø: 45 mm, shaft Ø: 8 mm, shaft length: 350 mm |
Dialysis tubing closures | Sigma-Aldrich | Z371017-10EA | Dialysis tubing closures, red, size 110 mm |
Dialysis tubing cellulose membrane | Sigma-Aldrich | D9402-100FT | Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.) |
DOMO Pot with stailess, LCD | DOMO Elektronic | DO42325PC | Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 ° C, operation LCD display |
Hettich zentrifugen Universal 32 | Gemini bv | 2770 GS1R | Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm |
LT 3 shaking device | Fischer Scientific | 6470.0002 | Orbital shaking device |
KERN 440-47N | Kern | 440-47N | Laboratory balance |
KERN 770 | Kern | 770 -N | Laboratory analytical balance |
VENTICELL 222 – Komfort | BMT, MMM Group | C 131749 | Drying oven, temperature control 30-100 ° C, air circulation control |
Vacucell 55 – EVO | BMT, MMM Group | B 050328 | Vacuum drying oven, temperature control 30-100 ° C |
PULVERISETTE 19 | Fritsch | 19.1030.00 | Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives |
Multi Probe Adapter System MPA 5 | Courage & Kazaka Electronic | 10225237 | MPA 5 Station – equipment for measurement hydratation, TEWL and pH |
Skin pH-meter PH 905 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp | |
Corneometer CM 825 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum). | |
Tewameter TM 300 | Courage & Kazaka Electronic | Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL) | |
Heidolph RZR 2020 | Heidolph | 13-225-007-03-1 | Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm |
Heidolph mechanical stirrer BR 10 | Heidolph | Z336688-1EA | Blade impeller crossed stirrer |
Fagor FS 12 | Fagor | BTT-138 | Laboratory refrigerator with freezer space |
WTW bench pH/mV meter | WTW | Z313165 | High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories |
Container | RPC Superfos | 13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm | |
Name | Company | Catalog Number | コメント |
Software | |||
Microsoft Office 2010 | Microsoft | ||
C+K software | Courage and Khazaka Electronic GmbH | MPA 5 station operating software |