Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer's Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein

Wu Xiaoguang; Cheng Jianjun; Cao Qinying; Zhang Hui; Yang Lukun; Shang Yazhen

doi:10.3791/56157

JoVE Journal > Behavior

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

行動学

إنشاء تقليد قيماً من مرض الزهايمر في نموذج الفئران الحيوان عن طريق الحقن إينتراسيريبروفينتريكولار لبروتين بيتا اميلويد تتكون

Published: July 29, 2018

doi:

10.3791/56157

Wu Xiaoguang*^1,3,5, Cheng Jianjun*^1,3,4, Cao Qinying*², Zhang Hui^2,3, Yang Lukun^1,3,4, Shang Yazhen^1,3,4

¹Institute of Traditional Chinese Medicine,Chengde Medical College, ²Shijiazhuang Obstetrics and Gynecology Hospital, ³Hebei Province Key Research Office of Traditional Chinese Medicine Against Dementia, ⁴Hebei Province Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development, ⁵Institute of Basic Medical Research of Basic Medical School

概要

هذا بروتوكول لتقليد مرض الزهايمر في الفئران بتقييم ضعف الذاكرة المكانية، تغيرات باثولوجية الخلايا العصبية، وعبء البروتين (Aβ) بيتا اميلويد الخلايا العصبية، وتجميع neurofibrillary التشابك، الناجم عن حقن Aβ25-35 جنبا إلى جنب مع ثلاثي كلوريد الألومنيوم والإنسان المؤتلف تحويل عامل النمو-β1.

Abstract

مرض الزهايمر (ميلادي) هو مرض المخ لا رجعة فيه، والتدريجي الذي يدمر الذاكرة ببطء ومصحوبا بتغير الخسارة وهيكل الخلايا العصبية. مع زيادة المرضى الإعلانية في جميع أنحاء العالم، بعلم الأمراض والعلاج من هذا المرض قد أصبح تركيز في “صناعة المستحضرات الصيدلانية الدولية”. وهكذا، إنشاء نموذج الحيوان لتقليد الإعلانية في المختبر من أهمية كبيرة.

هنا، يمكننا وصف بروتوكول مفصل لإرساء تقليد للإعلان في حيوان الفئران نموذج على الرغم من حقن إينتراسيريبروفينتريكولار من اميلويد بيتا البروتين 25-35 (Aβ25-35) جنبا إلى جنب مع ثلاثي كلوريد الألومنيوم (الكل₃) ونواة ثالاميك أنتيرودورسال حقن الإنسان المؤتلف تحويل عامل النمو-β1 (رهتجف-β1) للفئران. وقيست على علامات ذات الصلة من الإعلان، بما في ذلك: الذاكرة المكانية وهيكل الخلايا العصبية ومحيطه، Aβ الخلايا العصبية وإنتاج التشابك نيوروفيبريلاري (NFT). نموذج الفئران هذا يوضح ضعف الذاكرة المكانية وهيكل الخلايا العصبية والتغيرات الهيكلية المرضية وعبء Aβ داخل الخلايا العصبية وتجميع NFT، ويوفر تقليد قريبة من اضطراب هيكل ووظيفة الخلايا العصبية لأن السريرية المرضى الإعلانية. وهكذا قدم الإعلانية الفئران موديلبروفيديس أداة قيمة في فيفو لاستكشاف وظيفة الخلايا العصبية، والأمراض العصبية، وفحص المخدرات للإعلان.

Introduction

فمن المعروف جيدا أن الإعلان مرض الأعصاب المزمن والتدريجي، مع فقدان الذاكرة التدريجي المتلازمة السريرية الرئيسية. في علم الأمراض العامة، هناك ضمور النسيج العصبي، والخلايا العصبية وفقدان المشبك، فضلا عن الخلايا العصبية سوبسيلولار هيكل ووظيفة الاضطرابات، التي تشترك جميعها في التنمية والمظاهر السريرية للإعلان¹^،². ويقال أنه عندما كانت الحيوانات إينتراسيريبروفينتريكولارلي حقن Aβ، تحدث بعض الأحداث عصبية في الدماغ التي تنطوي على فقدان الخلايا العصبية واختلال التوازن الكالسيوم والخلايا العصبية، و الإفراط في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية³. بيد أن عوامل متعددة تشارك في الآلية المرضية للإعلان ولذلك من الضروري إنشاء نموذج أفضل من الإعلان.

يتم وصف بروتوكول مفصلة هنا لإنشاء في فيفو تقليد إعلان نموذجا من خلال حقن إينتراسيريبروفينتريكولار Aβ25-35 والكل₃، جنبا إلى جنب مع حقن نواة ثالاميك أنتيرودورسال من رهتجف-β1 للفئران. يحاكي هذا الجرذ موديلهيغلي وظيفة الخلايا العصبية البشرية وهيستوباثوجينيسيس من الإعلانات، بما في ذلك ضعف الذاكرة وفقدان الخلايا العصبية وبنية الأضرار والمبرمج، داخل الخلايا Aβ عبء و NFT التجميع⁴^،^،من⁵⁶ ^, ⁷ ^, ⁸ ^, ⁹-“الكل”₃ يمنع Aβ المودعة من تشكيل Aβ القابلة للذوبان، ويمكن تعزيز المودعة Aβ إنتاج رهتجف-β1 وتيسير إعلان وقوع¹⁰. هذا الهجوم من عدة عوامل للخلايا العصبية وفقا للآلية المرضية متعددة للإعلان.

امتدت التجربة كامل 86 يوما: الشكل 1 يبين تسلسل زمني للتصميم التجريبي، مع نقطة وقت جراحة الحيوان وفحص نموذج الحيوان واختبار الذاكرة المكانية الحيوانية، وإعداد نموذج. في اليوم الأول من العملية، وكان ميكروينجيكتيد رهتجف-β1 إلى نواة ثالاميك أنتيرودورسال. في اليوم الثاني من العملية، Aβ25-35 والكل₃ كانت ميكروينجيكتيد في البطين الجانبي يوميا لمدة 14 يوما متتالية في الصباح و 5 أيام متتالية في فترة ما بعد الظهر، على التوالي. سمح لجميع الفئران لاسترداد لمدة 45 يوما بعد العملية. تم استخدام المتاهة المائية موريس للشاشة للفئران نموذجا ناجحاً مع ضعف الذاكرة وتقييم الذاكرة المكانية للفئران. على الفئران أجريت 4 أيام متتالية من المتاهة المائية التدريب مع محاكمات 2 لليوم الواحد، وفي يوم 4 من التدريب، قيمت الفئران مع أداء المتاهة المائية موريس لضعف الذاكرة. وواصلت جميع الفئران تغذية 37 يوما بعد فحص نموذج الحيوان. تم اختبار الذاكرة المكانية للفئران في متاهة المياه موريس ما يزيد على 7 أيام متتالية، من يوم 79 إلى 85 غداة العملية. جميع الفئران ضحى بقطع الرأس اليوم 86 لإعداد نموذج الدماغ.

الشكل 1. التسلسل الزمني للتصميم التجريبي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Protocol

وكان هذا الإجراء وفقا “اللوائح إدارة الحيوانات التجريبية” الصادرة عن لجنة الدولة للعلوم والتكنولوجيا في الصين في 31 أكتوبر 198811. العلماء ينبغي أن يتبع المبادئ التوجيهية التي أنشئت ووافقت عليها المنظمات التنظيمية الحيوان المؤسسية والوطنية. ملاحظة: الحيوانات والحكام: عمره أربعة أشهر ذكور الفئران سبراغ داولي (300-350 غ) التي تم توفيرها لهذه التجربة. تم إيواء جميع الفئران في مجموعات (أربع أو خمس في قفص) عند درجة حرارة 23 ± 1 درجة مئوية مع دورة الضوء الظلام 12-ح. الأغذية والمياه كانت متوفرة libitum الإعلانية. كانت أقلمة الفئران لظروف السكن لمدة 7 أيام قبل كان تنفيذ الإجراء. Aβ25–35 المذابة في المحلول الملحي [دمس] 1% إلى 1 مغ/مل، وسونيكاتيد لمدة 5 دقائق في مذبذب بالموجات فوق الصوتية حتى يذوب تماما. الكل3 ورهتجف-β1 تم حله في المحلول الملحي في 1% و 0.1 مغ/مل، على التوالي. أحمر الكونغو ونترات الفضة وغيرها من المواد الكيميائية ذات المرتبة التحليلية وتم شراؤها من مصادر تجارية عادية. 1-الجراحة ملاحظة: 20 ذكور الفئران سبراغ داولي ميكروينجيكتيد مع Aβ تتكون في البطين الجانبي ونواة ثالاميك أنتيرودورسال، وعينت تتكون المجموعة تعامل Aβ. الفئران 20 آخر تعرضوا لنفس العملية ولكن تلقي [دمس] 0.1% microinjection المالحة، وعينت كمجموعة تعمل بالشام. تخدير الفئران مع إيسوفلوراني 100% بالاستنشاق وكبح جماح ثم في “جهاز ستيريوتاكسيك الدماغ”. يحلق الفراء في ذروة الرأس بالمقص الجراحي وتطهير مع إيودوفور. ثم، تغطية المتاح الجراحية منشفة على رأسه. جعل شق على جلد الرأس على طول كالفاريا طولية الوسيط مع بسطورس الجراحية والمقص. فصل النسيج تحت الجلد ورباط ومسح كالفاريوم الجمجمة مع القطن جافة عقيمة لوقف النزيف ووضع علامة بريجما بقلم ماركر. يشير إلى الفئران الدماغ خريطة ستيريوتاكسيك12؛ نظراً بريجما كنقطة المنشأ، وضع علامة على النقاط الثلاث، نواة أنتيرودورسال ثالاميك (ad) (الخلفي (ف): 2.0 ملم بريجما؛ والجانبية (L): 1.4 ملم إلى خط الوسط) للحقن رهتجف-β1 وواحد المسمار، (منطقة البطين الجانبي (LV) تحديد الخلفي (ف): 0.8 ملم إلى بريجما؛ الجانبية (L): 2.0 مم إلى خط الوسط) للحقن AlCl3، Aβ25-35 والمسمار الثاني تحديد مكان (الجبهة (و): 2.0 ملم بريجما؛ والجانبية (L): 1.5 مم على خط الوسط). حفر ثلاثة ثقوب قطرها 1 ملم بلطف مع حفر عظم مرنة، عينت في النقاط الثلاث المذكورة أعلاه للجمجمة (1.5. خطوة). لا المسمار أعمق مما هو ضروري لتجنب طعن أنسجة المخ. وقف النزيف وتنظيف سطح الجمجمة مرارا وتكرارا مع القطن الجافة العقيمة. أدخل إبرة مرتبطة إلى مضخة حقن الصغرى، في الدماغ في العمق 4.6 مم وحقن بلطف 1 ميكروليتر رهتجف-β1 (10 نغ) في مجال الإعلان. البقاء إبرة 2 دقيقة بعد الحقن وسحب ببطء الإبرة (تكميلية ملف 1). إصلاح مسامير اثنين في الجمجمة، عينت في النقاط الإعلانية والمسمار الثاني تحديد مكان الجمجمة (التي حددت في 1.5. خطوة) مع مفك براغي صغيرة. لا المسمار أعمق مما هو ضروري لتجنب طعن أنسجة المخ. تجميع النظام غرس القنية (2 ملف إضافي)، وإدراج قنية دمية في قنية دليل بعد التعقيم بالضغط العالي. إدراج قنية دليل أنابيب الفولاذ المقاوم للصدأ في الدماغ في 4.6 ملم في ناحية LV من خلال الثقب في الجمجمة (تكميلية ملف 3)، مع مساعدة صاحب القنية الفئران جهاز ستيريوتاكسيك. خلط المواد قاعدة أسنان مع المياه قاعدة أسنان نسبة 1.5 غرام لكل 1 مل, وضع اللصق لتغطية قنية دليل قاعدة التمثال البلاستيك ومسامير اثنين لشل حركة قنية دليل وحتى الغطاء شق الجلد كله لتجنب العدوى الجلدية. في اليوم الثاني من العملية، تخدير الفئران مع استنشاق إيسوفلوراني باستخدام “آلة تخدير الحيوانات الصغيرة”. استخلاص قنية وهمية وإدراج قنية الداخلية في قنية دليل المسمار المسمار تحديد لشل قنية الداخلية. تعيين أنابيب البولي إيثيلين التي تربط المضخة microinjection إلى قنية الداخلية وتنظيم سرعة الحقن إلى 1 ميكروليتر/الحد الأدنى ميكروينجيكت Aβ25-35 أو AlCl3 للعائلة ميكروينجيكت 4 ميكروغرام (1 ميكروليتر) Aβ25-35 يوميا لمدة 14 يوما في الصباح و الكل ميكروليتر 33 (1%) يوميا لمدة 5 أيام بعد ظهر اليوم تحت التخدير إيسوفلوراني. انتظر 5 دقائق بعد الانتهاء من الحقن ولطف استخلاص قنية الداخلية وإدراج قنية الدمية مرة أخرى في قنية دليل. في يوم 15 بعد الجراحة (الذي يقابل إلى آخر يوم حقن Aβ25-35) تفكيك نظام غرس القنية. بلطف إزالة بدلة قاعدة المواد الصلبة مع المقص الجراحي والملقط وفك المسمارين، وسحب قنية دليل، وتطهير الجرح بتدين. سد ثقب الجمجمة مع أسمنت العظام وخياطة الجلد بطريقة خياطة توقف بسيطة. تنفيذ نفس العملية مع مجموعة تعمل بالشام وميكروينجيكت المالحة [دمس] 0.1%. التمريض بعد العملية الجراحية بيت الفئران 2 في قفص بعد العملية وتوفير الغذاء لمدة 30 يوما.ملاحظة: 18 الفئران في المجموعة تعمل بالشام نجا (90% نسبة نجاح العملية)، والفئران 19 تتكون المعالجة Aβ الفريق نجا (نسبة النجاح 95% من العملية). 2-التحري عن الفئران نموذجا ناجحاً وتقييم للذاكرة المكانية مع متاهة المياه موريس متاهة المياه موريسملاحظة: استخدمت المتاهة المائية موريس لتقييم الذاكرة المكانية الجرذ13. المتاهة موريس المياه خزان الفولاذ المقاوم للصدأ دائرية بقطر 120 سم وعمق 50 سم. وأجرى اختبار المتاهة المائية، استناداً إلى نموذج “المعايير الذهبية” الموصوفة في توحد نونيز ج.14. لجأتم الماء تجمع مع عدة قطرات من تلوين الطعام. الحفاظ على عمق المياه في 31.5 سم ودرجة حرارة 23 ± 1 درجة مئوية. تعيين منصة دائرية شفافة شبكي 1.5 سم تحت سطح الماء. المحافظة على أن جميع الإشارات المكانية حول المتاهة المائية ثابتة أثناء الاختبارات المتاهة المائية. تقسيم المجمع إلى 4 أجزاء متساوية بخطوط وهمية لجمع البيانات الوصفية. وضع النظام الأساسي الخفية في الربع الأول (Q1) من المتاهة المائية. التقاط الفئران السباحة السلوكيات (تقاس بالكمون، مسار، أو عبور عدد) من خلال كاميرا فيديو، عبر المتاهة المائية المرتبطة ببرامج تحليلية رسومات المستندة إلى الكمبيوتر. الفحص للفئران نموذجا ناجحاً لتتكون المجموعة تعامل Aβ اليوم 45 من الجراحة، أداء المتاهة المائية موريس تدريب لمدة 4 أيام متتالية للشاشة للفئران نموذجا ناجحاً مع ضعف الذاكرة وجمع نسبة الفرز (SR).ملاحظة: يتم تعريف ريال كمتوسط زمن الوصول لكل الفئران المعالجة Aβ تتكون ومجموعة تعمل بالشام من الفئران لإيجاد منصة المخفية تحت الماء السطحي في يوم 4 من الماء متاهة التدريب. “” هو زمن الوصول المتوسط لكل الفئران المعالجة Aβ تتكون لإيجاد منصة المخفية وهو “ب” متوسط زمن الوصول من مجموعة تعمل بالشام من الفئران لإيجاد منهاج العمل خفية، في اليوم الرابع من المتاهة المائية التدريب، في المعادلة التالية:عندما ريال كان أكبر من 0.2 لأحد الفئران المعالجة Aβ تتكون، باعتبارها الفئران الفئران نموذجا ناجحاً مع ضعف الذاكرة تتكون الفئران المعالجة Aβ15. وحسب أداء الذاكرة اللحظية للبيانات الخاصة بالمحاكمات 2 بمتوسط القيمة للفئران لإيجاد منصة المخفية. تم تصميم عملية اختبار المتاهة المائية موريس مثل الفئران سمح للسباحة في خزان المياه المتاهة والبحث عن النظام الأساسي الخفية داخل 60 ثانية. إذا لم تجد الفئران من منصة المخفية داخل 60 s، ثم الفئران وضعت على المنصة مع اليد المجرب. عندما وصلت الفئران على منصة المخفية (بشكل مستقل أو المساعدة)، تم السماح للفئران البقاء هناك ل 20 s. ثم تمت إزالتها من الخزان الفئران ويسمح انتعاش البدني لمدة 10 ق بين المحاكمات 2. 3. فحص الخلايا العصبية في يوم 86 وظيفة الجراحة، تحت التخدير إيسوفلوراني، euthanize الفئران بقطع الرأس (الشكل 1). وضع الدماغ على الجليد وفصل نصفي في رفاء رفق. خذ نصف الكرة الأيسر chiasma البصرية والإصلاح في 4% فورمالدهايد للمراقبة ميكروكوبي الخفيفة توضع الخلايا العصبية وويوزين (أنه) أو أحمر الكونغو أو نترات الفضة وصمة عار (انظر الفروع 4-6). إصلاح منطقة قرن آمون CA1 الحق في نصف الكرة في 2.5 ٪ glutaraldehyde للمراقبة ميكروكوبي الإلكترون (القسم 7). عملية في الدماغ لإعداد نموذج ميكروكوبي الخفيفة/الإلكترون، كما هو موضح سابقا16،17. 4-العصبية هو تلطيخ ديبارافينيزي كل شريحة (20 دقيقة في كل) مع التدرج الكحول (الكحول 100%، 95%، 90%، 80%، و 70 في المائة) الماء في غطاء دخان المقطر. وصمة عار لمدة 3 دقائق مع الهيماتوكسيلين (0.5% w/v)، ومن ثم الشطف بماء الصنبور لإزالة الصبغة غير منضم من الشرائح. شطف مع حمض الهيدروكلوريك 0.1% في الكحول ل 1 s لإزالة لون نوى أونستينيد. تزج في محلول الأمونيا 0.5% لمدة 2 دقيقة حتى يتحول الخلفية الزرقاء الخفيفة. وصمة عار لمدة 1 دقيقة مع ويوزين 1%. يذوي لمدة 5 دقائق مع التدرج الكحول (الكحول 70%، 80%، 90%، 95% و 100%). من الواضح في زيلين نفط وجبل مع تصاعد راتنجية المتوسطة. مراقبة وحساب الخلايا العصبية الحية لأنه وصمة عار كل 0.125 مم في CA1 الأوسط من قرن آمون وكل 0.0352 مم2 في قشرة الدماغ في بير 400 x مع مجهر ضوئي شخص أعمى للتصميم التجريبي. 5-أحمر الكونغو تلطيخ للمعايرة عبء Aβ العصبية ديبارافينيزي كل شريحة (20 دقيقة) مع التدرج الكحول (الكحول 100%، 95%، 90%، 80%، و 70 في المائة) الماء في غطاء دخان المقطر. وصمة عار لمدة 20 دقيقة مع أحمر الكونغو يعمل الحل (0.5 غ أحمر الكونغو، الكحول الميثيل 80 مل، 20 مل جليسيرينوم). شطف في الماء المقطر لمدة 5 دقائق. تميز بسرعة مع قلوية حل الكحول 80% (0.2 ز الكحول/100 مل هيدروكسيد البوتاسيوم) 3 s. شطف مرتين، كل منهما لمدة 5 دقائق مع الماء المقطر. كونتيرستين في توضع الخياشيم التي لمدة 3 دقائق. الشطف بماء الصنبور لمدة 2 دقيقة. السباحة في المياه الأمونيا (إضافة بضع قطرات من هيدروكسيد الأمونيوم للاستفادة من الماء ومزيج جيد) لمدة 30 ق أو حتى المقاطع تشغيل الأزرق. الشطف بماء الصنبور لمدة 5 دقائق. يذوي مع التدرج الكحول (الكحول 70%، 80%، 90%، 95% و 100%). من الواضح في زيلين نفط وجبل مع تصاعد راتنجية المتوسطة. مراقبة وحساب الخلايا ملطخة بأحمر الكونغو في تكبير من 400 x، مجهر ضوئي شخص أعمى للتصميم التجريبي. 6-نترات الفضة تلطيخ للمعايرة تشكيل NFT العصبية ديبارافينيزي كل شريحة (20 دقيقة) مع التدرج الكحول (الكحول 100%، 95%، 90%، 80%، و 70 في المائة) الماء في غطاء دخان المقطر. تزج في 20% من محلول نترات الفضة وعامل متوجا لمدة 20 دقيقة في الظلام. تغسل في الماء المقطر مرتين، 5 دقيقة لكل مرة. تزج في محلول الأمونيا الفضة. إسقاط محلول الأمونيا إلى محلول نترات الفضة 20%، وإضافة حتى الحل يذهب من التعكر للتوضيح. في نفس الوقت، تحريك الحل بقضيب زجاج لمدة 15 دقيقة ومن ثم وضع في هيدروكسيد الأمونيوم 1% المخفف لمدة 2 دقيقة. مكان الانزلاق إلى حل العامل النامي لدقيقة حتى يمكن ملاحظة كتلة سوداء في محور عصبي من 3-7. تزج في محلول الأمونيا 0.1% المخفف لمدة 1 دقيقة وثم يشطف بالماء لمدة 1 دقيقة. التصرف مع ثيوكبريتات الصوديوم 5% لمدة 2 دقيقة وثم يشطف بالماء لمدة 5 دقائق. يذوي مع التدرج الكحول (الكحول 70%، 80%، 90%، 95% و 100%). من الواضح في زيلين نفط وجبل مع تصاعد راتنجية المتوسطة. مراقبة وتسجيل الخلية لنترات الفضة وصمة عار في تكبير من 400 x مع مجهر ضوئي شخص أعمى للتصميم التجريبي. 7-هيبوكامبال العصبية أولتراستروكتوري القياس يقتطع الحصين الفئران CA1 عدة مكعبات (1 × 1 × 1 مم3) ووضع في 2.5 ٪ glutaraldehyde ح 2 في 4 درجات مئوية. شطف المكعبات مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات (pH 7.2، 10 دقيقة لكل مرة). إصلاح المكعبات في 1% حمض أوسميك ح 2 في 4 درجات مئوية. شطف المكعبات في الماء المقطر مزدوجة 3 × (10 دقائق لكل مرة). يذوي مع التدرج من الكحول 50%، 70%، و 90% (10 دقيقة لكل منهما)، 100% مرتين (15 دقيقة لكل مرة). استبدال بأكسيد البروبيلين (15 دقيقة لكل مرة)، مرتين بروبيلين أكسيد: الراتنج 1:1 (60 دقيقة لكل مرة في درجة حرارة الغرفة)، وأكسيد البروبيلين: الراتنج 1:4 (60 دقيقة لكل مرة في درجة حرارة الغرفة). نقع في الراتنج (120 دقيقة، في درجة حرارة الغرفة). تضمين في 812 أبون وبلمره (ح 5/35 درجة مئوية، ح 5/60 درجة مئوية، ح 5/80 درجة مئوية). قطع المقاطع سيميثين (1 ميكرومتر) ووصمة عار بأزرق الميثيلين، وتعريب تحت المجهر. وصمة عار مقاطع رقيقة جداً (50 نانومتر) مع سترات اليورانيل-o-خلات والرصاص. فحص تحت مجهر إلكتروني حركة العدل والمساواة-1400 وجمع الصور.

Representative Results

وتعرض جميع البيانات يعني ± sem. ساس/STAT حزمة تم استخدامه لحساب التحليل الإحصائي. تم تحليل الاختلافات المجموعة في زمن الوصول لإيجاد منصة المخفية في الحصول على الذاكرة والتعلم إعادة اختبار الذاكرة باتجاهين تحليل التباين (ANOVA) مع التدابير المتكررة. تم تحليل الاختلافات المجموعة في التحقيقات الابتدائية وعدد الخلايا العصبية طريق أحادي الاتجاه ANOVA متبوعاً باختبار مجموعة متعددة دنكان. واعتبر ف < 0.05 إحصائيا18. الفحص للفئران نموذجا ناجحاً مع ضعف الذاكرة للمجموعة تعامل Aβ تتكون: النتائج في الشكل 2AA1 و 2AA2 تبين أن المجموعة تعمل بالشام من الفئران سبح دائماً بحرية وتتكون المجموعة تعامل Aβ الفئران (الشكل 2AB1, AB2) سبح دائماً حول محيط بركة السباحة التكيفية في موريس المياه المتاهة. على مدى 4 أيام الفحص لضعف الذاكرة نموذج الفئران، كان جميع الفئران في الانخفاض تدريجيا مرات للعثور على منصة المخفية (الكمون) (الشكل 2ب). في يوم 4 مياه موريس المتاهة التدريب، إذا كان ريال أكثر من 0.2 (التي تستند إلى الكمون كل الفئران المعالجة Aβ تتكون ومجموعة تعمل بالشام من الفئران لإيجاد منصة المخفية)، ثم تتكون الفئران المعالجة Aβ اعتبرت ناجحة نموذج الفئران مع ضعف الذاكرة. وقد اختيرت 18 الفئران 19 (94.70%) التي نجت من عملية تمرير النموذج الناجح الفرز. 6 الفئران من كل مجموعة للتجارب التالية. الشكل 2 . فحص للفئران نموذجا ناجحاً مع ضعف الذاكرة في المجموعة المعالجة Aβ تتكون استخدام المياه موريس المتاهة التدريب- (أ) حوض التكيفية مسار الفئران في المتاهة المائية موريس. (–منAA1AA2) المجموعة تعمل بالشام؛ (AB1–AB2) تتكون المجموعة تعامل Aβ. (ب) الكمون يعني إيجاد النظام الأساسي الخفية لمدة 4 أيام متتالية للمحاكمة الفرز في الماء موريس المتاهة التدريب لمجموعة تعمل بالشام وتتكون المجموعة تعامل Aβ. تم تعديل الشكل من 4 مرجع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- تتكون Aβ تسبب اكتساب ذاكرة الفئران وإعادة التعلم ضعف الذاكرة: اكتساب ذاكرة الفئران تحددها المحاكمة الملاحة تحديد المواقع في اليوم 1 و 2 لاختبار المتاهة المياه موريس، التي تقابل يوم 79 و 80 وظيفة عملية جراحية. خلال الأيام 2 من اقتناء ذاكرة المحاكمة، أظهرت جميع الفئران الكمون تناقص تدريجيا إلى إيجاد منصة المخفية. كما هو موضح في الشكل 3، الاختفاء المجموعة تعامل Aβ تتكون لإيجاد منهاج خفية كانت 360.67% و 558.28% (و (1, 5) = 238.67، ف < 0.01) أكبر بكثير من مجموعة تعمل بالشام في يوم 1 و 2 من الماء موريس متاهة اختبار، على التوالي. يشير هذا إلى أن Aβ تتكون يمكن أن يؤدي إلى ضعف اكتساب الذاكرة في الفئران. كان جزيئي في الفئران الذاكرة إعادة التعلم بعكس المحاكمة يوم 4 و 5 و 6 لاختبار المتاهة المياه موريس، التي تقابل يوم 82 و 83 و 84 وظيفة عملية جراحية. كما هو موضح في الشكل 3، الاختفاء المجموعة تعامل Aβ تتكون لإيجاد منهاج خفية كانت وقت أطول 306.20% و 650.16%، و 936.92 في المائة من تلك المجموعة تعمل بالشام (و (1, 5) = 138.76، ف < 0.01). وهذا يدل على أن Aβ تتكون يمكن الارتقاء بذكرى إعادة التعلم ضعف في الفئران (الشكل 3). الشكل 3 . Aβ تتكون بسبب اقتناء ذاكرة الفئران وإعادة التعلم ضعف الذاكرة- واستخدم المحاكمة ملاحة تحديد المواقع لتقييم اكتساب الذاكرة قبل يومين على التوالي السباحة الإنجاز في يوم 1 و 2 في اختبار المتاهة المائية موريس. وأجريت هذه الجراحة بعد يوم 79 و 80. واستخدم عكس المحاكمة لتقييم الذاكرة إعادة التعلم قبل 3 أيام على التوالي السباحة درجة يوم 4 و 5 و 6 في اختبار المتاهة المائية موريس، التي تقابل يوم 82 و 83 و 84 من العملية. وتظهر قطع خط الرسم البياني الكمون يعني إيجاد النظام الأساسي الخفية لكل مجموعة في اليوم 1، 2، 4، 5، و 6 في اختبار المتاهة المائية موريس. تم تحليل المعطيات باتجاهين ANOVA (يوم x المجموعة) مع التدابير المتكررة. يعني ± sem. n = 6. ** ف < 0.01، مقابل مجموعة تعمل بالشام. تم تعديل الشكل من 4 مرجع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- تتكون Aβ تسبب ضعف الاحتفاظ بالذاكرة في الفئران: الاحتفاظ بذاكرة الفئران تم قياسه بواسطة مسبار المحاكمة في اليوم 3 اختبار المتاهة المياه موريس، الذي يقابل يوم 81 وظيفة عملية جراحية. في استبقاء الذاكرة 1 يوم المحاكمة، أحاط الفريق معاملة Aβ تتكون أقل وقت السباحة السباحة المسافة وعبور عدد Q1 في غضون 60 ثانية، التي تقابل 32.14% و 30.11% 78.95% (ف < 0.01)، على التوالي، من تلك التي المجموعة تعمل بالشام (الشكل 4أ، 4). وتظهر هذه النتائج التي يمكن أن تنتج Aβ تتكون ضعف الاحتفاظ بالذاكرة في الفئران. الشكل 4 . تتكون Aβ تنتجها الفئران ضعف الاحتفاظ بالذاكرة- واستخدم المحاكمة التحقيق لتقييم الاحتفاظ الذاكرة 1 يوم السباحة الإنجاز في اليوم 3 في اختبار المتاهة المائية موريس، الذي أجرى في يوم 81 وظيفة عملية جراحية. (A) السباحة الوقت والسباحة بعد عبور عدد Q1 في غضون 60 ثانية في محاكمة مسبار (لا منصة). تم تحليل المعطيات باتجاه واحد ANOVA مع اختبار مجموعة متعددة. يعني ± sem. n = 6. ** ف < 0.01، مقابل مجموعة تعمل بالشام. (ب) السباحة مسار الفئران في المحاكمة التحقيق. (أ) الصورية التي تديرها المجموعة، عرض أكبر حوض الزمن والمسافة في رباعي المستهدفة (Q1). (ب) يعامل Aβ تتكون المجموعة، تظهر أقل وقت سباحة والمسافة في الهدف رباعي (Q1). تم تعديل الشكل من 4 مرجع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- تتكون Aβ تتأثر سرعة السباحة الفئران: حسبت الفئران السباحة السرعة بمنهاج مرئية للمحاكمة في يوم 7 اختبار المتاهة المياه موريس، الذي يقابل اليوم 85 وظيفة عملية جراحية. فأر سرعة، استناداً إلى حساب السباحة المسافة والوقت للخطوة على النظام الأساسي، لكل مجموعة في البركة السباحة لم تكن تختلف اختلافاً كبيرا. ولذلك، يمكن استبعاد الاختلافات الفردية في الفئران السباحة السرعة، مما يشير إلى أن الدوافع والمهارات الحركية كانت أساسا سليما في جميع الفئران (الشكل 5). الشكل 5 . تتكون Aβ تتأثر سرعة السباحة الفئران. وحسب الفئران السباحة السرعة بمنهاج مرئية للمحاكمة يوم 7 اختبار المتاهة المائية موريس، الذي أجرى في يوم 85 بعد العملية. ولم تختلف اختلافاً كبيرا الفئران السباحة السرعة لكل مجموعة. تم تحليل المعطيات باتجاه واحد ANOVA مع اختبار مجموعة متعددة. يعني ± sem. n = 6. تم تعديل الشكل من 4 مرجع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- تتكون Aβ تسبب في تغيير الخصائص المورفولوجية العصبية الفئران: قتل جميع الفئران بقطع الرأس اليوم 86 من الجراحة. الفحص البصري وجدت أن سطح أصفر أو قشرة الدماغ رقيقة أو انهارت فيما يبدو في الفئران المعالجة Aβ تتكون عدة. مقارنة مع مجموعة تعمل بالشام (الشكل 6AA2)، مراقبة مجهرية ضوئية تتكون مجموعة Aβ يعامل بأنه الملون, العثور على التغييرات المرضية العصبية هيبوكامبال، مثل انحطاط نيوروفيبريلاري، نيورونوفاجيا، بيكنوسيس النووية، ومارجينيشن النووي (الشكل 6AB2). وعلاوة على ذلك، كشفت الجزء من قشرة الدماغ في المجموعة المعالجة Aβ تتكون نخر كوليكواتيفي النموذجية، التي تميزت باغشية الخلية المضطربة ونوى مجزأة وتسلل خلايا تحريضية واسعة النطاق في (منطقة نخرية الشكل 6A B3). يشير هذا إلى أن Aβ تتكون قد ينتج عن الإصابات المرضية هيكلية الخلايا العصبية في الفئران. بالإضافة إلى التغيرات المرضية لهيكل الخلايا العصبية، بالمقارنة مع مجموعة تعمل بالشام، وأيضا إلى حد كبير كان انخفض عدد الخلايا العصبية في قرن آمون وقشرة الدماغ (باستثناء عينة نخر كوليكواتيفي) من تتكون المجموعة تعامل Aβ. كان عدد الخلايا العصبية 63.86% (ف < 0.01) أقل من مجموعة تعمل بالشام في هيبوكامبال CA1 أقسام 0.125 مم و % 55.46 (ف < 0.01) أقل في قشرة الدماغ أبواب 0.0352 mm2 (الشكل 6B)، مما يوحي بأنه يمكن أن ينتج Aβ تتكون عدد الخلايا العصبية انخفض. الرقم 6 . Aβ تتكون بسبب تغيير الخصائص المورفولوجية العصبية الفئران. (أ) صور الممثل من الخلايا العصبية القشرية هيبوكامبال والدماغي ملطخة بأنه. (–منA1B1) الحصين 40 ×؛ (–منA2B2) CA1 الحصين x 400؛ (B3منA3–) X 400 اللحاء الدماغي. (–منA1A3) المجموعة تعمل بالشام؛ (–منB1B3) تتكون المجموعة تعامل Aβ؛ يظهر فقدان الخلايا العصبية التي تم وضع علامة، تنكس نيوروفيبريلاري (→)، نيورونوفاجيا (←)، بيكنوسيس النووية (↗)، مارجينيشن النووية (↙) في قرن آمون، نخر كوليكواتيفي نموذجي (★)، تعطل الأغشية الخلوية، أعدادا كبيرة من الخلايا التحريضية التي تسللت إلى في قشرة الدماغ في جزء من المجموعة تعامل Aβ تتكون. شريط النطاق من A1، B1 = 10 ميكرومتر؛ شريط النطاق A2، A3 B3، B2 = 100 ميكرومتر. (ب) عدد من الخلايا العصبية مع أنه وصمة عار في قرن آمون وقشرة الدماغ، الذي أحصى تحت مجهر خفيفة (400 x). يمثل كل مجلد يعني ± ووزارة شؤون المرأة من الحقول البصرية 9 3 عينات مستقلة (n = 3). ** ف < 0.01، مقابل مجموعة تعمل بالشام. تم تعديل الشكل من 4 مرجع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- المجهر الإلكتروني لاحظ أولتراستروكتوري سوبسيلولار من الخلايا العصبية الحصين. محيطة من الخلايا العصبية هيبوكامبال في المجموعة المعالجة Aβ تتكون (7B الرقم1-B4) دمرت إلى حد كبير، يظهر تورم المتقدرية والمتوسعة cristae الكسر، إلكترون المتقدرية زيادة الكثافة، خشن هيولى، بوليريبوسوميس ديبوليميريزيد وبوليميكروتوبوليس، وبعض الكثافة بوستسينابتيك (PSD) و lysosomes ثانوية كثيرة والرواسب lipofuscin في السيتوبلازم، بالمقارنة مع مجموعة تعمل بالشام (الشكل 7 أ1 – A4). الغشاء النووي كان النفط الخام والغارقة يوتشروماتين كان مكثف والتشويه والتحريف، طبقات غمد المايلين كانت فضفاضة أو الانحطاط، ومحاور عصبية الداخلية والألياف وقد يخفف. وتبين هذه النتائج التي يمكن أن تنتج Aβ تتكون الضرر الهيكل الفرعي العصبية في الفئران. الشكل 7 . سوبسيلولار هيكل هيبوكامبال العصبية التي يقيمها الإلكترون الملاحظة المجهرية. A1-A4: مجموعة تعمل بالشام. شريط مقياس A1 = 4 ميكرومتر، 12، 000 x؛ شريط النطاق A2 = 3 ميكرومتر، 15، 000 x؛ شريط النطاق من A3 = 5 ميكرومتر، 10، 000 x؛ شريط مقياس A4 = 1 ميكرومتر، 35، 000 x. (B4منB1–) تتكون المجموعة تعامل Aβ. (B1) العصبية و pyknosis النووية (←)، والتكثيف يوتشروماتين أو الانحطاط (#)، تضخم القدم أستروسيتي (*)، والالكترون عالية الكثافة الميتوكوندريا (▲)، وطبقات غمد المايلين فضفاضة أو التوهين (←)؛ (B2) توصيني أكبر، الإلكترون عالية الكثافة الميتوكوندريا (▲)، غمد المايلين طبقات فضفاضة أو التوهين ()، lysosomes الثانوي أكبر (↑)، بيكنوسيس بيريسيتيس، بيريسيتيس euchromatin التكثيف أو الانحطاط (☆)، وتضخم القدم أستروسيتي (*)، الإلكترون عالية الكثافة الميتوكوندريا (▲)، وأكثر lipofuscin (↓)، وغمد المايلين طبقات فضفاضة أو التوهين (→). B4: ناقل عصبي عليه أكثر (#)، الإلكترون عالية الكثافة أو إصابة غشاء الميتوكوندريا (▲)، أقل تشابك. شريط النطاق B1 ، B2 = 10 ميكرومتر، 5، 000 x؛ شريط النطاق من B3 = 5 ميكرومتر، 8، 000 x؛ شريط الحجم B4 = 1 ميكرومتر، 40، 000 x. تم تعديل الشكل من 4 مرجع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- تتكون Aβ عبئا Aβ في الخلايا العصبية في الفئران: صبغة أحمر الكونغو استخدمت للكشف عن عبء Aβ في الخلايا العصبية. وتبين النتائج أن Aβ تتكون خاصة يمكن حمل عبء Aβ داخل الخلايا في الفئران قرن آمون وقشرة الدماغ (الشكل 8أ). إيجابية عدد الخلايا مع Aβ الأحمر الملون بالأحمر الكونغو في قرن آمون وقشرة الدماغ تتكون مجموعة معاملة Aβ يتم 8.05-و 4.09-أمثال (ف < 0.01) أكبر بكثير من مجموعة تعمل بالشام (الشكل 8ب). وهذا يدل على أن تتكون Aβ يمكن أن تزيد من عبء Aβ العصبية في الفئران. الشكل 8 . تتكون Aβ تسبب عبء Aβ في الفئران الخلايا العصبية. (أ) الممثل صور إيجابية Aβ العصبية ملطخة بأحمر الكونغو في قرن آمون والدماغية القشرية. (–منA1B1) CA1 الحصين x 400؛ (–منA2B2) X 400 اللحاء الدماغي. (A2منA1–) المجموعة تعمل بالشام؛ (–منB1B2) تتكون المجموعة تعامل Aβ، يظهر أكثر Aβ إيجابية الخلايا الملون بالأحمر الكونغو. شريط المقياس = 10 ميكرومتر، 400 x. (ب) الأرقام الموجبة للخلايا العصبية Aβ الملون بالأحمر الكونغو في قرن آمون وقشرة الدماغ، الذي أحصى تحت مجهر خفيفة (400 x). يمثل كل مجلد يعني ± ووزارة شؤون المرأة من الحقول البصرية 9 3 عينات مستقلة (n = 3). ** ف < 0.01، مقابل مجموعة تعمل بالشام. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- تتكون Aβ تسبب ترسب NFT في الخلايا العصبية في الفئران: واستخدمت صبغة نترات الفضة للكشف عن ترسب NFT في الخلايا العصبية. وتبين النتائج أن تتكون Aβ يمكن ملحوظ يسبب ترسب NFT داخل الخلايا في الفئران قرن آمون وقشرة الدماغ (الشكل 9ألف). عدد الخلايا مع NFT براون إيجابية الملون من نترات الفضة في قرن آمون وقشرة الدماغ تتكون مجموعة معاملة Aβ هي 9.75-و 4.82-أمثال (ف < 0.01) أكبر بكثير من مجموعة تعمل بالشام (الشكل 9ب ). وهذا يدل على أن زيادة Aβ تتكون بتجميع NFT العصبية في الفئران. الرقم 9 . تتكون Aβ تسبب NFT التجميع في الفئران الخلايا العصبية. (أ) الصور التمثيلية الإيجابية من الخلايا العصبية NFT الملون من نترات الفضة في قرن آمون وقشرة الدماغ. (–منA1B1) CA1 الحصين x 400؛ (–منA2B2) X 400 اللحاء الدماغي. (A2منA1–) المجموعة تعمل بالشام؛ (–منB1B2) تتكون المجموعة تعامل Aβ. عرض NFT أكثر إيجابية خلية الملون من نترات الفضة في المجموعة تتكون المعالجة. شريط المقياس = 10 ميكرومتر، 400 x. (ب) NFT إيجابية الخلايا العصبية إعداد الملون من نترات الفضة في قرن آمون وقشرة الدماغ، الذي أحصى تحت مجهر خفيفة (400 x). يمثل كل مجلد يعني ± ووزارة شؤون المرأة من الحقول البصرية 9 3 عينات مستقلة (n = 3). ** ف < 0.01، مقابل مجموعة تعمل بالشام. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Discussion

فمن المعروف جيدا أن الخسارة في التعلم والذاكرة هي الأعراض السريرية الرئيسية في الإعلان المرضى². الإجراء الموضح هنا أسلوب في فيفو لدراسة الإعلان؛ ونحن قد تكيفت بروتوكول تم نشرها مسبقاً التي اختبرت دواء للتخفيف من حدة العجز في الذاكرة والإصابات العصبية في نموذج الفئران⁴. ويوفر البروتوكول لدينا تفاصيل هامة للحصول على بيانات قيمة، فضلا عن معدل بقاء عالية من الحيوانات بنجاح نموذج العملية والعجز في الذاكرة، والإصابات العصبية، عبء Aβ وترسب NFT، لتقليد الإعلانية (في التجربة الحالية، أن معدل البقاء على قيد الحياة وهي معدل نموذج ناجح للعملية أكثر من 90%). واستخدمت هذه الفئران نموذجا ناجحاً لقياس الذاكرة المكانية الخاصة بهم مع اختبار المتاهة المائية موريس. المحاكمة ملاحة تحديد المواقع وجدت أن Aβ تتكون يمكن أن يسبب ضعف اكتساب الفئران الذاكرة؛ المحاكمة التحقيق وجد أن إنقاص Aβ تتكون الفئران الاحتفاظ الذاكرة؛ وعكس المحاكمة وجدت أن Aβ تتكون يمكن أن تسفر عن إعادة التعلم ضعف الفئران. وتوضح هذه البيانات اختبار المتاهة المياه موريس أن Aβ تتكون يمكن أن يستحث الذاكرة المكانية الفئران. إجمالاً، حقن الفئران إينتراسيريبروفينتريكولارلي مع Aβ25–35 في تركيبة مع الكل₃ و TGF-β1 خلق مجدية وذات مصداقية في فيفو إعلانية مثل حيوان نموذج للمختبر.

وقد أظهرت الدراسات السابقة أن حجم الدماغ في المرضى الإعلانية هو 10% أقل من الأشخاص الأصحاء. ويمكن الاطلاع على مختلف أتروفيس في نصف الكرة المخي بالملاحظة البصرية. درجة ضمور القشرية إيجابية تتصل بضعف الذاكرة¹⁹. في علم الأنسجة، تخل العدد الكبير من فقدان الخلايا العصبية وأمراض حادة المورفولوجية مباشرة وظيفة الذاكرة في الإعلان المرضى²⁰. في هذه الدراسة، وجدت الضوء/الإلكترون الملاحظة المجهرية أن الفئران ميكروينجيكتيد مع Aβ تتكون عرض التغيرات لاثيل الهائلة، بما في ذلك فقدان الخلايا العصبية، واختلال هيكل الخلايا العصبية وسوبسيلولار. هذه النتيجة يؤكد اضطراب الذاكرة المكانية الفئران المستحث ب Aβ تتكون، وهي مشابهة لحالة المرضى الإعلانية.

فمن المعروف جيدا أن يعتبر عبء Aβ الدماغ وتجميع NFT أهم الصفات هيستوباثوجينيك في الإعلان. أنهم تدمير هيكل الخلايا العصبية وتخل الإشارات العصبية، وتعطيل وظيفة الخلايا العصبية، ويؤدي إلى الخرف المتقدمة¹⁷. النموذج الحالي للحيوانات وجدت عبء Aβ وتجميع NFT في الدماغ، والتي تتفق مع إعلان حالة المريض. ولذلك، يمكن استخدام هذه الإصابات العصبية في الفئران التي تسببها Aβ تتكون كنموذج لدراسة علم الأمراض العصبية واستراتيجية العلاج من الإعلان.

وفيما يلي أمثلة لفحص آثار المخدرات في نماذج الفئران الإعلانية: تشاو et al.، ذكرت أن الفلافونويدات كلا من Scutellaria ينبع ويترك (صندوق الضمان الاجتماعي) ويمكن أن تخفف من Scutellaria barbata (SBF) ضعف الذاكرة في الفئران والمبرمج الناجمة عن تتكون Aβ⁸^،⁹. قوة et al.، وأفادت أيضا أن SBF يمكن أن تحول دون تجميع NFT وبروتين تاو الفسفرة الإفراط في الجانب Ser199، Ser214، Ser202، Ser404، و Thr231، وانخفاض GSK 3β و CDK5 و PKA التعبير البروتين ومرناً في الفئران المعالجة Aβ تتكون²¹. في نفس الوقت، شانغ وآخرون، كما أفاد أن SBF يمكن منع انتشار astrocyte و microglia، وأقل Aβ1-40، Aβ1 42، وبيتا-موقع التطبيق ناهضة إنزيم 1 (BACE1) التعبير مرناً في الدماغ تتكون Aβ الجرذان²². تستند النتائج المذكورة أعلاه، لدينا نموذج الحيوان مفيد على نموذج آخر مثل الإعلانات، التي تنطوي على أكثر من وظيفة الخلايا العصبية واضطراب هيكل.

فيما يتعلق بنموذج آخر مثل الإعلانات، حقن إينتراسيريبروفينتريكولار واحد من Aβ الفئران يمكن أن يسبب العجز الذاكرة في الفئران وفقدان الخلايا العصبية، وانتشار نيوروجليوسيتي، ولكن قد أو قد لا يكون ترسب Aβ و NFT²³. تظهر الفئران المعرضة لجرعة عالية أن نسبة نجاح عالية وتقليد الإعلانية، ونموذج حيوانية فعالة من حيث التكلفة، مع ضعف الذاكرة وفقدان الخلايا العصبية، وانتشار نيوروجليوسيتي، ولوحة خرف (SP) وتجميع NFT في الدماغ. ومع ذلك، جرعة عالية من الجامعة العربية قد يسبب إصابات الجرذ الكبد وفقدان الشهية، مصحوبا بانخفاض الوزن²⁴. الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين نموذج مثل إعلان آخر. على الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين إثبات العجز في الذاكرة، والتغيرات المرضية العصبية هيكل/محيطة، ترسب lipofuscin، لكن دون عبء Aβ وتجميع NFT. تعتبر الفئران من أكثر من 24 شهرا عمر سن لهذا النموذج، ولذلك فإنه يتطلب فترة أطول لتغذية وبالتالي التكلفة أعلى¹⁷^،²⁵. الفئران المعدلة وراثيا SAMP8 والتطبيق تقليد الأقرب للإعلان وهي أكثر نماذج مثالية للتحقيق في الإعلانات. ولكن كلا النماذج الحيوانية بأسعار أعلى وتقتصر على استخدامها في مختبر²⁶^،²⁷. بالمقارنة مع النماذج الحيوانية المذكورة أعلاه، قد نموذجنا لنموذج الحيوان تتكون المعالجة Aβ انخفاض التكلفة وعالية الأداء، مما يجعله أداة مثالية لدراسة الإعلان.

وفي الختام، حقن إينتراسيريبروفينتريكولار Aβ25-35 جنبا إلى جنب مع الكل₃ و TGF-β1 الفئران يقدم قيماً في فيفو حيوان نموذجا فهم أفضل لضعف الذاكرة المكانية، والإصابات العصبية، وعبء Aβ، وترسب NFT الإعلانية الكامنة. يوفر هذا النموذج بسرعة والبقاء البروتوكول التجريبي بسيطة نسبيا مع الحيوانات ارتفاع معدل ونموذج ارتفاع معدل نجاح عملية، فضلا عن نسبة عالية من الازدواجية، والتي أظهرت أن تكون أكثر اقتصادية. النموذج الحالي للحيوانات هو نموذج فعال لتقليد الإعلانية، ويمكنك كذلك التحقق من صحة نفسها التي يجري استخدامها لمحاكاة مختلف الأمراض الأخرى.

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

المشروع كان تدعمه “مؤسسة العلوم الطبيعية مقاطعة خبي” (رقم C2009001007، H2014406048)، إدارة مقاطعة خبي الطب الصيني التقليدي (رقم 05027)، ومشروع البناء موضوعا أساسيا لكلية مقاطعة خبي، الصين.

Materials

Sprague-Dawley rat	Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, China	SCXK(Jing) 2012-0001	300–350 g
Morris water maze	Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical Research Institute, China	No
Movable small animal anesthesi	RWD Life Science Co., Ltd. China	R580
Brain Stereotaxic Apparatus	RWD Life Science Co., Ltd. China	68001
Flexible bone drill	Shanghai Soft Long Technology Development Co., Ltd. China	BW-sD908
Transmission electron microscope	Japan Co., Ltd. Japan	JEM-1400
Two channel microinjection pump	RWD Life Science Co., Ltd. China	RWD202
EM microtome	Hitachi Co., Ltd. China	H-7650
Dummy cannula	RWD Life Science Co., Ltd. China	62001	0.D.0.64×I.D.0.0.45mm/M3.5 http://www.rwdls.com/English/Product/3985102014.html
Guide cannula	RWD Life Science Co., Ltd. China	62101	0.D.0.40mm/M3.5
Internal cannula	RWD Life Science Co., Ltd. China	62201	0.D.0.41×I.D.0.25mm/M3.5
Tighten the nut	RWD Life Science Co., Ltd. China	62501	0.D.5.5mm/L7.5mm/M3.5
Fixing screw	RWD Life Science Co., Ltd. China	62514	M1.2×L2.0mm(100BAO)
The screwdriver	RWD Life Science Co., Ltd. China	62999	45*1mm
PE Tubing	RWD Life Science Co., Ltd. China	62302
Amyloid beta 25-35	Sigma Aldrich Co. USA	SCP0002-5MG
Recombinant human transforming growth factor-β1	PeproTech Inc. USA	100-21
Aluminium trichloride	Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. China	3011080
Congo red	Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. China	3010016
Silver nitrate	Sinopharm Chcmical Reagent Co., Ltd. China	20150720
Zinc phosphate dental cement	Dental Material of Factory Shanghai Medical Instruments Co., Ltd. China	201311

参考文献

Robinson, M., Lee, B. Y., Hane, F. T. Recent Progress in Alzheimer’s Disease Research, Part 2: Genetics and Epidemiology. J. Alzheimers. Dis. , (2017).
Hane, F. T., Lee, B. Y., Leonenko, Z. Recent Progress in Alzheimer’s Disease Research, Part 1: Pathology. J. Alzheimers Dis. , (2017).
Perl, D. P. Neuropathology of Alzheimer’s disease. Mt. Sinai. J. Med. 77, 32-42 (2010).
Wu, X. G., Wang, S. S., Miao, H., Cheng, J. J., Zhang, S. F., Shang, Y. Z. Scutellaria barbata flavonoids alleviate memory deficits and neuronal injuries induced by composited Aβ in rats. Behav. Brain Funct. 12, 33-43 (2016).
Guo, K., Wu, X. G., Miao, H., Cheng, J. J., Cui, Y. D., Shang, Y. Z. Regulation and mechanism of Scutellaria bartata flavonoids on apopotosis of cortical neurons and cytochondriome induced by composited Aβ. Chin Hosp Pharm J. 35, 1994-1999 (2015).
Guo, K., Miao, H., Wang, S. S., Cheng, J. J., Shang, Y. Z. Scutellaria barbata flavonoids inhibits NFT aggregation and regulatory mechanism in rats induced by composited Aβ. Chin. J. Pathophysio. 32, 2147-2156 (2016).
Hou, X. C., et al. Scutellaria Barbata flavonoids inhibit the brain’s Aβ and NFT abnormal generation and affect the related enzymes expression in rats induced by composited Aβ. Chin J New Drugs. , (2017).
Zhao, H. X., Guo, K., Cui, Y. D., Wu, X. G., Shang, Y. Z. Effect of Scutellaria barbata flavonoids on abnormal changes of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bak protein expression in mitochondrial membrane induced by composite Aβ25-35. Chin J Pathophysiol. 30, 2262-2266 (2014).
Cheng, J. J., et al. Flavonoid extract from Scutellaria stem and leaf attenuates composited Aβ- induced memory impairment and apoptosis in rats. Chin.J. New Drugs. 25, 2627-2636 (2016).
Fang, F., Yan, Y., Feng, Z. H., Liu, X. Q., Wen, M., Huang, H. Study of Alzheimer’s disease model induced multiple factors. Chongqing Med. 36, 146-151 (2007).
. Regulations for the Administration of Affairs Concerning Experimental Animals. The Ministry of Science and Technology of the People’s Republic of China. , 10-31 (1988).
Bao, X. M., Shu, S. Y. . The stereotaxic atlas of the rat brain. , (1991).
Morris, R. Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rats. J. Neurosic. Methods. 11, 47-60 (1984).
Nunez, J. Morris Water Maze Experiment. J. Vis. Exp. (19), e897 (2008).
Yu, J. C., Liu, C. Z., Zhang, X. Z., Han, J. X. Acupuncture improved cognitive impairment caused by multi-infarct dementia in rats. Physiol. & Behav. 86, 434-441 (2005).
Shang, Y. Z., Miao, H., Cheng, J. J., Qi, J. M. Effects of amelioration of total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi on cognitive deficits, neuronal damage and free radicals disorder induced by cerebral ischemia in rats. Biol. Pharm. Bull. 29, 805-810 (2006).
Song, H. R., Cheng, J. J., Miao, H. J., Shang, Y. Z. Scutellaria flavonoid supplementation reverses ageing-related cognitive impairment and neuronal changes in aged rats. Brain Inj. 23, 146-153 (2009).
Wang, M., et al. Novel RAS inhibitors Poricoic Acid ZG and Poricoic Acid ZH attenuate renal fibrosis via a Wnt/β-Catenin patheway and targeted phosphorylation of smad3 signaling. J Agric Food Chem. 66, 1828-1842 (2018).
Pini, L., et al. Brain atrophy in Alzheimer’s Disease and aging. Ageing Res. Rev. 30, 25-48 (2016).
Ubhi, K., Masliah, E. Alzheimer’s disease: recent advances and future perspectives. J. Alzheimers Dis. 33, 85-94 (2013).
Guo, K. . Scutellaria barbata flavonoids inhibite NFTs aggregation, tau protein phosphorylation and the regulated mechanism of related enzymes in rats induced by composited Aβ. , (2016).
Shang, Y. Z. . Effects and Mechanism of Scutellaria Barbata Flavonoids on Rat’s Memory Impairment Induced by Compound Aβ25-35. , (2013).
Zussy, C., et al. Alzheimer’s disease related markers, cellular toxicity and behavioral deficits induced six weeks after oligomeric amyloid-β peptide injection in rats. PLoS One. 8, 1-20 (2013).
Walton, J. R. Aluminum involvement in the progression of Alzheimer’s disease. J. Alzheimers Dis. 35, 7-43 (2013).
Neils-Strunjas, J., Groves-Wright, K., Mashima, P., Harnish, S. Dysgraphia in Alzheimer’s disease: a review for clinical and research purposes. J. Speech Lang Hear Res. 49, 1313-1330 (2006).
Morley, J. E., Farr, S. A., Kumar, V. B., Armbrecht, H. J. The SAMP8 mouse: a model to develop therapeutic interventions for Alzheimer’s disease. Curr Pharm Des. 18, 1123-1130 (2012).
Puzzo, D., Gulisano, W., Palmeri, A., Arancio, O. Rodent models for Alzheimer’s disease drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 10, 703-711 (2015).

Play Video

PDF

DOI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

記事を引用

Xiaoguang, W., Jianjun, C., Qinying, C., Hui, Z., Lukun, Y., Yazhen, S. Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer’s Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein. J. Vis. Exp. (137), e56157, doi:10.3791/56157 (2018).

إنشاء تقليد قيماً من مرض الزهايمر في نموذج الفئران الحيوان عن طريق الحقن إينتراسيريبروفينتريكولار لبروتين بيتا اميلويد تتكون