从人体二尖瓣提取蛋白质的优化方案

最近的证据改变了对mRNA合成后发生的许多调节机制的作用的理解。实际上，翻译，转录后和蛋白水解过程可以调节蛋白丰度和功能。假设转录本水平是蛋白质丰度的主要决定因素，mRNA的浓度代表相应蛋白质的代谢 – 已被部分修订。目前，转录本水平仅部分预测蛋白质丰度，这表明转录后事件发生调节细胞内的蛋白质^1,2 。

此外，蛋白质最终决定细胞的功能，因此决定其表型，其可以经受自分泌，旁分泌和内分泌因子的响应的动态变化;血液介体;温度;药物治疗和疾病发展换货。因此，以蛋白质水平为重点的表达分析有助于表征蛋白质组，并且揭示其作为疾病发病机理的一部分发生的关键变化³ 。

因此，尽管现有的技术挑战，蛋白质组学所提出的澄清健康和疾病状况的机会也是艰巨的。蛋白质组学可以贡献的特别有希望的研究领域包括：在任何水平（ 即全细胞或组织，亚细胞区室和生物液体）上鉴定改变的蛋白质表达;用于疾病诊断和预后的新型生物标志物的鉴定，验证和验证;并希望能够鉴定可用于治疗目的的新蛋白质靶标，以及药物功效和毒性的评估。

捕捉复杂性蛋白质组是技术挑战。目前的蛋白质组学工具提供了进行大规模，高通量分析来鉴定，定量和验证改变的蛋白质水平的机会。此外，引入分馏和富集技术，旨在避免由最丰富的蛋白质引起的干扰，还通过包括最少丰富的蛋白质来改善蛋白质鉴定。最后，蛋白质组学被补充了翻译后修饰的分析，其逐渐成为蛋白质功能的重要调节剂。

然而，分析中的生物标本中的样品制备和蛋白质回收仍然是蛋白质组学工作流程中的限制步骤，并增加可能陷阱的潜力⁵ 。事实上，在大多数必须优化的分子生物学技术中，第一步是组织匀浆离子和细胞裂解，特别是在不存在扩增方法的低丰度蛋白质的分析过程中。此外，蛋白质的化学性质可以影响其自身的恢复。例如，高疏水性蛋白质的分析是非常具有挑战性的，因为它们在等电聚焦过程中容易沉淀，而跨膜蛋白几乎不溶（参见参考文献5）。此外，组织组成变异性为开发通用提取方法创造了显着的障碍。最后，由于几乎所有临床标本的数量都是有限的，所以必须以最小的样品量使蛋白质制备具有最大的恢复和重现性。

这项工作描述了从正常人心脏二尖瓣进行蛋白质提取的优化方案，这代表了蛋白质组学分析的非常具有挑战性的样品。正常二尖瓣是一种lex结构位于左心房和心脏左心室之间（ 图1 ）。它在控制从心房到脑室的血液流量方面起着重要的作用，防止回流，并确保适当的氧气供应给全身，从而保持足够的心输出量。然而，它通常被认为是一种“无活性”组织，细胞率低，组成少，主要是细胞外基质。这是因为在正常情况下，驻留的瓣膜间质细胞（VIC）具有低蛋白质生物合成速率^7的静止表型。

然而，已经证明，在病理状态下，海绵体中的VIC的数量增加并且其蛋白质合成被激活，以及其他功能和表型变化⁸ 。因此，最少的数据可用并不奇怪文献集中于病理性二尖瓣^9,10的分析，其中活化的VIC的增加的数量可能解释相对较高数量的鉴定的蛋白质。

总之，本议定书可能通过研究二尖瓣蛋白组分来发展对负责二尖瓣疾病的致病机制的理解。事实上，更深入地了解潜在的病理过程可能有助于改善瓣膜疾病的临床管理，其目前的干预指标主要取决于血液动力学考虑因素。