[¹⁸ F] 3F4AP：脱髄疾患イメージングのための新規PETトレーサ

注意：放射性物質の使用に関するすべての手順は、地元の放射線安全局によって承認されている必要があります。放射性物質を使って作業するときは、ラボコートと個人用放射線バッジを着用してください。常に2層の手袋を使用し、放射能を扱う各ステップの後にガイガーカウンターで手をチェックする。手袋が放射性物質で汚染されている場合は、手袋を外して交換してください。適切なシールドを使用し、放射線源との接触時間を最小限に抑え、距離を最大化してください。 1.実験の1週間前：材料の準備ダウンロード[ 18 F] 3F4APシーケンス：Syntheraユーザーは、ユーザーデータベース（http://www.iba-radiopharmasolutions.com/products/chemistry）にログインし、3F4APのシーケンスファイルをダウンロードすることができます。他のシンセサイザーのユーザーは、一連の手順に基づいて独自のスクリプトを作成する必要があります。注釈付きシーケンスをブラウズして、合成に関与するteps。 合成に十分なガスがあることを確認する。シンセサイザは、ヘリウムまたは窒素のいずれかの圧縮ガスを必要とする。また、> 75 psiの圧縮空気が必要です。圧力がメーカーの推奨範囲内にあることを確認してください。 HPLC移動相の調製：1Lの50mMリン酸ナトリウムおよび10mMトリエチルアミンを調製する。 pHメーターを用いて、撹拌しながら飽和水酸化ナトリウムを滴下してpHを8.0±0.1に調整する。この溶液を0.22μmのボトルトップフィルターで濾過し、5％容量のエタノールを加える。 オーブン中で一晩乾燥させる。 実験の日：フッ素-18の到着前 1 mLのシリンジを使用して、試薬バイアルに適切な試薬を充填します。バイアル2および3については、オーブン乾燥したバイアルおよびアルゴン下に保った無水溶媒を使用する。クリンパーを使用してバイアルにクリンプシールをシールします。 充填バイアル1（直径11mm /体積2mLのバイアルal）を400μLのTBA-HCO 3 +800μLのアセトニトリル（MeCN）で溶出した。 50μLの前駆体溶液1.0mg / mL +450μLのMeCNでバイアル2（13mm / 4mLバイアル）を満たす。 バイアル3（11mm / 2mLバイアル）に500μLのMeCNを充填する。 メタノール（MeOH）中の0.2％シュウ酸4mLでバイアル4（13mm / 4mLバイアル）を満たす。 QMA（強陰イオン交換）およびアルミナ-N固相抽出カートリッジを調整する。 10 mLシリンジを使用して、5 mLの8.4％NaHCO 3を QMAに滴下し、続いて5 mLの超純水で脱イオンしたI型水（25ºCで18.2μΩ・cm）を流します。 5mLの超純水をアルミナ-Nカートリッジに滴下し、続いて5mLのMeOH + 0.2％シュウ酸を流す。 HPLCをオンにして、C-18カラムを移動相の1分間当たり4mLで30分間調整する。 新しい触媒カートリッジを水素化装置カートリッジホルダーに装填し、0.5mL /分の100％MeOHの流れを開始する。 S水素調整器を50psiに設定し、カートリッジを15分間調整します（ 図2 ）。 バイアル1〜4をその位置に入れ、 図3に示すようにカートリッジとバイアル瓶を取り付けて、Integrated Fluid Processor（IFP）を組み立てます。ベントニードルを備えた収集バイアルを水素化装置の出力ラインに接続します。 シンセサイザーのソフトウェアを起動します。ログインとパスワードを入力してください。シンセサイザの製造元の指示に従って事前実行チェックを実行します。 "Sequences"をクリックし、次に "Open"をクリックして3F4AP配列をロードします。 画面上の「ロード」ボタンをクリックしてIFPをロードします。実行のファイル名を入力し、「開始」をクリックしてシーケンスを開始します。 （自動シンセサイザーは18Fロードステップの前に自動的に一時停止します。） シンセサイザーがルーチンの自己チェックステップ（シーケンスのパート1）を通過するのを見てください。スカリーを見てnを使用して、警告またはアラームがないことを確認します。シンセサイザーがラインをフラッシュし、実行準備のために反応容器を予熱するので、音に注意してください。温度インジケータが上昇し、65℃に留まります。シンセサイザーが18 F転送の準備ができていることを示す信号（聴覚ビープ音）を待ちます。 実験の日： 18 Fラベリングサイクロトロンで生成された18 Fの所望量をサイクロトロンターゲットから18 Fバイアルに遠隔に移す。放射能の量を確認し、納入時にそれを記録する。 注： 18 F -転送のための直線を使用しない場合は、セプタムを通してバイアルに活動を移すために針が付いたプレフィルドシリンジを使用してください。開始放射能の量は、放射線安全局によって設定された限界および所望の最終トレーサの量に依存する。典型的な量は50〜500mCiの範囲である。 <li> "Resume"を押してシンセサイザーのシーケンスを再開します。これにより、 18 FのQMAへの転送が開始されます。 コンピュータ画面上の自動シーケンス全体にわたる合成の進行を監視する。 バイアルからQMAへの18 Fの移送を90秒間監視する。 18 F -をQMAにトラップした後、TBA-HCO 3溶液（バイアル1）で溶出する。 （シーケンスのパート2） TBA 18 Fを減圧（5 kPa）および加熱（100℃）で乾燥させた後、シンセサイザーの圧力と温度のトレースをモニターし、さらに乾燥とクールダウンを行います。 （シーケンスのパート3） 無水MeCN（バイアル3）および前駆体溶液（バイアル2）の反応器への移動およびそれが室温で1分間どのように反応するかを観察する。溶液は無色または非常にかすかな黄色でなければならない。 （シーケンスのパート4） シュウ酸の移動を見る溶液（バイアル4）を反応器に添加する。溶液がアルミナ-Nカートリッジを通ってリアクターから最終製品バイアルに移されるのを見てください。 （シーケンスのパート5） シーケンスの最後に、レポートを印刷し、IFPを排出し、ガスタンクをシャットダウンし、ソフトウェアを終了します。 最初に手順を確立しながら、カートリッジとバイアルを線量較正器に別々に導入することにより、アルミナ-Nカートリッジと回収バイアルの放射能を測定します。アクティビティと測定時間を記録します。使用済みのカートリッジを鉛廃液容器に入れます。収集バイアルを遮蔽された容器に入れて、次のステップに移す。 2 "針が付いた1 mLシリンジを使用して、中間生成物溶液のサンプル約100μLを手作業による品質管理のための標準HPLCバイアルに手動で移す。このサンプル10μLをHPLCに注入して純度および純度を評価する。インターミーのアイデンティティジエート化合物。 注：HPLC条件：XDB5μm、9.4×250mm C18カラム。流量4mL /分。移動相（50mM Na 2 HPO 4、10mM TEA、5％EtOH）。アイソクラティック15分。 実験の日：水素化注意：水素化装置への製品の注入は、適切なシールド予防策を使用して行わなければなりません。水素ガスは適切に処理し、換気する必要があります。 注：水素添加反応器は、合成器のHPLCカラムの代わりに接続し、合成ソフトウェアを使用して制御することができます。 シンセサイザーHPLCシーケンスを開始することにより0.5 mL /分で水素化装置フローを設定します。手動で水素圧力を50 psiに設定します。 ラベリング工程およびクエンチ工程を終了した後、シンセサイザーは中間生成物溶液を水素化装置/ HPLCループに移す。 放射性ピークがHPL上に現れるとCソフトウェアが回収バルブをトグルして製品を回収します。線量キャリブレータを用いて粗生成物の放射活性を測定する。 注：粗生成物はホットセル内の自動HPLCシステムに注入する必要があります。精製後、最終生成物を回収し、USPおよびFDA規則に従って、無菌ISOクラス5層流空気ホットセルに分配する。 実験の日：服用量の精製および調製粗生成物をHPLCに注入し、自動化されたフラクションコレクターを使用して、最終生成物ピークに対応するフラクションを収集する。各チューブには0.66mLの溶液が入っています。 注：HPLC条件：XDB5μm、9.4×250mm C18カラム。流量4mL /分。移動相（50mM Na 2 HPO 4、10mM TEA、5％EtOH）。アイソクラティック15分。収集4~15分。 投与量較正器を使用して各画分の放射能を測定し、記録する。最大量の分画を組み合わせる（典型的にはチューブ14〜18）。 10mLシリンジで生成物溶液を引き、0.22μmフィルターを通してサンプルを滅菌バイアルに通す。バイアルラベルに放射能の量、合成時間の終わりおよび溶液の量を記録する。これは注射のための最終投与量である。品質管理試験のために〜0.8 mLの溶液を入れてください。 6.実験日：品質管理（QC）テスト 用量放出前： 鉛遮蔽ガラスを介して線量を点検します。溶液は透明で無色で、粒子状物質がないことが必要です。 放射化学的同一性： RadioTLCの場合：リファレンススタンダードと並んでTLCプレート上にサンプルの一滴をスポットします。 95％MeOH：5％酢酸を用いてTLCチャンバー上でTLCプレートを実行する。 UV照射下で参照標準を可視化し、その位置を鉛筆でマークする。 TLCプレートをradioTLCスキャンのステージにテープで固定するそしてピークの時間を記録する。参照標準と放射能ピークのR f値は5％以内で一致しなければならない。 RadioHPLCの場合：HPLCで参照標準の有無にかかわらず10μLの用量を投与する。参照標準と放射性ピークの保持時間は一致しなければならない。スパイクされたサンプルには、単一の共溶出ピークが見られる必要があります。 放射性化学純度について：放射性核種HLCおよび放射性核種ターゲットピークの曲線下面積を測定する。ターゲットピークの面積は、結合されたすべての放射性ピークの面積の> 95％でなければなりません。 特定の放射能について：予め確立された較正曲線を使用して、UV HPLCトレースの曲線下の面積から決定された質量量に対してピーク（ステップ5.2で測定）における放射能の量として比放射能を計算する。比放射能は50mCi /μmolより高くなければならない。 残留溶媒分析の場合：残留溶媒量の測定ts（MeCN、MeOH）をガスクロマトグラフィーを用いて投与する。溶媒レベルは、アセトニトリルに対して0.04％未満、メタノールに対して3,000ppm未満でなければならない。 EtOHの量は10％w / v未満でなければならない。 無菌フィルター完全性試験（バブルポイント）の場合：ステップ5.3で使用したフィルターを、圧力レギュレーターを備えた窒素供給装置に接続し、針を水中に浸す。圧力計を見ながらガスバルブを徐々に開きます。フィルターは、針からの気泡の流れの欠如によって証明されるように、破裂することなく50psiまでの圧力に耐えなければならない。気泡の流れがニードルから出るまで50psi以上に圧力を上げてください。この圧力を記録します。これは破裂圧力であり、50 psi以上でなければなりません。 放射性核種の半減期については、線量キャリブレータで10分以上の2つの時点で製品の放射能を測定する。以下の式を用いて半減期を計算する。半減期は18 Fの半減期と5分以内に一致する必要があります（109±5分）： t 1/2 計算値= 0.693t ÷ln（A 1 / A 2 ） ここで、 tは測定間の間隔であり、A 1 、A 2は各時点で測定された活動である。 放射性同位体および純度について：ガンマカウンターを用いて生成物のサンプルのγ線スペクトルを得る。スペクトルは、511keVのエネルギーで単一の光ピークを示すはずである。スペクトル内に他の光ピークは存在してはならない。 エンドトキシン分析の場合：LAL発色エンドトキシン定量試験を使用してエンドトキシンレベルを測定する。エンドトキシンレベルは、最終生成物量が10mLの1:10希釈生成物の場合、<1.75EU / mLでなければならない。 各QC試験の結果を記録する。全ての試験が合格した場合に限り、動物試験用の用量を放出する。 投与後の放出： 無菌試験のために：液体チオグリコール酸とトリプチカーゼの両方に用量のサンプルを加える大豆ブロス。 14日後にメディアに成長が見られなくてはならない。 7.実験日：計算（表1） 非崩壊補正放射化学収量（ndc RCY）について：開始放射能に対する最終生成物中の放射能の量としてndc RCYを計算する。 放射能標識効率について：アルミナ-Nカートリッジ（取り込まれていない[ 18 F] F – ）および採取バイアル中の放射能に対する収集バイアル中の放射能の比として標識収率を計算する。 水素化収率について：HPLCに注入された放射能に対する所望のピークにおける放射能の量として水素化収率を計算する。 フィルタリング損失の場合：フィルタリング計算は、フィルタに残っている放射能が失われ、フィルタリング前に放射能よりもシリンジが失われます。