전기 생리 연구 성인 마우스 망막의 수평 슬라이스의 준비
概要
우리는 망막 표면에 평행하게 절편의 평면과 성인 포유류 망막의 수평 슬라이스 준비를 개발했다. nonradially 중심 망막 신경 세포의 수지상 필드 패치 클램프 및 이미징 기술과 신호 처리의 연구를 허용, 절단되지 않았다.
Abstract
세로 슬라이스 제제 아니라 성인 포유류 망막 회로 및 신호 전달을 연구하기 위해 설립된다. 이 제제에서 절편의 비행기는 광 수용체 및 양극성 세포와 같은 방사상 중심의 신경 세포의 연구에 이상적, 망막 표면에 수직이다. 그러나, 수평 세포, 넓은 필드 무 축삭 세포 및 신경절 세포의 큰 수지상 아버 이들 세포에서 현저하게 감소 시냅스 활성을두고 주로 절단된다. 신경절 세포 변위 무 축삭 세포는 망막의 전체 실장 준비 연구 될 수있는 반면, 수평 세포 및 내부 핵 층에있는 무 축삭 세포는 잘못 전체 망막 조직에 전극 용 접근 가능하다.
최대 접근성 시냅스 무결성을 달성하기 위해 마우스 망막의 수평 조각 제제를 개발 및 감광체 및 수평의 시냅스에서 신호 전송 공부세포. 수평 절편 수평 세포의 수상 돌기에 손상 및 기능 콘 시냅스 입력을위한 전제 조건으로, 전극 타겟팅 수평 세포 기관 (1) 간단하고 명확한 시각적 식별 및 확장 된 수평 세포 수지상 필드 (2) 보존 할 수 있습니다.
수평 조각에서 수평 세포는 어둠 속에서 토닉 시냅스 활성을 나타내, 그들은 안쪽으로 전류 감소 시냅스 활동의 감소와 빛의 섬광을 브리핑하는 반응. 면역 세포 화학 증거는 수평 세포의 수지상 분야 내에서 거의 모든 콘이 그 주변 수상 돌기과 시냅스를 설정을 나타냅니다. 수평 슬라이스 준비 따라서 잘 선택 시냅스에 걸쳐 수평으로 확장 망막 신경 세포의 생리 학적 특성뿐만 아니라 감각 신호 전송 및 통합을 연구하기에 적합합니다.
Introduction
시각 정보는 시각 활성화 동적 시공간 패턴으로 부호화되고, 감광체와 2 차 뉴런 사이의 시냅스 리본 시각 정보의 다운 스트림 전송을 결정한다. 포유류 망막의 수직 슬라이스 제조 즉 감광체 바이폴라 셀 사이, 및 바이폴라 전지 및 무 축삭 세포 1, 2, 3, 4의 일부 유형 사이에서 수직 통로에 신호 처리를 연구하는 매우 유용한 도구이다.
그러나, 수직 절편은 항상 시냅스 접촉의 상당한 손실로 이어지는, 많은 망막 신경 세포의 수지상 필드의 심각한 절단됩니다. 특히 외부 망막에, 수평 세포는 그들의 옆으로 퍼져 확장 된 수지상 필드와 축삭 터미널 시스템 (5)에 영향을 받는다. 수직에서슬라이스 제조 수평 셀의 돌기에 콘 감광체 단자 수백 시냅스 입력 따라서 약간 부족한 접촉 감소된다. 이것은 개별 시냅스의 특성을 연구하기에 충분할 수 있지만, 어떠한 수단은 감광체 리본 시냅스 동기 작동의 기초가되는 신호 처리 기능을 나타내는 않음으로써는 않는다.
따라서 우리는 그대로하고 기능적인 수평 세포의 수상 돌기에 거의 모든 콘 광 수용체의 시냅스 입력 잎 수평 슬라이스 준비를 개발했다. 절편 런 평면은 수평 적으로 무 축삭 세포와 세포 사이의 내부 핵 층을 절단하는 망막의 표면에 평행. 따라서, 외부 망막의 수평 슬라이스가 포함 생성, 시냅스 사이트, 시냅스 사이트의 내부 및 외부 세그먼트뿐만 아니라 시냅스 터미널, 수평 세포와 쌍극 세포 광 수용체. 이 준비는 잘 t을 적합오의 수지상 필드 내의 모든 콘 광 수용체에 의해 수평 세포의 수상 돌기에 통합 된 시냅스 입력을 조사합니다. 따라서 그것은 더 시냅스 반응에 감광체 활성화 매트릭스로부터 시각 정보 전송을위한 중요 감광체 리본 시냅스의 동작을 이해하는 데 유용 할 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
세로 슬라이스와 달리 수평 무 축삭 세포 및 세포 등을 방사상 배향 뉴런의 수지상 형태가 잘 유지된다. 전체 망막 제제에 비해, 이들 세포 유형은 마이크로 전극에 대한 접근이 용이하고 전기 생리 두 이미징 기술에 의해 조사 할 수있다. 여기서는 외부 망막 집중; 그러나, 유사한 접근 방식은 특히 내부 망막 (10)의 무 축삭 세포가보고되고있다.
수평 슬라이…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft DFG FOR701 and FE464/11-1 to A.F. The authors want to acknowledge the excellent technical assistance of Andrea Nerz.
Materials
| Ames' Medium | Sigma | A1420 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Hepes | Sigma | H3375 | |
| Carbogen | Air Liquide | ||
| Agarose | Sigma | A9045 | |
| 35-mm petri dish (plastic) | Nunc Thermofisher | 150318 | |
| Glass petri dish | Chemoline | 50-1470-40 | |
| Isoflurane | Dispensary university hospital | ||
| Vibratome injector blade | Biosystems | 39053250 | |
| Vibratome | Leica Microsystems | VT1200 | |
| Vibrocheck | Leica Microsystems | ||
| Microwave | |||
| Water bath | |||
| Forceps | |||
| 20-gauge needles | |||
| Spring scissors | |||
| Curved scalpel blades | |||
| Stereo microscope | |||
| Plastic Pasteur pipette | |||
| Glass Pasteur pipette |
参考文献
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