성상 세포는 중추 신경계 (CNS)에서 가장 중요한 핵심 선수 중 하나이다. 여기서는 후 시험관 허혈 암수 신생아 새끼의 성상 세포 기능의 기초가되는 메카니즘을 연구하기 위해 거세 해마 성상 세포 배양 프로토콜의 구체적인 방법을보고하고있다.
저산소증 / 국소 빈혈 (HI) – 관련 뇌 손상 다음 Astrogliosis는 신생아의 증가 이환율과 사망률의 역할을한다. 최근의 임상 연구는 뇌 손상의 정도 섹스 의존적으로 나타난 나타내고, 수형 신생아는 유사한 뇌 손상과 여자에 비해 더 심한 신경 결과 결과 HI 관련된 뇌 손상의 영향에 더 민감하다있다. 분리하고 성별화 된 해마 성상 세포의 매우 풍부한 인구를 유지하기 위해 신뢰할 수있는 방법의 개발은 신생아 HI의 병리 결과에서 성별 차이의 세포 기초를 이해하는 것이 필수적이다. 본 연구에서는 재산 소화 하였다 시험관 허혈, 산소 – 글루코스 부족의 모델을 거치게되는 특정한 성별 해마 성상 세포 배양 물을 생성하는 방법을 설명한다. 이후 반응 astrogliosis는 immunostai에 의해 조사 하였다아교 섬유 성 산성 단백질 (GFAP) 및 S100B에 대한 닝. 이 방법은 개별적으로, 신생아 HI 다음 남성과 여성의 해마 성상 세포의 역할을 연구하는 유용한 도구를 제공합니다.
성상 세포는 중추 신경계 (CNS)에서 가장 중요한 핵심 선수 중 하나이다. 증거의 성장 몸은 성상 세포의 역할이 신경 지원을 제공보다 더 있음을 나타냅니다. 사실, 생리 학적 조건에서 아스트로 사이트의 역할은, CNS 혈류량이 조절 현상 축삭 (1)의 이동을 안내하는 시냅스 간질 액 (3)의 pH의 항상성을 유지하고, 혈액 뇌 장벽에 참여 같이 매우 복잡 할 수있다 4 시냅스 전달 (5). 병적 인 조건에서 성상 세포는 성상 세포와 기능 (모욕으로부터의 거리에 대한) 형태, 수, 위치, 지형이 이종 방법 6,7에서 변경 될 수있는 반응 astrogliosis라는 과정을 부상으로 반응한다. 아마 신생아의 이환율과 사망률에 기여 신생아 저산소 성 허혈성 뇌증 다음 볼 Astrogliosis <s> 8입니다.
최근의 임상 및 실험적 연구는 뇌 손상의 정도를 비교하여 수형 신생아는 심한 신경 결과 결과 저산소증 / 허혈 (HI) – 관련 뇌 손상의 영향에 더 민감하다 섹스 의존적으로 나타나고 있음을 나타낸다 비교 뇌 손상 9-11와 여성. 부상의 위치 파악은 임신 기간 및 지속 기간 및 모독의 정도에 따라 다르지만, 해마 용어 신생아 HI 후 CNS에서 가장 흔히 영향 영역 중 하나이며, 해마 astrogliosis가 상향 조절로 확인되었다 증가 아교 섬유 성 산성 단백질 (GFAP) 신생아 HI 7,10,12,13 후 3 일. 성상 세포 기능의 성별 차이는 뇌허혈 14, 15 후 모두 신생아와 성인 설치류에 나타내었다. 또한, 체외 허혈에 남성 성상 세포 감수성이 증가 CEL으로 나타났다문화 (16) 여성 대뇌 피질 성상 세포에 비해 리터의 죽음.
성별 차이에-자궁 시작과 죽음 (17)까지 계속. 지난 10 년간, 세포 배양 및 생체 내 연구 실험 조건에서 남녀 등의 중요성은 의학 및 NIH 연구소의 강조는 생리적, 병리 적 상태 (17, 18)을 볼 성별의 차이에 기초 지식을 추구 할 수 있었다 . 분리하고 성별화 된 해마 성상 세포의 인구를 유지하기 위해 신뢰할 수있는 방법의 개발은 신생아 HI의 병리 결과에서 성별 차이의 세포 기초를 이해하는 것이 필수적이다. 본 연구는 산소가 / 포도당 박탈 (OGD) 및 재산 소화 (REOX), 유도 다음 GFAP 면역 성상 세포의 역할을 평가하기 위해 신생아 쥐에서 농축 성 별 해마 성상 세포 배양을 준비하기 위해 기술을 제공하도록 설계되었습니다세포 배양 환경에서 HI. 이 기술은 정상 산소 및 허혈성 조건 신생아 암수 해마 성상에 속하는 모든 가설을 테스트하기 위해 사용될 수있다.
생리적 및 병리 적 조건에서 아스트로 성 특성의 차이 및 기능을 연구하기 위해, 세포 배양에서 거세 일차 성상의 제조 활용하는 중요한 도구이다. 본 연구에서 우리는 체외 신생아에서 성별화 된 해마 성상 세포의 고농축 균질 인구 (P0-P2) C57BL / 6 (야생형) 또는 K19F (GFAP 널) 마우스 새끼 고효율과 문화에 재현 방법을보고합니다. 이 방법을 설정하면 연구자는 시험관 허혈 후 성별화 된…
The authors have nothing to disclose.
Clinical and Translational Science Award program of NCATS UL1 TR0000427 and KL2 TR000428 (Cengiz P), UL1TR000427 to the UW ICTR from NIH/NCATS and funds from Waisman Center (Cengiz P), K08 NS088563-01A1 from NINDS (Cengiz P) and NIH P30 HD03352 (Waisman Center), NIH/NINDS 1K08NS078113 (Ferrazzano P). We would like to thank Albee Messing, PhD, for providing us the GFAP knockout mice.
Astrocyte culture media | |||
DMEM, high glucose | cellgro | 10-013-CV | |
Horse serum | Gibco | 26050-070 | Final Concentration: 10% |
Penicillin-Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | Final Concentration: 1% |
L-Leucine methyl ester hydrochloride | Aldrich | L1002-25G | Final Concentration: 5 mM |
Solution for brain tissue digestion | |||
HBSS | Life Technologies | 14170-088 | |
0.25% Trypsin | cellgro | 25-050-CI | Final Concentration: 0.25% |
その他 | |||
70% (vol/vol) ethanol | Roth | 9065.2 | |
Poly-D-Lysine 12mm round coverslips | Corning | 354087 | |
Water | Sigma | W3500 | cell culture grade |
PBS | cellgro | 21-040-CV | cell culture grade |
0.05% Trypsin-EDTA | Life Technologies | 25300-062 | |
70 μm Sterile cell strainer | Fisher scientific | 22363548 | |
3.5 cm petri dish | BD Falcon | 353001 | |
15 ml Falcon tube | BD Falcon | 352096 | |
50 ml Falcon tube | BD Falcon | 352070 | |
Forceps, fine | Dumont | 2-1032; 2-1033 | # 3c; # 5 |
Forceps, flat tip | KLS Martin | 12-120-11 | |
13 cm surgical scissors | Aesculap | BC-140-R | |
Confocal Microscope | Nikon | A1RSi | |
Centrifuge | Eppendorf | 5805000.017 | Centrifuge5804R |
Orbital Shaker | Thermo Scientific | SHKE 4450-1CE | MaxQ 4450 |
Anti-IBA1 | Wako | 019-19741 | Rabbit monoclonal |
Anti-MAP2 | Sigma | M2320 | Mouse monoclonal |
Anti-HIF1alpha | abcam | ab179483 | rabbit monoclonal |
Anti-S100B | Sigma | HPA015768 | Rabbit polyclonal |
Anti-GFAP (cocktail) | Biolegend | 837602 | |
VECTASTAIN Elite ABC Kit (Rabbit IgG) | Vector Labs | PK-6101 | Contains 4 Reagents |
Goat Anti Rabbit Alexa-Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
Goat Anti Mouse Alexa-Fluor 568 | Invitrogen | A11004 |