Création d'une importance clinique<em> Ex Vivo</em> Mock Chirurgie de la cataracte modèle pour étudier épithéliale Wound Repair dans un microenvironnement maternelle

La chirurgie de la cataracte cliniquement pertinente, maquette, modèle de cicatrisation des plaies ex vivo épithéliale décrit ici a été développé pour fournir un outil pour étudier les mécanismes qui régulent la réparation des tissus épithéliaux en réponse à une blessure. Principales caractéristiques qui visaient pour la création de ce modèle comprenaient 1) offrant des conditions qui reproduites étroitement la réponse in vivo pour blessant dans un cadre de culture, 2) la facilité de moduler les éléments de régulation de la réparation, et 3) capacité à l'image du processus de réparation, dans sa totalité, en temps réel. Le défi était donc de créer un modèle de culture dans lequel il a été possible d'étudier et manipuler, épithéliale réparation de blessure dans microenvironnement natif des cellules. La disponibilité de ce modèle plaie réparation ouvre de nouvelles possibilités pour identifier les signaux de signalisation endogènes de la matrice des protéines, des cytokines et des chimiokines qui régissent le processus de réparation. En outre, le modèle est idéal pour examiner comment unn épithélium est capable de se déplacer comme une feuille collective réépithélialisation de la plaie ^2,3, et pour la détermination de la lignée de cellules mésenchymateuses de tête au niveau du bord de la plaie qui fonctionne dans la direction de la migration de l'épithélium collective ⁴ blessé. Ce modèle fournit également une plate-forme permettant d'identifier des thérapeutiques qui pourraient favoriser la cicatrisation efficace et prévenir la blessure aberrante réparation ^5.

Il existe déjà un certain nombre de modèles disponibles plaie réparation, à la fois dans la culture et in vivo, qui ont fourni la plupart de ce qui est connu sur le processus de réparation de la plaie aujourd'hui. Dans les modèles de blessures animaux, tels que la cornée et la peau ^{6-12 13-17,} il ya la possibilité d'étudier la réponse du tissu à blessant dans le contexte de tous les médiateurs de réparation qui pourraient être impliqués dans le processus, y compris les contributions de la vasculaire et le système nerveux. Cependant, il ya des limites à la manipulation de l 'expérienceconditions mentales in vivo, et il est pas encore possible de mener des études d'imagerie de la réponse de réparation in vivo, de façon continue au fil du temps. En revanche, la plupart des modèles de culture in vitro plaie réparation, telles que la plaie de zéro, peuvent être facilement manipulés et suivis dans le temps, mais manquent le contexte de l'environnement de l'étude de la cicatrisation des plaies dans les tissus in vivo. Bien ex vivo modèles offrent l'avantage d'étudier le processus blessures de réparation continue dans le temps dans le cadre du microenvironnement des cellules associée à la capacité de moduler les régulateurs moléculaires de réparation à tout point de temps dans le processus, il ya quelques modèles qui correspondent à ceux-ci paramètres.

Ici, on décrit un procédé hautement reproductible pour générer ex vivo de cicatrisation epitheliale cultures qui reproduisent la réponse d'un tissu épithélial à une blessure physiologique. Utilisation de la lentille d'embryon de poulet comme source de tissus, un ex vivo mock chirurgie de la cataracte est effectuée. La lentille est un tissu idéal à utiliser pour ces études car il est auto-contenue dans une capsule de la membrane basale épaisse, avasculaire, pas innervé, et libre de toute stroma associé ^18,19. Dans la maladie humaine, la chirurgie de la cataracte traite une perte de vision due à l'opacification de la lentille, et implique l'élimination de la masse de cellules de la fibre de verre, qui comprend la plus grande partie de la lentille. A la suite de la chirurgie de la cataracte vision est restaurée par l'insertion d'une lentille intraoculaire artificielle. La procédure de chirurgie de la cataracte, par élimination des cellules de la fibre, induit une réponse de lésion de l'épithélium de la lentille adjacente, qui répond en ré-épithélialisation de la zone postérieure de la capsule du cristallin qui a été occupée par les cellules de la fibre. En chirurgie de la cataracte, comme dans la plupart des réponses plaie de réparation, il se produit parfois un résultat aberrant fibrotique à la réponse de cicatrisation de la plaie, associée à l'apparition de myofibroblastes, qui, dans la lentille postérieure est connu comme Capsule opacification ^20-22. Pour générer le modèle de cicatrisation de la plaie de la chirurgie de la cataracte, une procédure de chirurgie de la cataracte est imité dans les lentilles retirés de l'œil d'embryon de poulet pour produire une blessure physiologique. Enlèvement de microchirurgie de fibres de verre résultats des cellules dans une zone de la plaie circulaire très cohérent entouré par les cellules epitheliales du cristallin. Cette population de cellules reste fermement attachée à la capsule de la lentille membrane basale et est blessé par la procédure chirurgicale. Les cellules épithéliales migrent sur ​​la zone dénudée de la membrane basale endogène de guérir la plaie, dirigé par une population de cellules mésenchymateuses vimentine riche connus dans le processus de réparation en tant que cellules de ¹ chef. Avec ce modèle, la réponse d'un épithélium de blessure peut être facilement visualisé et suivie avec le temps dans le cadre de la micro-environnement des cellules. Les cellules sont facilement accessibles à des modifications de l'expression ou l'activation de molécules susceptibles de jouer un rôle dans la cicatrisation des plaies. Une puissante fonctionnalité de eest le modèle est la capacité à isoler et à étudier les changements spécifiques à la migration dans le cadre de la cicatrisation des plaies. La possibilité de préparer un grand nombre de plaies appariés ex vivo pour la guérison de cultures âgées études est un autre avantage de ce modèle. Ainsi, ce système de modèle fournit une occasion unique de démêler les mécanismes de la cicatrisation des plaies et de la thérapeutique de test pour leur effet sur le processus de cicatrisation des plaies. L'ex vivo maquette modèle de chirurgie de la cataracte est prévu d'avoir une large applicabilité, fournissant une ressource essentielle pour les mécanismes de réparation des lésions de l'étude.