从人类母胎界面分离白细胞

怀孕的特征在于三种不同的免疫学阶段：1）植入并用促炎症反应相关的早期胎盘（ 即 ，植入类似于一个“开放性伤口”）; 2）孕中期和孕大部分的孕晚期时免疫稳态通过主要是消炎的状态在母胎界面实现; 3）分娩，促炎症状态^1-7。免疫细胞在母胎界面发挥在炎症反应的调节中起重要作用，他们的丰度和在整个孕期^6-9本土化的改变。

在人类中，母胎界面代表了母性（蜕膜）和胎儿（绒毛膜滋养层或）组织之间的直接接触面积。该接口包括：1）蜕膜顶叶的行宫腔未包括的胎盘和是并列以绒毛膜绒毛的;和2）的底蜕膜，位于它是由间质滋养层^10（ 图1）侵入胎盘的基板。接触的这些区域的亲密创建胎儿抗原暴露于母体免疫系统^11-13的条件。不足为奇的是，白细胞包括多达蜕膜细胞^8,9,14,15 30-40％除了典型的基质型细胞和腺细胞^8,14,16。白细胞在母胎界面的作用涵盖了包括滋养细胞浸润¹⁷的限制，螺旋动脉^18,19的重塑，维护产妇宽容^12,20和劳动力^21-26启动多个进程。两者的适应性和免疫系统， 即 ，T细胞，巨噬细胞，中性粒细胞，B细胞，树突细胞，和NK细胞，已在蜕膜组织确定了先天四肢，以及它们的白细胞比例和激活状态已示出，以改变空间和时间整个妊娠期^{6-10,12,14,24,27-30。}在白细胞种群和/或功能的扰动与自然流产^31，先兆子痫^32，宫内生长受限^32,33，和早产^7,24相关联。因此，在人类母胎界面的表型特征和白细胞功能的研究将有助于失调在怀孕紊乱的免疫途径的阐明。

一种用于确定表型和白细胞的功能特性被流式细胞术的最有力的工具，技术，允许多个参数同时^34-36的定量分析。分析白细胞通过流式细胞术，在单细胞悬浮液中的白细胞的隔离是必需的。因此，一个方法来分离浸润亮氨酸从母胎界面kocytes是需要研究其表型和功能特性。

几种方法已经被描述，从人类母胎界面^{10,14,25,27,37-39}隔离白细胞。虽然一些应用机械分解^{10,25,27,38，}别人用酶消化^37,40进行组织分离。因为机械解聚产生较低产量和降低的生存力^41，和酶解可影响生存力和细胞表面标记物保留^42，本文所描述的方法结合温和机械解离与酶预处理，以增加分离的白细胞的产量而不影响细胞生存力。方法类似的组合已经被证明是有效的，从在母胎界面³⁹蜕膜组织白细胞的隔离。因此，本文描述的协议涉及机甲nical分解与自动组织离解，增加一致性，同时节省时间和劳动时与反对手术刀，刀片，或手术剪^10,28比传统的切碎。选择用于组织解离酶是的Accutase。不同于常用的胶原酶^43，分散酶^44，和胰蛋白酶⁴⁵的Accutase（细胞分离液）结合了一般的蛋白和有助于高效而温和的解离^46,47胶原溶解活动。解离后，将白细胞从蜕膜细胞通过密度梯度离心的总人口富集。各种密度梯度介质先前已经利用，其中最常见的是珀（胶体二氧化硅粒子的悬浮液^）48和聚蔗糖（蔗糖的具有高合成分子量的聚合物^）49。隔离的蔗糖聚合物的卓越效率一直previously所示^50，和本文中进一步描述的方案证明该密度梯度介质能产生单核白细胞的足够高的纯度。

因此，本文描述的协议相结合的机械组织分解用自动组织离解，酶消化用细胞分离溶液，并用密度梯度介质（1.077 + 0.001g /每毫升）以分离从人蜕膜白细胞白细胞的分离。该协议已经被证明维持细胞表面抗原连同细胞活力。分离的白细胞可用于多种应用，包括免疫流式细胞仪和体外功能研究。