Методы клеточной прилагается измерения емкости в мышь надпочечников хромаффинных Cell

Синаптической передачи опосредуется экзоцитоза нейромедиаторов содержащих синаптических пузырьков, и эти пузырьки должны пройти местную переработку эндоцитотических внутри нервного окончания поддерживать нейронов связи в долгосрочной перспективе. Учитывая важнейшую роль синаптической передачи в головном мозге, понимая молекулярные машины, составляющие синаптической цикл пузырек представляет собой краеугольный камень в сторону лучшего понимания в сотовой связи в целом. Среди модельных клеток систем, надпочечников хромаффинных клеток предоставил некоторые из самых окончательного прозрения молекулярных машин, лежащей в основе синаптической переработки пузырьков. Экзоцитоз, заключительный шаг в высвобождения нейромедиатора, была безмерно изучены и рассмотрены с помощью надпочечников хромаффинной ячейки ^1,2. На самом деле, большинство молекулярных игроков, которые руководят этими образование, адресности, стыковку, и слияние секреторных гранул были выявлены благодаря применению делметоды ERSE в хромаффинных клеток ^1. Кроме того, путем предоставления возможность позволить для разрешения одного пузырька от машин белка, участвующего в экзоцитоза, хромаффинных клетка остается мощной моделью для решения вопросов слияния пузырьков ^3.

Измерения емкости Сотовые подключением были впервые использованы в решении одной слияния пузырьков во время экзоцитоза ^3. Экзоцитоза пузырьков размером до ~ 60 нм в диаметре были продемонстрированы быть обнаружены с помощью измерений допуска клеточных мембран с техникой патч зажима в конфигурации клеток присоединены ^4-7. Прием определяется как мера того, насколько легко схема или устройство позволит току течь; это обратная импеданса. Таким образом, измерения допуска обеспечить понимание мембранного емкости. Это достигается путем введения везикулярного мембрану в плазматической мембране; это включение показывает изменения в поверхностиплощадь ^8. Каждый слияния пузырьков вызывает ступенчатое увеличение мембрана емкости ^9,10. Кроме того, это измерение допуска обеспечивает проводимости мембраны и поры слияния проводимость во время экзоцитоза события ^3. Как эта техника предоставил уникальный инструмент на установления единых-пузырек кинетики во экзоцитоза, наша лаборатория недавно применил эту концепцию для обнаружения эндоцитоз одиночных пузырьков ^11,12.

Наши конкретные интерес клатрин-эндоцитоз (CME), который был рассмотрен в качестве основного компонента домашнего хозяйства во многих клетках ¹³ и в качестве основного пути для синаптических пузырьков эндоцитоза в нейронных терминалов ^14,15. CME, как известно, биологически важно, однако, его кинетика остаются не до конца понятны связи с техническими ограничениями в мониторинге особых эндоцитотических события. Учитывая сходство в exocytic механизмов между хромаффинных клеток и нейронов ^1, это плausible, что механизмы деления клеток в хромаффинных может, вероятно, относится к эндоцитоза синаптических пузырьков в нейронах. Измерения емкости сотовых подключением были использованы для мониторинга отдельных эндоцитотических события и анализа кинетики деления, которые большинство методов не в состоянии разрешить. В наших сотовых подключением записей, синусоида с частотой 20 кГц накладывается на проведения потенциал, а выходной ток разделяется на проводимости мембраны в одном канале и мембраны емкости в другой канал от двухфазного синхронного усилителя ^{16- 18.} Из изменений в мембранной проводимости и емкости, можно рассчитать кинетики деления порами, что, вероятно, соответствует трубчатой ​​шеи мембраны, которая соединяет интернализации пузырек в плазматическую мембрану до везикул отсечки. В совокупности эта техника дает нам возможность изучить нормативные механизмы пузырьков деления во время CME.