レーザーキャプチャーマイクロダイセクションで鼻生検併用して得られた嗅覚ニューロン：精神疾患における治療応答を研究するために潜在的なアプローチ

双極性障害（BD）は、気分、ドライブおよび認知¹における病理学的変化によって特徴付けられる深刻な神経精神障害である。 BDの治療のために使用されるリチウムは、動物試験²における多数の遺伝子の定常状態mRNAレベルを変化させることが示されているが、これらの分子のいずれかは、ヒト²における臨床応答に関連付けられている場合、それは未知のままである。リチウム応答のメカニズムを理解することは、神経組織におけるリチウム誘発性分子の変化を調査して必要になります。残念ながら、BD患者の脳生検を得るためにリチウム応答の分子シグネチャーを同定するための前および後のリチウム治療は実用的ではない。死後の脳組織はBDバイオマーカーを研究するために使用されてきたが、それらは感情、認知およびドライブの動的変化に関連する分子マーカーを評価するために使用することができない。遡及的に確認リチウム処置応答の妥当性が問題となる可能性がある⁴。リンパ球および他の血液細胞が有用かもしれないが、血液細胞中の分子の変化は、神経細胞の変化は^3-5とは異なる場合^があります。脳脊髄液は、疾患関連および投薬可逆固有の変更を反映することができる細胞内分子の情報を取得するには不十分であり得る。

嗅上皮（OE）は、大脳辺縁系の構造⁶に発生学的に関連した、中枢神経系（CNS）の固有の部分である。そしてそれは、鼻の生検を通じて簡単にアクセスできます。これは、で構成されていグリアのような開発^7-9の異なる段階で（ すなわち、sustentacular）細胞は、基底増殖細胞、および嗅覚受容ニューロンを支援する。したがって、OEはアクセス可能に神経精神疾患⁷の患者のCNS ​​中の動的な変化を研究するユニークな機会を提供します。研究では、それらのOCCを反映疾患に関連するイベントを調査するための代用組織としてOEの有用性を実証している脳の神経細胞^8,9にurring。例えば、研究は、精神状態^10〜14に関連する分子のプロファイルを調査するためにOEを利用している。嗅覚系はまた、統合失調症¹⁵症の陰性症状に関連付けられている匂い赤字などの臨床endophenoytpesを識別するのに役立つ。さらに、神経発達のプロセスは、精神状態^8,9の根底にある病態生理をモデル化するための有用な手段を提供し、生涯を通じてOEで続ける。

しかし、この組織の使用の欠点は、非神経細胞¹⁶と嗅覚検の実質的な汚染である。例えば、以前のOE研究において遺伝子発現研究のために使用された全RNAは、非神経細胞¹⁷からのRNAを含む全体の鼻生検組織から抽出したRNAを含有した。したがって、従来のアプローチは、細胞の品質によって制限されている。この問題を克服するために、新規なアプローチが取得するレーザーキャプチャーマイクロダイセクション（LCM）で鼻生検を組み合わせることにより、神経細胞集団を富化^18が開発されている。

LCMは、赤外線レーザー^19-21と組み合わせるUVレーザー切断を用いて細胞を選択的に単離を可能にする技術である。 OEのアプローチでLCMを組み合わせることで、それによって神経細胞¹⁸の濃縮を強化する、非神経細胞によるOEのかなりの汚染を最小限に抑えることができます。また、ニューロンの層がそれによって染色する必要がなくなり、顕微鏡下粘膜下組織層から区別することができる。神経細胞型は、さらに関心⁷の細胞型により発現される一次抗体を使用して、他の細胞集団と区別することができる。したがって、この手順は、遺伝子発現研究、免疫組織化学および他の形態学的調査のために使用することができる、ほぼ純粋な神経細胞集団の濃縮のための容易にする方法を確立する。

ve_content ">この研究では、疾患状態および治療反応に関連した嗅覚ニューロンにおける分子変化を調査する実験プラットフォームを確立することを目指しています。この、に基づいて、BD用のDSM-IV診断基準を満たした禁煙の患者の小さなセットに対処するために遺伝学的研究のための診断面接^{（DIG）22が} 2鼻の生検を受けることが募集されました：リチウム及び第二の生検で1生検前処理、毎日の経口リチウム療法の6週間後にまた、適格BD患者でなければなりません：。うつ病の症状を示す、モンゴメリー·アスベルグ評価尺度^{（MADRS）23}投与臨床医に60の外≥10をスコアに基づいて、（YMRS）軽躁やマニアのための症候、ヤング·マニア評価尺度投与臨床医に56のうち、スコア≥10に基づく^24;またはMADRSとYMRS両方で≥10両方のスケールの臨床医の間の合意の評価者·評価者間係数は> 0.96である生検の後、ニューロンは電子航法研究所だった。。LCMによってOEからCHED。組織及び神経富化から高品質のRNAの抽出を確実にするために、以下の追加の品質管理対策、リアルタイムRT PCRは、関心のある遺伝子の前および治療後の発現レベルを調べるために行った。その後のセクションでは、このアプローチの妥当性についての説明、プロトコルの最適化を強調し、トラブルシューティングのプロトコルを適用した戦略が含まれている。