נוירונים חוש הריח באף הושגו באמצעות ביופסיה משולבת עם Microdissection הלייזר-Capture: גישה פוטנציאלית לחקר טיפול בהפרעות נפשיות תגובה

הפרעה דו-קוטבית (BD) היא הפרעת נוירו-פסיכיאטרית חמורה, המתאפיינת בשינויים פתולוגיים במצב רוח, לנהוג וקוגניציה ^1. ליתיום משמש לטיפול בBD הוכח לשנות את רמות ה- mRNA המדינה יציבה של מספר רב של גנים במחקרים בבעלי החיים ^2, אבל זה עדיין לא ידוע אם כל מולקולות אלה קשורים בתגובה קלינית בבני האדם ^2. הבנת המנגנון של תגובת ליתיום תדרוש חוקרת שינויים מולקולריים הנוצר על-ליתיום ברקמות עצביות. למרבה הצער, זה לא מעשי להשיג ביופסיות מוח של חולי BD מראש וטיפול בפוסט ליתיום לזהות חתימות מולקולריות של תגובה ליתיום. רקמות מוח פוסט-מורטם נעשו שימוש כדי ללמוד סמנים ביולוגיים בBD, עם זאת, הם לא יכולים לשמש כדי להעריך סמנים מולקולריים הקשורים לשינויים דינמיים ברגשות, קוגניציה ולנהוג; ואת תוקפו של תגובה לטיפול ליתיום הובררה למפרע יכול להיות בעייתי ⁴. לימפוציטים ותאי דם אחרים יכולים להיות שימושיים, אבל שינויים מולקולריים בתאי דם עלולים שלא לשקף שינויים עצביים ^3-5. נוזל השדרתי עשוי להיות מספיק כדי לקבל מידע על מולקולות תאיות שעשויים לשקף שינויים מהותיים הקשורים למחלות והתרופות-הפיכה.

אפיתל הריח (OE) הוא חלק ייחודי של מערכת העצבים המרכזית (CNS), הקשורות למבני embryologically הלימבית ^6; והוא נגיש בקלות באמצעות ביופסיות האף. זה מורכב של גליה-כמו תמיכה בתאי תאים (כלומר, sustentacular), בסיס מתרבים, ותאי עצב קולטני ריח בשלבים שונים של פיתוח ^7-9. לכן, OE מספק הזדמנות ייחודית ללמוד accessibly שינויים דינמיים במערכת העצבים המרכזית של חולים במחלות נוירו-פסיכיאטריות ^7. מחקרים מדגימים את התועלת של OE כרקמה פונדקאית לחקירת אירועי מחלה קשורה המשקפים OCC אלהurring בתאי עצב במוח ^8,9. לדוגמא, מחקרים מנוצלים OE לחקור פרופילים מולקולריים הקשורים במצבים פסיכיאטריים ^10-14. מערכת חוש הריח משמשת גם לזיהוי endophenoytpes הקליני כגון גירעונות ריח הקשורים לסימפטומים שליליים של סכיזופרניה ^15. בנוסף, תהליכי התפתחות נוירולוגית להמשיך בOE לאורך כל חיים, מתן השדרה שימושית למודל הפתופיזיולוגיה הבסיסית של ^8,9 מצבים פסיכיאטריים.

עם זאת, חסרון לשימוש ברקמה זו הוא הזיהום המשמעותי של ביופסיות חוש הריח עם תאים שאינם עצביים ^16. לדוגמא, RNA הכולל המשמש למחקרי ביטוי גנים במחקרים קודמים OE הכיל RNA שחולץ מן רקמות האף כל ביופסיה כוללים RNA מהתאים שאינם עצביים ^17. לכן, גישות קודמות היו מוגבלות על ידי האיכות של תאים. כדי להתגבר על בעיה זו, גישה חדשנית להשגה אוכלוסיות תאים עצביות מועשרות על ידי שילוב של ביופסיות האף עם microdissection לייזר ללכוד (LCM) פותחו ^18.

LCM הוא טכניקה המאפשרת לבידוד סלקטיבי של תאים באמצעות חיתוך לייזר UV בשילוב עם לייזר אינפרא-אדום ^19-21. LCM שילוב עם גישת OE ממזער זיהום משמעותי של OE על ידי תאים שאינם עצביים, ובכך משפר את ההעשרה של תאים עצביים ^18. יתר על כן, השכבה העצבית ניתן להבחין בין שכבת submucosa תחת מיקרוסקופ, ובכך מבטלת את הצורך בצביעה. עוד ניתן להבחין בין אוכלוסיות תאים אחרות סוגים עצביים תא באמצעות נוגדנים ראשוניים אשר באו לידי ביטוי בסוג התא של עניין ^7. לכן, הליך זה קובע שיטה קלה יותר להעשרת אוכלוסיית תאים כמעט אך ורק עצבית שיכול לשמש למחקרי ביטוי גנים, אימונוהיסטוכימיה וחקירות מורפולוגיים אחרות.

ve_content "> מחקר זה נועד להקמת פלטפורמה ניסיונית לחקור שינויים מולקולריים בתאי עצב הרחה הקשורים במצבי מחלה ותגובה לטיפול. כדי לטפל בזה, קבוצה קטנה של חולים ללא עישון שעמדה בקריטריונים לאבחון DSM-IV לBD המבוססת על ראיון האבחון למחקרים גנטיים (DIG) ²² גויס לעבור שתי ביופסיות האף: ביופסיה אחד מראש טיפול בליתיום והביופסיה השנייה, לאחר 6 שבועות של טיפול אוראלי יומי ליתיום יתר על כן, חולי BD זכאים חייבים להיות:. סימפטומטי לדיכאון , המבוסס על ניקוד ≥10 מתוך 60 במטפל מנוהל מונטגומרי-Asberg Rating Scale (MADRS) ^23; סימפטומטי להיפומאניה או מאניה, המבוסס על ציון ≥10 מתוך 56 על המטפל מנוהל יאנג-מאניה Rating Scale (YMRS) ^24;. או ≥10 בשני MADRS וYMRS מקדם מדרג-Inter-מדרג של ההסכם בין רופאים לשני הסולמות הוא> 0.96 לאחר ביופסיות, נוירונים היו enri.CHED מOE ידי LCM. בעקבות אמצעי בקרת איכות נוספת, כדי להבטיח מיצוי של RNA באיכות גבוהה מהרקמה וההעשרה עצבית, Real Time PCR RT נערך לחקור רמות של לפני וביטוי שלאחר הטיפול של הגנים של עניין. הסעיפים שלאחר מכן מכילים תיאור של האימות של גישה זו, המדגישה את אופטימיזציה של הפרוטוקול והאסטרטגיות שיושמו לפרוטוקול ירי-צרות.