マウスドーパミン作動性ニューロンの初代培養

ドーパミンは、本質的な脳の神経伝達物質^1,2の一方は、主として中脳ドーパミン作動性（DA）ニューロンによって放出される。 DAニューロンの大部分は、中脳^2-6の腹の部分に存在します。概略的に、中脳DAニューロンは3解剖学的および機能的に異なる投影システムに分けることができます。mesostriatal、中脳辺縁系、および中間皮質経路^2,5。前頭前皮質に突出するドーパミン作動性経路が認知²に関係しているのに対し、黒質線条体経路は、中脳辺縁系経路が強化、モチベーション、学習に重要な役割を果たし、運動行動に関与している。

DAニューロンは、統合失調症、注意欠陥、過活動障害、及びパーキンソン病^（PD）2,4のようないくつかのヒト神経疾患に関与している。 PDは、黒質を接続するDAニューロンの進行性かつ選択的な変性によって特徴づけられる線条体への緻密部（SNC）。 PDの運動症状の責任がある線条体における深刻なドーパミン枯渇黒質線条体DAニューロン結果の損失（動作緩慢、安静時振戦、及び剛性^）7。線条体におけるドーパミンレベルの復元を目指し、特発性PDの初期の原因は確立されておらず、現在の治療法は対症療法のみである。最も多く処方された薬物は、L-ドーパ（レボドパ）、ドーパミンの自然な前駆体である。レボドパの投与は、一定時間ドーパミンの損失を補償するのに、運動合併症は、長期間の治療（ジスキネジーおよびオン/オフ状態^）8,9を生じる。

ドーパミン作動性ニューロンおよびPDの研究は、一定の進行であり、強烈な努力が細胞移植、遺伝子治療、または神経保護剤^10,11に基づいて治療法を開発するために行われている。しかし、大きな問題は、非解明のまま：極端なvulnerabの原因が何であるかDAニューロンのility？その答えの一部は、DAニューロンの活動で見つけることができます。電気的活動およびDAニューロンの興奮性の減少は^、12を縮退させる彼らの傾向を増大させると思われる。それにもかかわらず、PDの病因の複雑さは、DAニューロンに関与する機構は^13-15退化識別するために、さらなる研究が必要である。

初代培養は、DAニューロンの性質^16-19を研究すると、神経保護剤^20〜24の評価のためにさまざまなストレスにこれらのニューロンに挑戦することが特に関連しています。ラット培養モデルは、ほとんどの場合、ラット胚中脳の解剖が容易であるように、マウスと比べて、ニューロンのより高い量は、ラットで得ることができ、使用されている。しかし、病気²⁵のトランスジェニックマウスモデルの生成が大幅にマウス^26-29からの初代培養のための神経科学コミュニティの関心が高まっている。広報文化ものの生まれたばかりの動物からepared使用することができ、それが神経細胞が分化する能力を保持しているときには、有糸分裂後の段階（中脳の神経細胞のためE13.5）で胚からそれらを準備することをお勧めします。以下のプロトコルを準備することが最も困難であるマウス胚（E13.5）からの初代培養中の単離中脳ニューロンを提示します。注目すべきことに、私たちは、より良い再現性のために、無血清培地を使用してプロトコルを提供する。培養の準備（解剖および機械的解離）内の2つの最も重要なステップは慎重に関連したビデオの中で詳細に説明する。