Uma nova abordagem para Microdissecção Recuperando<em> Mycobacterium tuberculosis</em> transcritos específicos de formalina fixo Parafina incorporado Lung granulomas

As amostras foram tradicionalmente microdissecado manualmente a partir de qualquer tecido ou conjunto lâminas usando uma agulha e bisturi. Isto exige uma separação clara entre a secção de tecido de interesse e tecidos circundantes pontos ^2. Com os avanços na tecnologia actual perfil molecular, tem havido uma necessidade cada vez maior para avaliar tecidos ao nível celular. Devido às limitações de microdissecção manual, foram estabelecidas técnicas, incluindo LCM para permitir uma maior precisão isolamento. Esta técnica permite ao investigador para isolar populações de células específicas a partir de vários tipos de células e de deslizamento, que podem então ser utilizadas para ensaios a jusante, tais como a expressão do gene de perfil. Embora muito eficaz para ensaios a jusante, GCV não é sem limitações. Primeiro, LCM é um processo caro e demorado. Além disso, devido à natureza instável do ARN, que é muitas vezes difícil obter o RNA de alta qualidade a partir de amostras de LCM ^2. Devido ao disadvantages de LCM, novos avanços na tecnologia microdissection ainda são necessários para torná-lo mais acessível a um maior número de pesquisadores, de forma sensível a preços acessíveis e de tempo.

Um tal avanço da tecnologia microdissection agora está disponível uma técnica conhecida como mesodissection. Nesta técnica uma máquina é usada para moer a secção de tecido anotada de juros e aspira-lo em um consumível pouco moinho ^3. Em seguida, essa amostra pode ser aspirado para dentro de um tubo de coleta e usado para aplicações a jusante. As vantagens deste sistema são que é significativamente menos dispendioso e sensíveis ao tempo. Em nossa experiência, o sistema permite a dissecação de uma secção de tecido granuloma pulmonar em dez minutos. Por outro lado, o LCM tradicional seria provável exigir horas para completar o processo. O sistema permite que o operador carregar uma lâmina de referência a ser usado como uma comparação, bem como ferramenta para anotação. Além disso, um relatório é gerado descrevendo ªárea e do slide que foi dissecado. Há duas principais desvantagens para mesodissection. Embora eficaz na extração de várias células, é um desafio para isolar uma única célula. Além disso, a precisão da imagem gerada não é tão clara como se estivesse usando outros microscópios de imagem.

A tuberculose (TB) é um grande assassino de doenças infecciosas da humanidade em todo o mundo e resulta de infecção por M. tuberculosis. Na maioria dos indivíduos expostos a aerossóis de Mtb, a infecção é latente limitado. Em pelo menos 10 milhões de pessoas por ano, que resulta em doença tuberculose ativa ^4. Durante a infecção latente, Mtb está contido dentro de lesões pulmonares patológicos conhecidos como granulomas. Por isso, tem-se argumentado que o resultado de infecção por M. tuberculosis é decidido ao nível do granuloma ^5.

Aqui demonstramos como mesodissection pode ser usado para microdissect granulomas provocadas por M. tuberculosis. Os slides utilizadossão de FFPE tecido pulmonar de macacos rhesus infectados. Para o propósito desta demonstração, vamos dissecar granulomas na sua totalidade. Também demonstramos que o RNA pode ser extraído a partir do tecido recuperado. Esta técnica pode ser aplicada a amostras de tecidos de várias outras amostras e, em seguida, utilizados para uma variedade de ensaios a jusante.