Técnica de transplante heterotópico Murino Coração

Todos os animais foram alojados em condições livres de patógenos na Universidade de Colorado Barbara Davis Centro Biotério sob aprovação IACUC e tratados de acordo com as diretrizes do NIH. Profundidade da anestesia é julgado por toe pitada inicialmente e pela observância da taxa de respiração uma vez que o processo já começou. 1. Coração doador Colheita Anestesiar o rato doador através da injeção de pentobarbital (60 mg / kg IP). Imobilizar o mouse pelas restrições de 4 vias e clipe da pele. Limpe a pele com álcool. Após dissecação afastado da pele, abrir a cavidade abdominal através de uma incisão transversal logo abaixo do diafragma. Corte o diafragma para posterior inserção costal e levantar a parede anterior do tórax anterior e superiormente expondo o coração. Estender uma espessura total cortar o posterior cavidade torácica lateral nos lados esquerdo e direito do peito. Isolar oveia cava inferior (VCI) e coloque um frouxo 5-0 seda de sutura ao redor do IVC adjacente à sua inserção no átrio direito. Injetar 1,0 cc de 4 ° C salina heparinizada (200 u / cc) para o IVC, então ligadura do vaso com a sutura de seda 5-0 e dividir. Isolar o direito da veia cava superior (VCSD) de forma semelhante e ligadura com fio de seda 5-0 e dividir. Rolo delicadamente o coração para o lado direito dos animais e isolar a veia cava superior esquerda (VCSE), ligadura com um fio de seda 5-0 e dividir a exposição da artéria pulmonar esquerda. Fixe o coração sob uma gaze molhada, enquanto o timo é fechado dissecado de distância da principal artéria pulmonar (AP) ea PA ramos direito e esquerdo e ascendente do arco aórtico. Blunt dissecar o arco aórtico livre dos tecidos circundantes. Micro-tesoura são utilizados para dividir o proximal da aorta até a artéria braquial-cefálica direita, ou seja, não deve haver ramos entre o coração ea divisãoponto da aorta. Esta secção do arco aórtico forma o manguito arterial para o processo de implante. Refletir a braçadeira aórtica inferiormente para expor o tronco PA e os ramos direito e esquerdo do PA. Blunt dissecar os ramos PA esquerdo e direito longe dos tecidos circundantes, tanto do coração quanto possível. Isto permite a fácil dissecção do tronco PA a partir de tecidos circundantes. Divida o tronco PA como distalmente quanto possível, logo proximal à sua bifurcação. Esta secção da artéria pulmonar faz o manguito venoso para o processo de implante. Coloque uma seda de sutura 5-0 em torno da base do coração e laço. O coração é em seguida cortada na base livre, e colocado em solução salina a 4 ° C. O tempo total de colheita é de aprox. 10-15 min. 2. Técnica de Implantes Coração Anestesiar os ratos receptores com pentobarbital (60 mg / kg de dose inicial de IP, 25 mg / kg IP dose suplementar, se necessário). Clipe da pele eimobilizar o mouse pelas restrições de 4 vias e preparar a pele com iodopovidona e cortina de forma estéril. Adicione de 2 cm na linha média abdominal incisão vertical e entrar na cavidade abdominal. Recolha o intestino superiormente e exteriorizada para o peito. Manter envolto em gaze úmida estéril (solução salina estéril) em todo o caso. Isolar a aorta abdominal e veia cava inferior (IVC) abaixo dos vasos renais e colocar 4-0 laços de algodão em torno da aorta e veia cava inferior superior, então inferior à do local da anastomose. Identificar todos os vasos lombares dentro do campo e ligar com sutura de nylon 10-0. Ate os laços de algodão, primeiro o inferior seguido do superior. Deste modo algum sangue é retida na aorta fazendo o Aortotomia mais fácil. Formar o Aortotomia com uma agulha de 30 G para introduzir o lúmen da aorta. Estender a incisão com micro tesouras finas a um comprimento de aproximadamente 2 mm. Esta incisão é feita em uma linha reta ao longo da longaitudinal eixo do navio. Faça um fim a anastomose da aorta do doador para a aorta destinatário da seguinte forma. Coloque um 10-0 sutura nylon estadia ponto na aorta do doador e para o ângulo inferior da incisão na aorta destinatário e gravata. Coloque um segundo 10-0 nylon oposto ao primeiro na aorta do doador e do canto superior da incisão na aorta abdominal e gravata. Faça uma linha de sutura contínua de superior para inferior na parede lateral da aorta e empate contra o ponto estadia previamente colocado. Não se esqueça de trazer os INTIMAS (superfície vaso interior) juntos, como você costurar. Então suturar o lado medial de forma corrida e gravata. O primeiro e último ponto de cada lado deve ser colocado o mais próximo possível dos pontos estadia possível. Em seguida, ter em vista que 3 pontos uniformemente espaçados entre estes dois perfazendo um total de 5 pontos. Faça um fim a anastomose da artéria pulmonar dador até ao receptor IVC da seguinte forma. Puncture a VCI com uma agulha 30 G e estender a incisão durante aprox. Dois milímetros com micro tesoura fina. Esta incisão é feita numa linha recta ao longo do eixo longitudinal da embarcação. Amarre a artéria pulmonar do doador para o canto inferior da incisão na VCI com 10-0 nylon. Coloque um segundo 10-0 nylon oposto ao primeiro na artéria do doador e do canto superior da incisão no IVC e gravata. Faça uma linha de sutura contínua entre a artéria pulmonar ea veia cava inferior e gravata. O primeiro e último ponto de cada lado deve ser colocado o mais próximo possível dos pontos estadia possível. Em seguida, ter em vista que 5 pontos uniformemente espaçados entre esses dois fazendo um total de 7 pontos. Solte o algodão 4-0 empate fluxo venoso restabelecer distal. Uma vez que a hemostasia da anastomose venosa tem sido observado o proximal empate 4-0 algodão está gradualmente afrouxados ea anastomose arterial observada para a hemostasia. Quando ambas as anastomoses são consideradas seguras, retire o cotton amarra do mouse. Retorne o intestino ao abdômen. A parede abdominal é fechada em duas camadas utilizando 5-0 suturas de seda de uma maneira em execução. Administrar um bolus de 1,0 ml de solução salina esterilizada quente no abdômen como reposição volêmica após o fechamento, e 0,8 ml de soro fisiológico é injetado por via subcutânea no pós-operatório. Não são necessárias outras medidas de suporte durante a cirurgia. Recuperar o animal em uma manta térmica. Tempo de implante total é de aprox. 90-120 min para iniciantes, 45-60 min com a experiência. Administrar analgesia buprenorfina, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml no início do procedimento e cada 6-12 horas para 72 horas pós-op. 3. Avaliação Enxerto Avaliar a função do enxerto diariamente por palpação trans-abdominal. Segure o mouse como se fosse para ser dada uma injecção intraperitoneal. Pressione suavemente a ponta de um dedo indicador contra a parede abdominal e determinar o str espancamentoength e regularidade do enxerto. Dê qualidade palpação uma pontuação de 4 (amplitude e frequência normal) para 0 (não bater rejeitado enxerto). NOTAS IMPORTANTES: Todos os instrumentos são esterilizados, luvas estéreis são usados ​​durante todo o procedimento e um campo estéril é mantida. As cirurgias dadoras e receptoras são realizadas com o uso de um microscópio de operação. Certifique-se de que as anastomoses são "limpa". Isto é, que as paredes traseiras não são capturados ao colocar pontos. Isso fará com que uma constrição significativa a fluir que mais do que provavelmente resultam em um enxerto falhou e, em casos extremos para as posteriores de membros paralisia. Também é extremamente importante que a espessura total passa incluindo a adventícia vascular e íntima da agulha de sutura são alcançados. Eversão das bordas também assegura que não há contacto íntima-a-íntima, que ajuda na cura e selagem das anastomoses. Outro fato de importância vitalou é assegurar que a tensão das linhas de sutura de anastomose também é óptima. Muito solto e não haverá vazamento irreversível, muito apertado e estenose a fluir irá resultar. Se no lado arterial isto irá resultar em má perfusão do enxerto, se no lado venoso de um coração congestionado vai resultar.