세균성 병원체에 의해 세포 감염을 조사하기 위해 InlC 분비 이미징<em> 리스테리아</em

그람 양성 세균 리스테리아 균은 숙주 세포에 침입의 국제화 공포를 방해하고 숙주 세포 ^1의 세포질에서 복제 식품 매개 병원체이다. L. 세포 및 동물 모델에서 관찰 된 세균의 독성 특성의 지속성과 관련된 실험실 컨텍스트 (급속한 성장, 건강한 개인에 대한 낮은 독성)의 조작의 용이성 모노 사이토 겐 (용혈성 활동, 백혈구가)의 주요 모델로 1960 년에 처음 사용 허용 세포 내 기생의 감염 ^2에 대한 세포 성 면역의 이론적 기초의 설립을위한 연구. 1980 년대 후반과 1990 년대 초반, 세균의 세포주기 ^3뿐만 아니라 가장 중요한 세균의 독성의 분자 특성의 해부는 ^4-7 L.의 사용을 선호하는 요인 조작 및 스터드의 핵심 분자 도구로 모노 사이토 제네스숙주 세포 기능의 Y. 리스테리아 속에서 무독성의 존재 (L.의 innocua)과 악성 (L. monocytogenes에) 종 비교 게놈 연구 ⁸ 도로를 포장하는, 함께 완전한 L.의 최근 설립과 함께 모노 사이토는 L.의 진화에 대한 우리의 이해를 증가, ⁹ 사체 인간 병원체 등의 감염을위한 모델 시스템으로 모노 사이토는 ^{10 연구.}

L. monocytogenes에 자신의 숙주 세포 수용체 각각 E-cadherin의와 메트로, ^{11 ~ 12과} 박테리아 표면 단백질 InlA 및 InlB의 상호 작용에 따라 숙주 세포로의 내면화를 유도한다. 초기 후보 기반 연구의 InlB – 중요한 음향과 InlA 침략의 통로 ^(13)와 phosphoinositide 3 – 키나제 (PI 3-K)의 중요한 구성 요소로서 α / β의 catenins – 굴지 링크의 식별에지도 의존 침공 casca데 ^{14 ~ 15.} 프로테오믹스 및 기능 기반의 분석 이후에 허용 된 새로운 골격 요소 ^(16)와 숙주 세포의 침공에 필요한 지질 두 번째 메신저 ^(17)의 식별. 전사 연구 ^(18)와 질량 분석 기반의 정량 프로테오믹스 ^(19)는 최근 호스트 신호 폭포의 활성화와 L. 동안 면역 반응의 억제에 관한 새로운 빛을 발산했다 감염 모노 사이토 겐. 시스템 생물학은 작은 간섭 RNA에 의한 유전자 (kinomes, 전체 게놈)의 큰 세트의 불 활성화에 기반 접근 (siRNA의) 침묵은 최근 식균 작용을 포함한 특정 세포 기능의 컨텍스트에서 폭포 신호 글로벌 호스트의 분석을위한 새로운 길을 열고있다 병원체 내면화 ^20. 게놈 전체의 siRNA 화면은 이전에 L.의 감염에 필요한 세포의 계곡을 조사하기 위해 수행 된 식세포 초파리 모노 사이토 제네스 </em> S2 세포를 ^{21 ~ 22} 만, 이러한 유형의 분석은 비 식세포로 수행되지 않은, 생체 내에서 감염을위한 중요한 표적을 나타낸다.

우리는 L.에 의해 감염의 후반 단계의 현미경 검출을위한 프로토콜을 최적화 한 상피 세포 내 세균 항목의 높은 처리량의 siRNA 연구에 적합 모노 사이토 제네스. 우리의 분석은 매우 침습적 L. 활용 PRFA, L.의 주요 전사 조절에 점 돌연변이를 제시 변형 모노 사이토 겐 독성이 ^{6 요인} 리스테리아 모노 사이토 겐 (PRFA * 이름)이 돌연변이는 ²³ PRFA는 구조적으로 활성 렌더링 때문에, 그렇지 않으면 제대로 감염된 비 식세포의 세균 항목을 호의를 침공 단백질 InlA 및 InlB의 발현 증가로 연결됩니다. 감염에 대한 우리의 판독은 분비 된 세균의 단백질 InlC의 세포질 축적의 검출을 기반으로이 분자는내 세포질 L.에 의해 우선적으로 발현되는 형질 발현 이펙터 모노 사이토 ⁹ 참여는 박테리아 세포에 세포 ^24를 전파뿐만 아니라, 호스트 면역 반응 ^25을 변조하는뿐만 아니라. 세포 내 세균에 의해 InlC 분비의 형광 표시가 명확하게 감염되지 않은 세포에서 감염과 구별 할 수 있지만, 또한 엔드 포인트 이후의 여러 단계에서 감염을 해부하는 데 사용할 수있는 판독 나타냅니다뿐만 아니라 : 항목, 액포 탈출, 세포 내 세균을 증식과 세포 간 확산. 이 현미경 기반 프로토콜 따라서 L. 의한 숙주 세포의 감염에 관련된 세포 경로를 연구하는 siRNA를 스크린에 연결될 수있다 모노 사이토 제네스.