실험 인간 폐렴 운송은 운송 자연 모델과 백신 개발에 사용할 수있는 잠재적 인 모델을 제공합니다. 이 기술은 가치가 아직 복잡하고 인간에 병원균을 도입하여 임상 위험을 가지고 있습니다. 우리는 자세한 프로토콜을 개발했습니다.
연쇄상 구균 pneumoniae의 nasopharyngeal 운송은 전송의 주요 소스 및 침입 질병의 전제 조건을 모두이기 때문에 실험 인간 폐렴 운송 (EHPC)은 과학적으로 중요합니다. 운송 모델은 보호 면역 상관 관계의 정확한 결정, 운송 immunizing 효과 nasopharyngeal 틈새에있는 병원균에 대한 호스트 압력의 영향을 수 있습니다. 또한, 백신 연구 등의 역학 연구에 유용한 운송 검출의 방법은, 비교할 수 있습니다.
목적
우리는 백신 유도 면역의 대리로 캐리지의 예방과 다운 선택 후보 소설 폐렴 백신에 사용될 수있는 안전하고 유용한 재현 방법입니다 EHPC 플랫폼을 개발하는 것을 목표로하고 있습니다. 이 EHPC와 carria에서 백신 보호의 근간이 메커니즘 후보 백신 및 설명 시험으로 작동합니다GE 1. 새로운 백신이 현재 백신이 아닌 bacteraemic 폐렴에 대한 최적의 보호를 부여하지 않는 한 긴급 필요 및 비 백신 serotypes 2-4로 혈청 형 교체의 증거가되었지만 pneumococcus에 대한 현재 켤레 백신은 침략 질병의 어린이를 보호합니다.
방법
우리는 S.와 예방 pneumoniae는 생리 100 μl에 일시 중지되었습니다. 안전 EHPC 모델의 개발에 중요한 요소이며 집중적 인 자원 봉사 검사 및 모니터링을 통해 달성된다. 임상 및 연구에서 독립적 과학자들로 구성된 안전위원회는 주 단위로 목표 피드백을 제공합니다.
세균 inoculum은 표준화되어 있으며 동물 제품은 자원 봉사자 (야채 기반 미디어 및 생리)에 주사하지 않습니다 필요합니다. 식민 (10 4 -10 5)에 필요한 복용이 훨씬 낮은 THA 아르N 그이 (10 7) 동물 모델에 5를 사용했습니다. 폐렴 운송을 검출하는 것은 무료로 상대적으로 점액이 코 세척은 (이상적으로> 10 ML) 높은 볼륨에 의해 향상됩니다. 이 프로토콜은 차례 프로토콜의 가장 중요한 부분을 처리합니다. 이는 (a) 자원 봉사 선택, (B) 폐렴 inoculum 준비, (C) 접종 (D) 후속과 (E) 운송 감지합니다.
결과
현재 프로토콜은 두 개의 서로 다른 박테리아 serotypes 6을 사용하여 복용의 범위에서 100여 자원 봉사자에 안전했습니다. S.를 사용하여 용량 범위 연구 pneumoniae 6B와 23F는 현재 50 %의 운송을위한 최적의 접종 선량을 결정하기 위해 실시되고있다. 운송 예측 50 % 속도가 EHPC 모델은 작은 연구 번호가 백신 효능에 대한 높은 감도를 가지고 할 수 있습니다.
EHPC 플랫폼은 점막 백신 모델과 소설 단백질 백신을 테스트하기위한 보호 대리로 사용하는 등 잠재적 인 용도 수 있습니다. 방법은 일관성 접종 기술과 고품질의 NW에 따라 달라집니다.
재현성은 inoculum에 문제가 될 수 있습니다. 냉동 세균 aliquots의 변수 특성 때문에, 그것은 원하는 용량을 복제 할 어려울 수 있습니다. 원하는 용량의 반턱이나 복제는 범위 내에서 간주됩니다. 이 박테리아 정량화가 정확하게 CFU 수에 의해 박테리아의 정량화를 결정하기 위해 접종 바로 이전 및 다음 수행 할 수 있다는 매우 중요합니다. 자원 봉사 약속이 발생하는 경우 이러한 이유로 단 한 inoculum가 준비 사전 접종과 그 후에 진행 정량화 도금이 떨어져 더 이상 30 분 발생 될 필요하는 동시에 매우 도움이 될 수 있습니다.
NW 방법은 coope가 필요합니다자원 봉사 및 배급은 어린이의 이상적인 방법은되지 않습니다. 수율이 덜 5 ML 경우, 절차는 별도의 20 ML까지 사용 반복 할 수 있습니다. 착용 틀니는 NW 수율을 줄일 수 있습니다. 자원 봉사자가 차단 / 혼잡 코를 가지고 있으며 생리가 삽입 후 anteriorly에서 실행중인 경우, 코를 풀다, 다시 조금 더 주사기를 삽입하고, 다시 더 필요한 경우 머리를 기울이십시오.
NW는 연습을 더 좋아 지기만하는 기법이다. 목적은 최소 10 ML의 반환하도록 일부 볼륨은 일반적으로 손실됩니다. 지원자는 NW 동안 생리를 맛볼 수 있다면 뒤 nasopharynx와 oropharynx 사이의 연결이 적절하게 자원 봉사의 혀에 의해 폐쇄되지 않았습니다. 지원자는 제비 생리의 대부분을 경우, 입의 지붕에 대한 혀의 밀어를 강조 다시 절차를 설명합니다. 그런 다음 볼륨이 반환 증가의 절차를 반복합니다.
NW는 substant가 포함 된 경우점액의 ial 양, 그것은 원심 분리 전에 제거하는 것이 가장 좋습니다. 소용돌이 점액에 바인딩 가능한 약간의 염분으로 제거하는 동안 다음 가능한 큰 조각을 제거 할 수 있습니다 아무것도 느슨하게을 줄 수있는만큼의 샘플.
미국의 이전 EHPC 연구가 안전하게 완료되며 불리한 이벤트 11이 없었다. EHPC 플랫폼의 지속적인 안전을 보장하기 위해, 우리는 연구 팀 24 시간 액세스를 기반으로하는 비상 프로토콜을 설정합니다. 자원 봉사자들이 하루의 연구 팀에 24 시간 액세스 할 수 있도록, 연락처 세부 정보를 제공하고 있습니다. 필요한 모든 의료은 로얄 리버풀 대학 병원에 제공됩니다. 보호의 추가 조치로서, 임상 및 연구 그룹 외부에서 과학자로 구성된 안전위원회는 주간 안전 보고서를받습니다. 이 보고서는 각 자원 봉사자가 접수 및 증상이나 질병이보고되었는지 여부를 세균 복용이 포함되어 있습니다. 이 보고서는 일의 안전을 할 수 있습니다전자 연구는 외부 바이어스없이 critiqued 할 수 있습니다. 안전위원회는 또한 비상 사태의 가능성이 행사에서 24 시간 사용할 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 빌과 멜린다 게이츠 재단 (SBG에 그랜드 챌린지 탐험 상), 건강 연구 (NIHR), 미생물 질병의 바이오 메디컬 연구 센터, NIHR 종합 지역 연구 네트워크의 국립 연구소에 의해 자금을 지원했다. 우리는 infrastructural 지원 NWDA을 인정합니다. 우리는 폐렴 분리에 대한 교수 J. N 버드 바이져, 펜실베니아 대학 교수 P Hermans, 네이 메헨 대학 감사드립니다. 사진을 찍을 대한 참여를위한 모든 자원 봉사자와 매튜 Bangert에 대한 그들의 지원과 조언 EHPC 안전위원회에 감사합니다.
Name | Company | Cat# |
Glycerol | Fisher | G/0650/08 |
0.9% Sodium Chloride | B. Braun | 3627667 |
Skim milk powder | Fluka | 70166 |
Tryptone soya broth | Becton Dickinson | 211768 |
Glucose | BDH | 284504S |
Columbia Agar with chocolated horse blood | Oxoid | PB0124 |
Pneumotest-latex kit | Statens Serum Institut | 51823 |