Новый метод для создания воспроизводимых<em> В естественных условиях</em> Модель травмы шейного отдела спинного мозга в рваной раны мыши описано. Этот метод основан на стабилизации позвоночника путем фиксации шейного граней и разрыв спинного мозга использованием колебательного лезвие с точностью ± 0,01 мм.
Использование генетически модифицированных мышей увеличивает наше понимание молекулярных механизмов, лежащих в основе некоторых неврологических расстройств, таких как травмы спинного мозга (SCI). Freehand ручным управлением используется для производства рваная рана модель ТСМ создает противоречивый травмы часто связаны с давку или ушиб компонентов и, таким образом, новый метод был разработан. Наша модель разрывы шейки SCI разрешил неизбежных трудностей с руки методом включения 1) шейных позвонков стабилизации позвоночного фиксации аспект, 2) усиление воздействия спинного мозга, и 3) создание воспроизводимых рваная рана спинного мозга использованием вибрирующий нож с с точностью ± 0,01 мм в глубину, не связанные контузии. По сравнению со стандартным методам создания SCI рваная рана руки, такие как использование скальпелем или ножницами, наш метод приводит к постоянному поражения. Этот метод полезен для исследования по регенерации аксонов из corticospИнал, rubrospinal и спинной возрастанию путей.
Наличие генетически модифицированных мышей является мощным инструментом для выявления воздействия конкретных генов, которые играют роль в механизмах ТСМ. Надрыв SCI является важной модели используются для изучения терапевтических агентов или молекул, которые могут обеспечить эффективное лечение после этой травмы 8. Фиксация остистых отростков во время создания рваная рана травмы у мышей является неточным в связи с трудностями в понимании тонких и хрупких остистых отростков участвовать в ведении фиксации спинного 5,11. Изменчивость в глубине разрывы только 0,2 мм (10% диаметра мыши спинного мозга) вызывает заблуждение интерпретации данных. Характер и степень повреждения спинного разрыв шнура должны быть точно определены 10. Для решения этой проблемы, мы разработали новый метод, состоящий из позвоночного стабилизации и использовали лезвия изготовлены, подключенные к системе аппарата Травма Луисвилл (LISA), чтобы произвести разрыв SCI 7,14. Эта травма была создана с помощью острого вибрирующий нож, что избежать деформации ткани во время процесса рваная рана. Глубина разрыв был точным с точностью до 0,01 мм с помощью микро-драйверов, которые управляют разрыв глубины. Режущие диски специально разработанный для конкретной формы и ширины, чтобы создать желаемый контур рваная рана 9. Мы демонстрируем 1) метод воздействия шейки позвоночника, 2) техника стабилизации позвоночного использованием двустороннего устройства фиксации грани, и 3) создание травмы шейного рваная рана помощью вибрирующих лезвий.
Стабилизации позвоночного до рваной раны травмы спинного мозга была получена фиксацию остистых отростков. Оба шейного отдела позвоночника лордотический кривой и крепления зажимов к рыхлые короткие шейки остистых отростков от С3 до T1 в мышь предотвратить эффективной стабилизации позвоночника. Кроме того, использование лезвия бритвы или microscissors использованы в ручном режиме вызывает значительные деформации ткани, которая создает изменчивость в глубину поражения 6. Это может привести к искажению данных, в частности при регенерации аксонов специфических путей изучается. Например, избавлены спинной аксонов кортикоспинальных может быть неверно истолкованы как регенерированный аксонов, если спинной кортикоспинальных тракта не была полностью перерезана во время lesioning. Эти проблемы могут быть преодолены с помощью устройства стабилизации позвоночника с фиксацией в граней на одном уровне и точное lesioning из спинного мозга. Кроме того, использование ахIGH частоты вибрирующий нож производит резкий разрыв без дробления или contusing соседних спинного мозга. Этот метод был использован для производства рваная рана спинного мозга у крыс травм 9,12,14, с последующими изменениями, чтобы произвести рваные раны грудного отдела спинного мозга в мышах 6. В настоящем сообщении мы опишем метод создания надежной поражениях шейки матки Разрыв в мышь.
Поскольку передне-задний диаметр спинного мозга <2 мм в мышь, точные глубины поражения рваная рана имеют жизненно важное значение в создании надежной экспериментальной модели. Минимальная изменчивость в глубину поражения существенно изменят результаты экспериментов оценки регенерацию аксонов, а также объемные и поведенческих исследований. Точность поражения глубины с использованием этого метода составляет ± 0,01 мм, потому что мы использовали высокой точностью микродиффузоры для управления положением режущего лезвия. Этот метод сократил непоследовательность вкогерентное в других моделях создания рваная рана ТСМ. Этот метод особенно полезен при изучении регенерацию аксонов длинного спинного мозга путей, расположенных в спинном половины спинного мозга, таких как корково-кишечного тракта, тракт rubrospinal и спинной восходящей тракта. С помощью этого метода, эти волокна трактов может быть полностью и надежно перерезана. В этом отношении, ошибки интерпретации данных сводятся к минимуму, что повышает надежность отчетности экспериментальных исследований по ТСМ.
Таким образом, мы описали новый метод для создания воспроизводимых в естественных условиях модель травмы шейного отдела спинного мозга в рваной раны мыши. Этот метод основан на стабилизации позвоночника путем фиксации шейного граней и рваная рана спинного мозга использованием вибрирующий нож. С помощью этого метода в спинной грудного отдела спинного модели рваная рана шнура у мышей 6 мы показали, тесная корреляция между глубиной рваная рана, гистологии иПоведение восстановления. Такой метод также было обнаружено, что надежный несколько других лабораторий 2,12.
The authors have nothing to disclose.
Развитие этого устройства была поддержана LISA Ко, Луисвилле, штат Кентукки. Мы также признаем, постоянной поддержке Нортон здравоохранения, Луисвилл, Кентукки, чтобы CBS и NS050243 NIH, NS052290 и NS059622 к XMX.
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | コメント |
Mice vertebral stabilizer | Louisville Impactor System | Stabilize and expose the cervical vertebra | |
LISA vibraknife | Louisville Impactor System | Produce the laceration injury of the cervical spinal cord | |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15013-12 | Skin and trapezius muscle incision |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15023-10 | Separate muscles from the laminae |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15002-08 | Incision of dura |
Graefe forceps | Fine Science Tools (USA) | 11154-10 | Retract skin |
Dumont #7 forceps | Fine Science Tools (USA) | 11274-20 | Muscle retraction (tip modified)(Fig. A) |
Dumont SS forceps | Fine Science Tools (USA) | 11203-25 | Fixation of vertebra (tip modified )(Fig.B) |
30G needle | Becton Dickenson | 305106 | Create a dural opening |
6-0 suture | Ethicon | 8806H | Close muscle and fascial layers |
wound clip | Fine Science Tools (USA) | 12031-07 | Skin closure |
Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | 90710-10G | Anesthetic agent |
Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail: cbshields1@gmail.com Fine Science Tools (USA), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail: info@finescience.com Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, USA, 63178 (314) 771-5765, E-mail: cssorders@sial.com |
|||
Figure A is the modified Dumont #7 forceps; B is the modified Dumont SS forceps. |