Хирургические процедуры для крысиной модели частичного ортотопической трансплантации печени с печеночной артериальной реконструкции

1. Основные методы и общие процедуры Все процедуры проводятся под чистым, но нестерильных условиях. После того, живота крыс открыт, все процедуры выполняются под операционным микроскопом при увеличении в 16х. Исключения составляют бывшие резекция печени живом организме, которая выполняется на 10x, а в следующем процедур, которые выполняются на 25x: введение стента в желчном протоке и печеночной артерии и реконструкции печеночной артерии, infrahepatic полой вены (IHVC) и желчных протоков. Ватные тампоны используют для нежной манипуляции органов, тупой диссекции тканей, и сжатие гемостаза. Марлевые тампоны (5 х 5 см), пропитанной раствором Рингера лактата используется, чтобы убрать печенью или кишечником, и держать органов влажной. Зажим Сатински могут быть использованы для отвода марли покрытые кишечника влево или хвост крысы расширения операционного поля вокруг IHVC. Все перевязки выполняются с 6-0 шелковые нити, за исключением ножек печени долей в бывших естественных условиях резекции печени, где 4-0 шелковые нити используются. Лигатура может быть, запряженных зажим Дебейки бульдог или другие инструменты для обеспечения адекватной напряженности в лигированную точку, так что вторая лигатура может быть сделано на расстоянии до первого, и разделение между двумя точками лигированную может быть сделано должным образом. Все внутривенные инъекции выполняются через вену полового члена. В ходе реконструкции процедур для suprahepatic полой вены (SHVC), воротной вены, печеночной артерии и желчных протоков, небольшой кусок масла на основе глины используется для удержания пальца кольцо периферического сосудистого зажима или комар щипцы , чтобы держать их зафиксировано. 2. Предоперационной подготовки Самцов крыс Lewis весом от 230 до 250 г используют в качестве доноров и реципиентов для трансплантации печени. Крысы всезадолженность свободный доступ к воде и пище до вводного наркоза. Манжеты для воротной вены (рис. 1): Подготовка манжеты для воротной вены путем разрезания 14-калибровочного катетера № 11 лезвие скальпеля под микроскопом. Манжета состоит из тела и расширения, каждый из которых имеет длину 2 мм. Сделайте круговые канавки на манжете путем закрепления стенки манжеты шаг за шагом окружности с комарами щипцы так, что поток может быть закреплен жестко на манжете без соскальзывания. Стенты для желчного протока и печеночной артерии (рис. 1): Cut 24-калибровочного катетера с помощью скальпеля под микроскопом, чтобы производить фаски на обоих концах катетера длиной 4 мм, для печеночной артерии и 5 мм для желчных протоков . 3. Донор операции Схема удаления печени от донора крысы показано на рисунке 2. Эта процедура требует околомерно 30-35 мин. Anesthetize крыс при вдыхании 4 об% изофлурана в 100% кислорода при расходе 4 л / мин для индукции анестезии, и 1,5% по объему в 2 л / мин для технического обслуживания. Inject бупренорфин (0,1 мг / кг) подкожно в качестве обезболивающего средства. Положите крысу на грелку, и исправить плеча с помощью магнитного фиксатора система отвода (рис. 3а). Бритье мех со всей области живота крыс, и стерилизовать соответствующий кожи с повидон-йод раствор. Откройте живота срединный разрез с двусторонними расширения. Поместите в 5-мл шприца под задней крыс, так что SHVC поднимается снизу. Использование комаров пинцет, зажим и потяните мечевидного отростка к голове, и применить подреберье преднатяжителями для открытия операционного поля (рис. 3а). Рассекать связки серповидной и левой треугольной связки. Далее, перевязывать и разделим левую диафрагмального вены. Загружатьдействовать средней и левой боковыми лопастями вверх с мокрым тампоном марлю. Использование биполярных щипцов, коагуляции и разделить пара-пищевода судов между левым боковым и передним хвостатой доли. Переместить кишечника за пределами брюшной полости на левой стороне крыс, и покрыть их мокрой марлей тампоном. Уберите правой боковой доли вверх с мокрым тампоном марлю. Изолировать IHVC из забрюшинного ткани, и перевязывать правую надпочечников вену, которая будет разделена позже как раз перед трансплантата удаления. Чтобы вставить стента в желчном протоке (рис. 3б): Лигируют желчных протоков на уровне разветвления гастродуоденальной артерии. Мягких тканей, окружающих желчного протока должна быть сохранена как можно больше, и отделение желчного протока от печеночной артерии следует избегать, чтобы обеспечить достаточное артериального кровоснабжения желчного протока. С прямыми микро-ножниц, сделать небольшой разрез в ANTERIили стенки желчного протока проксимальнее лигированную точки. Удерживая переднюю стенку разрез с прямой микро щипцы в левую руку, вставить стент в воздуховоду с помощью изогнутого микро щипцы в правой руке, и закрепите его с 6-0 шелковые нити. Один из разреза концы нити на желчных протоках содержится в длину 4 мм, так что поток может быть проведен в течение позднее анастомоза. Освободить от воротной вены привратника и селезеночной вен путем лигирования и делением их. Лигируют и разделить гастродуоденальной артерии, затем изолировать общей печеночной артерии (CHA) от головки поджелудочной железы к своему корню. Поверните печени вправо с ватными тампонами, и рассекать связки вокруг задней части печени и пищевода. По завершении подготовки к печени иссечение, удаление преднатяжителями, комар, щипцы для мечевидного отростка, и 5-мл шприц в заднюю часть крысы. Вернуться кишечника в abdominaл полости. Inject 500 МЕ гепарина-натрия в 2 мл физиологического раствора через вену полового члена. Около 3 минут позже, сбросить 5-мл шприц, пинцет комаров, и преднатяжителями. Лигируют ЦДХ проксимальных к своему корню. Держите один разреза концы нити лигировали для ЦДХ долго. После зажима IHVC ближе к правой почечной вены с комарами пинцет, зажим воротной вены с одноразовой микро зажим судна ниже культи селезеночной вены. Надрезать передней стенки воротной вены, а затем вставьте 18-калибровочного катетера в воротной вене. Заливать печени в месте с 60 мл холодной гистидин-триптофан-КГ (НТК) раствора при гидростатическом давлении 20 см H 2 O. Сразу после этого, сократите диафрагму и секут внутригрудных полой вены, а также сокращение передней стенки IHVC открытым, чтобы позволить перфузии решения должны быть смыты печени (рис. 3в). Зажмите IHVC с ди-sposable микро судна зажать чуть ниже печени. Акцизный печени путем вскрытия IHVC чуть ниже средней точки между печенью и правой почечной вены, воротной вены ниже культи селезеночной вены, диафрагмы, остальные связки в задней части печени, надпочечников права вены, и в ЦДХ на корню. Поместите вырезали печень в холодный раствор HTK в металлическую чашку установлен в пластиковой коробке полный колотый лед. 4. EX VIVO Graft подготовка Все процедуры для печени трансплантата выполняются в металле чашу с ледяной решение HTK. Экс подготовки трансплантата естественных условиях требуется около 30 мин. Для крепления манжеты к воротной вены (рис. 4): Зажмите портала ствол венозная с зажимом Дебейки бульдог. Поместите зажим в преодолении положение над чашей (рис. 4а, б). Положить воротной вены через манжету, и зажимворотной вены снова вместе с расширением манжеты на 12 часов (рис. 4в). Эверт стенки воротной вены через манжету в положение культи селезеночной вены вне манжеты на 7 часов (рис. 4г), а также обеспечить воротной вены с 6-0 шелковые нити (рис. 4e) . Чтобы вставить стент в печеночную артерию (рис. 5): Исправить печени, зажимая оба края диафрагмы щипцы, и вытащить ЦДХ прямо, удерживая нить с перевязанной Дебейки бульдог зажим (рис. 5а). С прямыми микро-ножниц, сделать небольшой разрез в передней стенке ЦДХ. С левой рукой, держа передней стенки разреза с прямой микро щипцы, и с правой стороны, вставить стент в ЦДХ помощью изогнутого микро щипцы. Стент предварительно промытого Гепарин-натрий раствор (100 МЕ / мл) (рис. 5, б-г). Secure стентов с 6-0 шелковые нити, и сохранить одну из разреза концы нити при длине 4 мм. Промыть печень через артериальный катетер с 5 мл холодного раствора HTK. Для 50% резекции печени (рис. 6): Зажим задней доли хвостатого с комарами щипцы, чтобы исправить ее на месте. Резекции доли после перевязки его ножки с 4-0 шелковой нити (рис. 7а). Таким же образом, удаление передней доли хвостатых. Поверните пластиковые окна 90 градусов. Зажмите правый край диафрагмы и левой части средней доли. Сделайте небольшой надрез на верхнем краю границы двустороннего части средней доли, а затем удалить левую часть после перевязки (рис. 7б). Снимите левый боковой лопасти после перевязки ножки с 4-0 шелковой нити. Прижигание поверхности удаленной печени осторожно пинцетом биполярным. В результате, печень масса уменьшается наpproximately 50% 15 (рис. 7, г). Для пластики SHVC (рис. 8): Исправить положение печени, зажимая оба края диафрагмы с комарами щипцы (рис. 8а). Обрежьте переднюю стенку SHVC, удалив соответствующие диафрагмы. Прикрепите две 7-0 швов полипропилена от внешнего к внутреннему на обоих углах, как остаться швов для последующей анастомоза (рис. 8, б). Затем обрезать задней стенки SHVC. Хранить трансплантата печени при 4 ° С в HTK решение в холодной воде ванны. 5. Получатель операции Схема трансплантата имплантации в получателем крысы показано на рисунке 9. Получатель операции требуется 60-70 мин, который включает в себя 10-11 мин беспеченочного времени и примерно 23-24 мин IHVC зажима времени. Выполните те же процедуры, что и в DOни операция (3,1 на 3,4), за исключением открытия живота срединный разрез, без расширения двустороннего (рис. 10а). Поместите мокрой марли тампон на правой стороне двенадцатиперстной кишки и кишечника целом для получения операционного поля вокруг IHVC. Положите левую боковую и средней долей в левом поддиафрагмального полости, и отказаться от правой боковой доли вверх с мокрым тампоном марлю. Изолировать IHVC из забрюшинного ткани. Лигируют и разделить право надпочечниковой вены (рис. 10б). С мокрых тампонов марли и хлопок, повернуть печень слева, и рассекать связки вокруг задней части печени. Вернуться правой боковой доли в анатомическом положении. Поместите мокрым тампоном марлю, чтобы накрыть крышкой и убрать средней и левой боковыми лопастями вверх. Разрез желчных протоков чуть ниже ответвления от хвостатой доли. Мягких тканей, окружающих желчного протока должна быть сохранена как можно больше. Держите один разреза концы йчитать лигировали для желчных протоков на 4-х мм. Лигируют и разделить гастродуоденальной артерии и надлежащее печеночной артерии в 3-мм расстояние до отходит от ЦДХ. Тогда, чтобы Y-структуры артерии в конце ЦДХ. Держите один разреза концы нити лигировали для надлежащего печеночной артерии на 4-х мм. Поверните печени вправо с ватными тампонами, и рассекать связки вокруг задней части печени с левой стороны. После внутривенного введения 2 мл раствора Рингера лактата, зажмите IHVC с металлическим зажимом микро судно чуть выше правой почечной вены. Зажмите воротной вены на уровне ее бифуркации в печени рубчика от комаров щипцы с левой стороны крысы. Зажмите SHVC вместе с диафрагмой с правой стороны от периферического сосудистого зажима, и исправить палец кольцо зажима в кусок масла на основе глины. Уменьшить анестезии изофлураном до 0,4% по объему в беспеченочного времени (продолжительностьиз пережатие воротной вены). Акцизный получателя родной печени путем вскрытия SHVC, воротной вены, и IHVC на следующих уровнях: SHVC, на границе между SHVC и печень, и воротной вены, чуть выше челюсть комаров щипцы, и IHVC, чуть ниже средней точки между печенью и правой почечной вены (рис. 10). Поместите печень трансплантата ортотопически. Для анастомоза SHVC непрерывным швом (рис. 11): Использование изогнутых микро щипцы в левую руку во время наложения швов процедуры для захвата стенки сосуда или проведение сшивания иглой. Во-первых, место пребывания шва на получателей SHVC изнутри наружу с помощью прилагаемого 7-0 полипропилена в правом углу трансплантата следует, завязывая узел (или вы можете связать это ведь ушивание процедуры полного). Далее, поместите второй шов пребывание таким же образом на левом кукурузыэ-э, которая станет отправной стежок швом. Для расширения анастомоза, понять и поддерживать швов использованием Дебейки бульдог зажимы на обоих углах с нежной тяги superiolaterally (рис. 11а, б). Пирс шов в левом углу через стену на трансплантат стороны от внешнего к внутреннему близко к узлу снаружи, и зашить задний ряд SHVC intraluminally с 7 на 8 стежков в правом углу (рис. 11в). Сделать первые несколько стежков так тщательно, что внутри люмен сталкиваются друг с другом. В правом углу, проколоть 7-0 полипропилена через сосуд на трансплантат стороны наружу. Далее, шов переднего ряда снаружи, справа налево, при этом около 10 петель (рис. 11d). До завершения переднем ряду, промыть изнутри лактата раствор Рингера для удаления пузырьков воздуха. Сделать последний стежок на переднем ряду, как близко, какВозможно проживание шов в левом углу, а затем связать их вместе. Для реконструкции воротной вены с помощью манжеты технике (рисунок 12): Уберите средней и левой боковых лопастей вверх с мокрым тампоном марлю. Зажмите вены получателя портала на своем слиянии с пилорического вены с помощью одноразовой микро зажим судно с правой стороны. Исправить комаров щипцы, что зажимы воротной вены в глине, и вытащить кончик пинцетом к печени рубчик (рис. 12а, б). Надрезать передней стенки воротной вены прямо под челюстью комаров щипцов. Вымойте внутри вены получателя портала и манжеты с раствором Рингера лактата. Держите передней стенки разреза с прямой микро щипцы в левую руку и расширение манжеты с изогнутым пинцетом микро в правой руке. Вставьте манжету в воротной вены получателя глубоко, и закрепите его с помощьюокружной 6-0 шелковые нити (рис. 12, в-е). Отпустите зажимы воротной вены и SHVC, а затем reperfuse печени. Снимите 5-мл шприц с задней крысы, и увеличение концентрации изофлурана до 0,8% об. Для восстановления печеночной артерии стентов методика 16 (рисунок 13): Во-первых, держать нити получателей надлежащее печеночной артерии от комаров щипцы с левой стороны и потяните ее на воротах печени, а затем зажать получателя ЦДХ с правой стороны близки к поджелудочной железе (рис. 13а). С прямыми микро щипцы, делают небольшой разрез в области бифуркации Y-структуры в конце получателя ЦДХ, чтобы раструб. Держите стент помещен в ЦДХ трансплантата с изогнутыми микро щипцы. После мытья каждый просвет с Гепарин-натрий раствор (100 МЕ / мл), сдвиньте стента в повторнойcipient ЦДХ и закрепите его с 6-0 шелковые нити. Привяжите один конец этой темы на получателя ЦДХ и 4-мм резьбой на трансплантат ЦДХ вместе, так что обе час ближе друг к другу с пониженным напряжением сайте анастомоза (рис. 13б). После этого отпустите зажим. Для анастомоза IHVC непрерывным швом (рис. 14): Анастомозирует таким же образом, как и для SHVC, но и использовать более тонкие стежки с укусом (рис. 14а-г). Связывание швов в последний стежок может быть устранен, или связывание может быть выполнена с фактором роста, чтобы избежать стриктуры анастомоза вызвано связывать слишком сильно. После освобождения зажима, повышают концентрацию анестезии 1,0% об. Если анастомоза выглядит стенотических, расширяются анастомоза сайте, потянув за двусторонние швы пребывания или расширение переднего ряда осторожно, чтобы расширить анастомоза. Администрирование 0,5 мл 8,4% гидрокарбоната натрия Solutioп с 1,0 мл раствора Рингера лактата внутривенно. Нанесите небольшие фрагменты Tachosil для герметизации поверхности удаленной печени, чтобы предотвратить кровотечение и желчных утечки. Для реконструкции желчных протоков с помощью стента техники: Держите нить желчных протоков получателя, комаров щипцы с левой стороны. Исправить комаров щипцами в глине, и вытащить кончик пинцетом к печени рубчик. Сделайте небольшой надрез в желчном протоке на соответствующем уровне, так что реконструированный желчных протоков не было бы слишком долго. Вставьте стент помещен в трансплантат желчных протоков в получателем канала с осторожным вниманием, чтобы избежать судьбы, и закрепите его с 6-0 шелковые нити. Свяжите эту тему на канал получателя и 4-мм резьбой на трансплантат канала вместе, так что оба каналы ближе друг к другу с пониженным напряжением сайте анастомоза. На завершение реконструкции процедуры, вводят 1 мл 5% раствора глюкозы внутривенно (рис. 15). Подтвердите адекватного гемостаза, а затем закрыть разрез брюшной стенки непрерывным 4-0 Викрил швов в два слоя. 6. Послеоперационное лечение и последующая деятельность Сразу же после операции, лечения получателя крысы с подкожной инъекции цефуроксима натрия (16 мг / кг) и бупренорфин (0,1 мг / кг) в общей сложности 1,5 мл физиологического раствора. Дайте крысе восстановиться в течение 60 мин в специальной клетке интенсивной терапии с нагретого воздуха (30-35 ° C) и кислорода. Inject бупренорфин (0,1 мг / кг) подкожно в качестве обезболивающего каждые 12 часов в течение 3 дней. После перемещения крысы к нормальной клетке, а также обеспечить вволю доступ к воде и пище.