Производство и использование контрейлерные Multibarrel Электроды для<em> В естественных условиях</em> Фармакологические манипуляции нейронных ответов

Потяните стеклянные электроды Потяните стеклянных электродов Потяните один электрод баррель. Используйте одно стекло стволом капилляр с нитью и вытащить наконечник диаметром около 1-2 микрон, вал длиной 10-12 мм, и соответствующее сопротивление электрода около 12 МОм (в диапазоне 5-20 МОм) при измерении в 0,9% раствором хлористого натрия. Нижняя сопротивление электрода приведет к более фоновой активности и, следовательно, больше трудностей в выделении унитарных активности отдельных нейронов. Для снятия этого электрода можно использовать любой горизонтальной или вертикальной съемник либо с отоплением нитей или нагревательных спиралей. Потяните multibarrel электрода. Из-за гораздо большего диаметра multibarrel стекла и необходимость равномерного распределения тепла по всему multibarrel, мощный съемник с большим диаметром катушки отопление, отопление не нити, не требуется. Multibarrel пипетки должен быть вставлен в центр отопления нити с пО свяжитесь с нагревательной спиралью. Заметим, что помимо 5-бочка пипетки описанные здесь, 3-бочка или 7-бочка пипетки являются коммерчески доступными альтернативами. Вытяните стекло пипетки около 10 микрометров общем диаметре, или меньше. Чаевые будут разбиты на правильный диаметр в следующем шаге, поэтому точный размер чаевых не столь важно во время тянуть процесс, чем общая форма кончик электрода, которая должна быть длинной и относительно тонкой. Обратитесь к изображению на рисунке 1С для желаемой формы кончика электрода. Короткие и короткие формы электродов (рис. 1б) вызовет значительное количество повреждения тканей при продвинулись в мозг, в то время как очень длинные и тонкие формы электродов (рис. 1А) будет изгибаться и, следовательно, будет трудно сломать кончик электрода к правильному диаметр (см. шаг 2). Изменить электрода Советы Изменить электрода советы. Перед двумя электродами могут быть склеены, Они должны быть изменены. Вал одного электрода должна быть согнута прежде чем он может быть присоединен к multibarrel, чтобы убедиться, комбинированные вал готовой контрейлерные электрод как можно тоньше. Кроме того, кончик электрода multibarrel должна быть прерваны для обеспечения низкого сопротивления для ионофореза. Изгиб вала одного электрода баррель примерно на 20 градусов. Используйте наименьшее пламени горелки Бунзена возможно. Типичный "малый" Бунзена горелки из стандартных сбытовых компаний создают лабораторию пламени, размеры которых слишком велики для этого приложения. Чтобы обойти эту проблему использовать наименьшее коммерческих горелку и закрепить иглу шприца (~ 18 калибра) в верхней части горелки, и запечатать соединение с помощью стоматологического цемента. При работе, пламя должно быть трудно увидеть, около 5 мм или меньше в диаметре и около 8 мм в высоту. Любое движение воздуха в помещении будет потушить это пламя, так что это хорошая идея, чтобы работать с горелкой взакрытом помещении, или использовать ветер щиты. Перемещение одного электрода баррель через пламя согнуть ее примерно на 20 градусов. Цель иметь пламени горелки расплавить стекло в переходной зоне около 10 миллиметров от торца электрода. Чтобы избежать плавления конца электрода мы полагаем, что электрод проводится при температуре около 45 градусов, острием вниз, и переместите электрод через пламя довольно быстро. Оторвать кончик электрода multibarrel. Для обеспечения визуального контроля, ломая кончик электрода, с помощью микроскопа с минимальным 10x и 10x цель окуляров. Измерительная шкала установлена ​​в глазной также будут необходимы для измерения размеров чаевых. Прикрепите кусок оргстекла в микроскоп так, что к концу оргстекла можно увидеть примерно в одной трети до половины поля зрения микроскопа. В нашем случае, оргстекла кусок примерно 25 х 70 мм и толщиной 5 мм и прикрепленные с помощью винтов, которые могут быть закреплены в пользовательскомсделал нить в микроскоп. Это важно иметь дизайн, который позволяет оргстекло движущегося независимо от слайда. Поместите multibarrel электрода в слое формовочной глины на предметное стекло и вставить слайд, содержащий электрод в держатель слайдов микроскопа сцены. Использование ху столике микроскопа в манипуляторами, осторожно двигаться кончик электрода против оргстекла кусок, и наблюдать за нарушение кончик через окуляры микроскопа. Попытка чисто сломать кончик multibarrel на совокупный диаметром около 25-35 мкм. Удалите пипетки с диаметром кончика, что прервался слишком большой или советов с неровными перерывов. Отбросим около 30% наших multibarrel электродов в связи с нежелательными формами чаевых. Соберите контрейлерные электродов Соберите контрейлерные электрода. Позиция электродов. Удалить оргстекла часть, используемая в шаге 2,2 из микроскопа. Закрепить завершеноmultibarrel электрода в пластилин на предметное стекло, кончиком, направленным немного вверх. Указывая вверх будет иметь важное значение для шага 3.2, склейка из двух электродов. Советы, которые направлены вверх вызвать клей убежать от кончика, избегая склеивания электрода советы. Вставьте изогнутый ствол один электрод в держатель электрода на заказ микроманипулятора (рис. 2). Используя визуальную ориентацию, а затем микроскопических руководства, опустить один электрод баррель на multibarrel электрода. Один электрод должен быть снижен непосредственно в паз, образованный расположение 5 бочек с ее кончика выступающий кончик multibarrel чаевые примерно 5-10 мкм. При опускании одного ствола, внимательно наблюдать за угол, который образуется между двумя электродами. Для достижения наилучшего результата избежать любых углов, в котором указывают советы друг от друга, а, скорее, попытка снизить одного электрода на несколько совершенно параллельные или даже с его кончикакасаясь multibarrel во-первых, формирование расположение очень небольшое "клин". С одним наконечником баррель является очень гибкой, она будет сгибаться, когда один электрод опускается чуть дальше после того, как кончик достиг верхней поверхности несколькими электродами баррель, образуя чистый композитный наконечник, который имеет небольшое количество пружины построен в что помогает проведению советов вместе. Однако, если угол между одним стволом и multibarrel электрод слишком крутой (слишком много клина), пружины будет слишком высокой и согните вниз электродами. Клей электрода валов вместе. Клей валы из двух электродов вместе, используя цианакрилатного (суперклей). Поместите небольшую каплю клея на маленькой стороне плоской зубочистки и монтаж сенсорный электрод с клеем капли. Начало в позиции самых дистальных кончиков и постепенно двигаться зубочистку с клеем падение вдоль электродов валы к электроду советы. Использование слишком большого количества клея или нанесения клея тоо близких к электроду советов приведет к склеивания электрода отверстия, что делает электрод крайней мере, частично нефункциональные. Стабилизация совместно с зубным цементом. Смешайте небольшое количество зубной цемент и стоматологических акриловых в небольшой одноразовой пластиковой посуды или вес лодки, с помощью плоской зубочистки. Подождите, пока цемент становится формовочной и нанесите небольшое количество на стыке между двумя электродами, для стабилизации сустава (розовый материал на рисунке 3). Разрешить около 15 минут, чтобы высохнуть. Удалите и храните электрод. Аккуратно снимите завершена контрейлерные электрода первым из микроманипулятора держателя, а затем отсоединить от стекло, и в магазине в пыленепроницаемый контейнер. Подготовка электродов Fill решения Подготовка электрода заполнения решений. Так как ионофорез требует заряженных молекул, большинство агентов должны быть распущен в кислой или щелочной среде (как правило,та рН около 3-4, или рН около 8-10, соответственно). Количество химических веществ, которые часто используются в ионофорез приведены в таблице 1. Для агентов, которые не указаны в таблице, определить по значению рКа, будет ли она проще в использовании молекул в кислой или щелочной среде, чтобы сохранить молекулы заряжены, и растворить соответственно. Для достижения наилучших результатов, смешать все свежие решения каждый день. Заполните и подготовка электродов Заполнить и подготовки электродов. Непосредственно перед использованием электродов, бэк-заполнить каждую бочку с соответствующим препаратом, с помощью углеродного волокна 28 – 34 калибровочных иглы прикреплен к шприцам с шприц фильтры. Заполните 4 внешних баррелей 5-бочка конфигурации с препаратами выбора, и центр бочки с 3М NaCl в качестве уравновешивающего баррель. Заполните один электрод записи бочку с 3М NaCl, а также. Добавление красителя в раствор NaCl, таких как быстрый зеленого или красного фенола будет легче увидеть кончик электродапри размещении электродов на поверхности мозга. Вставьте электрод в держатель электрода в настройки записи и вставить все провода в соответствующие баррелей стекла. Используйте изолированные серебряной проволоки, из которых около 1 см изоляции была удалена на конце. Там должно быть 5 проводов для multibarrel электрода (4 наркотиками баррелей и один балансировка баррель), а также усилитель провод, который должен быть вставлен в записи одного электрода баррель. Включите модули Ионофорез насоса Включите модули ионофорез насос и проверить все баррелей. Электродной функции проверки каждого насоса модуль поможет определить, если электрод баррель является функциональным. Для предотвращения утечки наркотиков из бочек, когда он не используется, удержание напряжения в противоположную полярность молекулы заряд должен быть применен.