概要

과립에 따라 달라 Autoantibody 유발 피부 젖어

Published: October 12, 2012
doi:

概要

콜라겐 VII 200 아미노산 (AA 757-967)의 스트레치에 대한 IgG 항체를 정화, 우리의 현재 작업에 설명 된 동물 모델에서 젖어 표현형뿐만 아니라 인간을 특징 조직을과 immunopathological 기능을 재현 마우스에 반복적으로 주입 아르 epidermolysis bullosa acquisita (EBA)<sup> 1</sup>.

Abstract

자가 면역 현상은 건강한 개인에서 발생하지만, 자기 내성이 실패하면 면역 반응은 특정 병리 될 수 있습니다. 에 따르면 Witebsky의이 면역으로 질병을 진단하는 기준 중 하나를 여긴다는 autoantibodies의 수동 송금을 통해 실험 동물의 질병의 재현입니다. epidermolysis bullosa를 들어 acquisita (EBA), 피부와 점액을 분비하는 세포막의 prototypic 기관이 특정 면역 질환은 여러 실험 모델은 최근에 설립되었다. 콜라겐 VII 200 아미노산 (AA 757-967)의 스트레치에 대한 IgG 항체를 정화, 우리의 현재 작업에 설명 된 동물 모델에서 젖어 표현형뿐만 아니라 인간을 특징 조직을과 immunopathological 기능을 재현 마우스에 반복적으로 주입 아르 EBA 1. 본격적인 확산 질환은 보통 첫 번째 주사 후 5-6일 볼과 질병의 정도는 관리 C의 복용량과 상관 관계있다ollagen VII 특정 IgG. 실험 EBA의 조직 손상 (물집 형성)은 -4 조직에 바인딩 autoantibodies 2에 의해 과립 성 백혈구의 모집 및 활성화에 따라 수 있습니다. 모델이 efferent 면역 반응은 T 세포 독립적 인 위상을 재현 그러므로,이 모델은 면역 조직 손상에 참여 과립에 의존 염증 경로의 해부 할 수 있습니다. 또한, 그 값은 생체에 autoantibodies의 물집을 유발하는 잠재력을 입증하고 EBA 1,3, -6에 물집 형성의 메커니즘을 조사 연구 수에서 빨간 밑줄이 있습니다. 마지막으로,이 모델은 크게 autoantibody 유발 질병의 새로운 항 염증성 요법의 개발을 촉진합니다. 전반적으로, EBA의 수동 전송 동물 모델은 접근과 유익 질병 모델 및 연구자 EBA의 pathogenesis뿐만 아니라 분석하는 것이 아니라 기본적인 생물학적 및 임상 답변을하는 데 도움이됩니다필수 autoimmunity 질문.

Protocol

1. 병원성 항체의 작성 참고 : 항체가 하룻밤 사이에 0.1 M 글리 산도 2.5-3 (용출 버퍼) (ON)에 저장 할 수 없기 때문에 정제 및 항체의 농도가 같은 날에 수행되어야합니다. IgG의 친 화성 정화 : 면역 토끼 혈청의 25 ML을 사용 : 4에 ON 토끼 혈청을 해동 ° C, 20 ° C.에 1xPBS (버퍼를 실행)와 그것에게 1:1 혼합 10 분에 1,260 XG에서 원심 분리기를 선택적 필터 ?…

Representative Results

임상 조직 학적 및 immunopathological 수준에서 인간의 EBA 닮은 마우스에서 전체 고장 질병의 항원 특정 항체 결과의 수동 전송됩니다. 수포, 빵 껍질, erosions과 탈모는 귀, 코, 손, 다리, 뒤로 생쥐의 눈 주변에 개발할 수 있습니다. 이 질병의 첫 번째 임상 증상은 대부분의 경우 귀 및 / 또는 머리 영역에 나타납니다. 특정 토끼 IgG 및 마우스 보완 C3의 증착은 IF perilesional 피부 cryosections의 피부 표피 교차?…

Discussion

실험 동물에 autoantibodies의 수동 전송은 pathogenicity 7, -12를 입증 할 주요 접근 방법입니다. 이 방법을 통해 얻은 동물 모델은 autoimmunity 13 간접적 인 증거 할뿐만 아니라, 병원성 메커니즘의 efferent 단계의 조사를 할 수 있습니다. epidermolysis bullosa acquisita (EBA)으로 젖어 항체 유발 과립에 의존 피부의 수동 전송 모델은 면역 dermatoses에서 조직 손상의 메커니즘을 해부하는 데 사용되었다…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

저자는 프라이 부르크 (Freiburg) 대학 (CS까지)의 의료 학부에서 독일 Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1과 BIOSS에서 교부금의 지원을 인정합니다.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number コメント
recombinant antigen The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author.
immune rabbit serum www.eurogentec.com We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium.
Protein G agarose Roche Applied Science 11243233001
Balb/c mice Charles River Laboratories
OCT compound, Tissue-Tek Sakura Finetek 4583 OCT, optimal cutting temperature
Cryomold standard Sakura Finetek 4557 25 mm × 20 mm × 5 mm
Cryomold intermediate Sakura Finetek 4566 15 mm × 15 mm × 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette R. Langenbrinck 09-0503 Histology processing and embedding cassettes
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG 71492000 tattooing paste
Tatowierzange TZ1 EBECO E. Becker & Co GmbH tattooing device
Heparin Carl Roth GmbH & Co. 7692.1
Formaldehyde 37% Carl Roth GmbH & Co. 7386
Ketamine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH K2753-1G
Xylazine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH X1251-1G
sterile PBS Biochrom L182-50
digital camera Nikon Coolpix 5400
Syringe driven filter unit 0.45 μm Millipore
Caliper Mitutoyo 7309 1667338 Farnell (distributor)
disease scoring sheet example enclosed

参考文献

  1. Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
  2. Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
  3. Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
  4. Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
  5. Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
  6. Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
  7. Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
  8. Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
  9. Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
  10. Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
  11. Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
  12. Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
  13. Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky’s postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
  14. Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
  15. Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
  16. Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
  17. Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).

Play Video

記事を引用
Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C. Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering. J. Vis. Exp. (68), e4250, doi:10.3791/4250 (2012).

View Video