概要

顆粒球に依存する自己抗体誘発皮膚水疱形成

Published: October 12, 2012
doi:

概要

VII型コラーゲンの200アミノ酸(aa 757から967)のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入され後天性表皮水疱症(EBA)<sup> 1</sup>。

Abstract

自己免疫現象は、健康な個体で発生しますが、自己寛容が失敗したときに、自己免疫応答が特定の病状になることがあります。によるWitebskyのは、自己免疫疾患などの診断の基準のいずれかを仮定すると、自己抗体の受動的伝達によって、実験動物における疾患の再生です。後天性表皮水疱症(EBA)、皮膚や粘膜の原型の臓器特異的自己免疫疾患のために、いくつかの実験モデルは、最近設立された。 VII型コラーゲンの200アミノ酸(aa 757から967)のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入されEBA 1。本格的な広範な疾患は、通常、最初の注射後5-6日見られ、疾患の程度は、投与されたCの線量と相関しているollagen VII-特異的IgG。実験EBAにおける組織損傷(ブリスター形成)-4組織結合自己抗体2によって顆粒球の動員および活性化に依存している。モデルは唯一の遠心性自己免疫応答のT細胞非依存位相を再現したがって、このモデルでは、自己免疫組織損傷に関与する顆粒球依存性炎症経路の解剖を可能にします。また、その値は、in vivoで自己抗体のブリスター誘導可能性を示すとEBA 1,3、-6における水疱形成のメカニズムを調査研究の数によって強調される。最後に、このモデルでは、大幅に自己抗体によって誘発される疾患における新たな抗炎症治療薬の開発を容易にするでしょう。全体的に、EBAの受動転送動物モデルがアクセス可能で有益な疾患モデルであると研究者はEBAの病因ではないだけを分析するのではなく、基本的な生物学的にも臨床的に答えるのに役立ちます本質的な自己免疫の質問。

Protocol

1。病原性抗体の作製注意:抗体は一晩0.1MグリシンpHは2.5から3(溶出バッファー)(ON)に格納されるべきではないとして精製と抗体の濃度は、同じ日に行われるべきである。 IgGのアフィニティー精製:免疫ウサギ血清25mlを使用します。 4でONウサギ血清を融解℃で、20℃で1xPBS(バッファを実行している)と、それを1:1で混合し、10分間1260 x…

Representative Results

マウスでは、本格的な疾患における抗原特異的抗体結果の受身伝達、臨床組織学的および免疫病理学的なレベルで人間EBA似ている。水疱、痂皮、びらん、脱毛症は、耳、鼻、足、脚、背中、マウスの目の周りに開発しています。病気の最初の臨床症状は、おそらく耳および/または頭部領域に表示されます。特定ウサギIgG、およびマウス補体C3の沈着は、IF病変部周囲の皮膚の凍結切片で真皮?…

Discussion

実験動物への自己抗体の受動的な転送は、その病原性7、-12を実証するための主要なアプローチです。この方法により得られた動物モデルは、自己免疫13の間接的な証拠であることに加えて、病原性機構の遠心性の相の調査を可能にします。後天性表皮水疱症(EBA)の膨れ抗体誘導性顆粒球依存皮膚の受動的伝達モデルは、自己免疫性皮膚疾患における組織損傷のメカ?…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

著者は、フライブルク大学(CSに)医学部からドイツ学術振興SI-1281/4-1とBIOSにからの補助金によって支援を認める。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number コメント
recombinant antigen The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author.
immune rabbit serum www.eurogentec.com We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium.
Protein G agarose Roche Applied Science 11243233001
Balb/c mice Charles River Laboratories
OCT compound, Tissue-Tek Sakura Finetek 4583 OCT, optimal cutting temperature
Cryomold standard Sakura Finetek 4557 25 mm × 20 mm × 5 mm
Cryomold intermediate Sakura Finetek 4566 15 mm × 15 mm × 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette R. Langenbrinck 09-0503 Histology processing and embedding cassettes
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG 71492000 tattooing paste
Tatowierzange TZ1 EBECO E. Becker & Co GmbH tattooing device
Heparin Carl Roth GmbH & Co. 7692.1
Formaldehyde 37% Carl Roth GmbH & Co. 7386
Ketamine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH K2753-1G
Xylazine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH X1251-1G
sterile PBS Biochrom L182-50
digital camera Nikon Coolpix 5400
Syringe driven filter unit 0.45 μm Millipore
Caliper Mitutoyo 7309 1667338 Farnell (distributor)
disease scoring sheet example enclosed

参考文献

  1. Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
  2. Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
  3. Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
  4. Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
  5. Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
  6. Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
  7. Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
  8. Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
  9. Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
  10. Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
  11. Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
  12. Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
  13. Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky’s postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
  14. Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
  15. Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
  16. Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
  17. Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).

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記事を引用
Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C. Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering. J. Vis. Exp. (68), e4250, doi:10.3791/4250 (2012).

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