概要

Granulocytes-dépendante boursouflures la peau induite par autoanticorps

Published: October 12, 2012
doi:

概要

Dans le modèle animal décrit dans notre travail actuel, purifié des anticorps IgG contre un tronçon de 200 acides aminés (aa 757-967) de collagène VII sont injectés à plusieurs reprises dans des souris reproduisant le phénotype des cloques ainsi que les caractéristiques de l'histo-et immunopathologiques caractéristiques pour la santé humaine l'épidermolyse bulleuse acquise (EBA)<sup> 1</sup>.

Abstract

Phénomènes auto-immunes surviennent chez des personnes en bonne santé, mais quand la tolérance au soi échoue, la réponse auto-immune peut entraîner une pathologie spécifique. Selon Witebsky postulats, l'un des critères de diagnostic d'une maladie auto-immune est que la reproduction de la maladie chez les animaux de laboratoire par le transfert passif d'autoanticorps. Pour l'épidermolyse bulleuse acquise (EBA), un prototype spécifique d'organe maladie auto-immune de la peau et des muqueuses, plusieurs modèles expérimentaux ont été récemment mis en place. Dans le modèle animal décrit dans notre travail actuel, purifié des anticorps IgG contre un tronçon de 200 acides aminés (aa 757-967) de collagène VII sont injectés à plusieurs reprises dans des souris reproduisant le phénotype des cloques ainsi que les caractéristiques de l'histo-et immunopathologiques caractéristiques pour la santé humaine EBA 1. Véritable maladie répandue est généralement considérée 5-6 jours après la première injection et l'étendue de la maladie est en corrélation avec la dose administrée de la collagen VII IgG spécifiques. Les lésions tissulaires (formation de bulles) dans le groupe expérimental EBA est en fonction sur le recrutement et l'activation des granulocytes par des tissus assortis autoanticorps 2, -4. Par conséquent, ce modèle permet la dissection de la voie de granulocytes-dépendante inflammatoire impliquée dans les lésions tissulaires auto-immunes, comme le modèle ne reproduit que la cellule T-indépendante phase de la réponse auto-immune efférente. De plus, sa valeur est soulignée par un certain nombre d'études démontrant le potentiel blister induisant des anticorps in vivo et étudier le mécanisme de la formation de bulles dans l'EBA 1,3, -6. Enfin, ce modèle va grandement faciliter le développement de nouvelles thérapies anti-inflammatoires dans les maladies provoquées par des auto-anticorps. Dans l'ensemble, le modèle de transfert passif des animaux de l'EBA est un modèle de la maladie accessible et instructif et aidera les chercheurs à analyser non seulement la pathogenèse EBA mais pour répondre fondamentale biologiquement et cliniquementdes questions d'auto-immunité essentielles.

Protocol

1. Préparation de l'anticorps pathogène Remarque: La purification et la concentration des anticorps doit être effectuée le même jour, que les anticorps ne doivent pas être stockés dans la glycine 0,1 M pH 2,5 à 3 (tampon d'élution) pendant la nuit (ON). La purification par affinité des IgG: utiliser 25 ml de sérum de lapin immunisé: Décongeler le sérum de lapin ON à 4 ° C, le mélanger 1:1 avec 1xPBS (tampon de migration) et cen…

Representative Results

Le transfert passif d'anticorps spécifiques d'antigènes résultats dans une maladie épanouie chez la souris, ressemblant à des niveaux cliniques, histologiques et immunopathologiques l'ABE humaine. Cloques, de croûtes, des érosions et alopécie se développer sur les oreilles, le museau, les pattes, les jambes, le dos et autour des yeux des souris. Les premiers signes cliniques de la maladie sera très probablement apparaître dans les oreilles et / ou de la zone tête. Le dépôt de spécifique IgG de…

Discussion

Le transfert passif d'anticorps chez des animaux de laboratoire est une approche importante pour démontrer leur pathogénicité 7, -12. Les modèles animaux obtenus grâce à cette méthode, en plus d'être l'une preuve indirecte de l'auto-immunité 13, permettre à l'enquête de la phase efférente du mécanisme pathogène. Le modèle de transfert passif d'anticorps induite par des granulocytes-dépendante la peau des cloques sur l'épidermolyse bulleuse acquise (EBA) …

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs tiennent à remercier le soutien par des subventions du SI-1281/4-1 Deutsche Forschungsgemeinschaft et ESBIO de la Faculté de médecine de l'Université de Fribourg (pour CS).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number コメント
recombinant antigen The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author.
immune rabbit serum www.eurogentec.com We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium.
Protein G agarose Roche Applied Science 11243233001
Balb/c mice Charles River Laboratories
OCT compound, Tissue-Tek Sakura Finetek 4583 OCT, optimal cutting temperature
Cryomold standard Sakura Finetek 4557 25 mm × 20 mm × 5 mm
Cryomold intermediate Sakura Finetek 4566 15 mm × 15 mm × 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette R. Langenbrinck 09-0503 Histology processing and embedding cassettes
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG 71492000 tattooing paste
Tatowierzange TZ1 EBECO E. Becker & Co GmbH tattooing device
Heparin Carl Roth GmbH & Co. 7692.1
Formaldehyde 37% Carl Roth GmbH & Co. 7386
Ketamine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH K2753-1G
Xylazine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH X1251-1G
sterile PBS Biochrom L182-50
digital camera Nikon Coolpix 5400
Syringe driven filter unit 0.45 μm Millipore
Caliper Mitutoyo 7309 1667338 Farnell (distributor)
disease scoring sheet example enclosed

参考文献

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記事を引用
Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C. Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering. J. Vis. Exp. (68), e4250, doi:10.3791/4250 (2012).

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