琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段

1。凝胶的制备称量烧瓶的琼脂糖适当质量。琼脂糖凝胶电泳准备使用AW / V比例解决方案。琼脂糖凝胶浓度的DNA片段的大小将取决于与大多数凝胶0.5％-2％之间不等，要分开。缓冲区的数量不应该超过1/3瓶的容量更大。 添加运行缓冲液的琼脂糖含瓶。涡流混合。运行缓冲区的最常见的凝胶栓塞（三醋酸40毫米，1毫米EDTA）和TBE（45毫米的Tris-硼酸，1毫米EDTA）。 融化的琼脂糖/缓冲液。这是最常见的微波炉加热，但也可以通过本生灯火焰。在间隔30秒，取出拌匀瓶和漩涡的内容。重复，直到琼脂糖完全溶解。 溴化乙锭（EtBr）可添加浓度为0.5微克/毫升。另外，也可能被凝胶染色后电电泳在运行缓冲液含0.5微克/毫升乙锭为15-30分钟，其次是在运行的时间长度相等的缓冲区脱色。 注：乙锭是一种可疑的致癌物，必须妥善处置每机构管理条例。处理凝胶含有ETBR时，应始终戴手套。可替代染料染色的DNA ETBR但仍然是最流行的一种，由于其敏感性和成本。 允许琼脂糖在65℃水浴中冷却，无论是在台式或由孵化。如果不这样做，将凝胶托盘变形。 凝胶托盘放到铸造设备。另外，也可能磁带凝胶的托盘，以创建一个模具的开放边。凝胶模具放到一个适当的梳子，以创建井。 倒入熔化的琼脂糖凝胶模具。让琼脂糖设置在室温。取出梳子和凝胶放置在凝胶中。另外，在GEL也可以被包裹在保鲜膜，并保存于4°C，直到使用（ 图1）。 2。设立仪器凝胶DNA片段分离添加载入染料要分开的DNA样本（ 图2）。凝胶上样染料通常由的6X浓度（0.25％，0.25％溴酚蓝二甲苯青，30％甘油）。装载染料有助于跟踪已走过多远，您的DNA样本，还允许陷入凝胶样品。 方案的电源供应器所需的电压（电极之间1-5V/cm）。 加入足够的运行缓冲液，凝胶覆盖面。重要的是要使用相同的运行缓冲液作为一个用于制备凝胶。 凝胶盒的导线连接电源。打开电源和验证，胶盒和电源工作。 取下盖子。慢慢地而谨慎地装载到凝胶的DNA样本（S）（ 图3）。一个相应的DNA大小标记应始终被载入随着实验样本。 更换凝胶盒的盖子。阴极（黑线）应该接近井比阳极（红色导线）。仔细检查，电极插入到正确的插槽电源。 接通电源。运行凝胶，直到染料迁移到适当的距离。 3。观察分离的DNA片段当电泳完成后，关闭电源，取出凝胶盒的盖子。 从凝胶中取出凝胶。从凝胶表面，排出多余的缓冲区。将凝胶托盘上的纸巾吸收任何额外的运行缓冲。 从凝胶托盘取出凝胶和暴露在紫外线照射下，凝胶。这是最常见的使用凝胶文件系统（ 图4）。 DNA条带应显示为橙色荧光带。采取的凝胶图片（ 图5）。 妥善处置每机构管理条例凝胶和运行缓冲区。 4。代表结果 图5表示一个典型的结果后，琼脂糖凝胶电泳PCR产物。分离后，所产生的DNA片段作为明确界定波段可见。 DNA标准或梯子应允许有用的样品带的大小确定，在一定程度上分离。在这个例子所示，765基点，880 bp和1022 bp的DNA片段的1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，连同2日志的DNA梯状条带。 图1。琼脂糖凝胶固化后去除梳子。 图2。样染料学生加入到她的DNA样本。 图3。学生装成凝胶以及DNA样本。 图4。凝胶文件系统的一个例子。 图5。凝胶后电泳图像。 ，ETBR被添加到凝胶电泳至0.5微克/毫升的终浓度为1小时，在100至五分离前。凝胶被暴露在紫外线和凝胶文件系统所采取的图片。