JoVE Journal > Immunology and Infection
概要
Abstract
Protocol
Discussion
開示
Acknowledgements
Materials
参考文献
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
免疫学と感染

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

Published: February 21, 2012
doi:
10.3791/3894
, , , , ,
1Microbiology and Pathogenesis Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases,Centers for Disease Control and Prevention, 2Tick-Borne Diseases Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases,Centers for Disease Control and Prevention

概要

אוסף של hemolymph לתקתק נגוע, בלוטות הרוק, ורוק חשוב ללמוד איך לתקתק נישאים פתוגנים לגרום למחלה. בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לאסוף את בלוטות הרוק hemolymph ו מ האכלה<em> קרצית scapularis</em> נימפות. כמו כן, אנו מראים אוסף הרוק הנשי מ<em> א scapularis</em> מבוגרים.

Abstract

קרציות נמצאות ברחבי העולם ליסר בני האדם עם קרצייה שמקורן מחלות רבות. קרציות הן וקטורים של פתוגנים הגורמים מחלת ליים וקרציות נישאים חום ההתקפי (Borrelia spp.), Rocky Mountain חום מנוקד (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis וא 'שוה), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), דלקת קרום המוח (קרציות וירוס דלקת המוח נישאים), babesiosis (Babesia spp.), קדחת קרציות קולורדו (Coltivirus), ו tularemia (Francisella tularensis) 1-8. כדי להיות מועבר כראוי לתוך המארח אלה גורמים מזהמים דיפרנציאלי לווסת את ביטוי הגנים, אינטראקציה עם חלבונים שנתות, ולהעביר דרך קרציות 3,9-13. כך, למשל, סוכן מחלת ליים, Borrelia burgdorferi, מתאים את עצמו דרך ביטוי גנים ההפרש לשלבים חג ורעב של מחזור enzootic של טיק 14,15. יתר על כן, כמו קרצייה קרצית צורכתbloodmeal Borrelia לשכפל לעבור מ midgut אל hemocoel, הם נוסעים בלוטות הרוק, והם מועברים אל המחשב המארח עם הרוק גורשו 9,16-19.

כמו קרציה הזנות מארח בדרך כלל מגיב בתגובה חיסונית חזקה עוצר דמום ובסיסיות 11,13,20-22. למרות תגובות אלה המארחות, י scapularis יכול להאכיל במשך כמה ימים, כי הרוק מכיל לתקתק חלבונים המערכת החיסונית, סוכני ממס, תרופות נגד קרישת דם, ו fibrinolysins כדי לסייע לתקתק האכלה 3,11,20,21,23. את פעילות המערכת החיסונית שבידי רוק לתקתק או תמצית בלוטת הרוק (SGE) להקל, העברת התרבות, והפצה של טיק שמקורן פתוגנים רבים 3,20,24-27. כדי להמשיך להבין כיצד לתקתק נישאים גורמים מזהמים גורמים למחלות חשוב לנתח באופן פעיל האכלה קרציות ולאסוף רוק לתקתק. זה פרוטוקול וידאו מדגים טכניקות הנתיחה עבוראוסף של hemolymph והסרת בלוטות הרוק של פעיל להאכיל א נימפות scapularis לאחר 48 ו – 72 שעות מיקום העכבר הודעה. כמו כן, אנו מראים אוסף הרוק מן הנקבה הבוגרת הראשונה scapularis לתקתק.

Protocol

1. Hemolymph אוסף להכנת שקופיות (סרט 1) הוצא בעדינות פעיל קרציות האכלה של בעל חיים ומניחים מי חמצן 3% מימן אקטואלי במשך 5 דקות ואז באתנול 70% במשך 10 דקות לפני השטח לעקר. <li style=";text-align:right;direc…

Discussion

אוסף של hemolymph לתקתק, בלוטות הרוק, ורוק חשוב במחקר של שידור-Tick נישאים הפתוגן, שכיחות ההפצה, התפשטות, והתמדה לתקתק וגם מארח 6,11-13,20,23,29. ישנן מספר דרכים לנתח לתקתק 30,31. עם זאת, כאשר איסוף בלוטות הרוק חיוני לנתח לתקתק כמו שצריך אז בלוטות הרוק לא נקרע או אבד שרידים ש…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

המחברים מבקשים להודות חלוקת וקטור נישאים סניף מחלות בעלי חיים משאבים, במיוחד אנדראה פטרסון, ליסה Massoudi, ורנה או 'בראיין, וג'ון לידל עבור הטיפול בהם ותחזוקה של עכברים וארנבים. אנו רוצים גם להודות איימי אולמן, תרזה ראסל, ברברה ג''ונסון על תרומתם כלפי כתב היד הזה. לבסוף, ברצוננו להודות אליסה אקרט במשרד של מנהל שותף של תקשורת ב-CDC להפקת איורים גרפיים וג'ודי Lavelle על בימוי בכל העניינים המשפטיים הקשורים הצילומים של כתב היד הזה.

Materials

Reagent Company Catalogue Number
Hydrogen peroxide Fisher H312-500
Ethanol Acros 61509-5000
PBS Boston Bioproducts BM-2205
Dumont Fine forceps (3C) Fisher NC9906085
Silane treated microscope slides Bioworld 42763007-1
Pap pen Bioworld 21750008-1
Super frost plus microscope slides Fisher 12-550-18
Pilocarpine Sigma P6503-5G
Protease inhibitor cocktail Sigma P2714
#11 disposable scalpel Feather 2975#11
Nontoxic modeling clay Fisher S17307
Capillary tubes Chase scientific Glass, inc 40A502
DOWNLOAD MATERIALS LIST

参考文献

  1. Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. What’s eating you? Hyalomma ticks. Cutis. 87, 165-167 (2011).
  2. Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. Tick-borne illnesses: a CME update. Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).
  3. Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. Vector-host interactions in disease transmission. J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).
  4. Estrada-Pena, A., Jongejan, F. Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission. Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).
  5. Nuttall, P. A. Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus. Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).
  6. Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. Enhancement of virus transmission by tick salivary glands. J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).
  7. Labuda, M., Nuttall, P. A. Tick-borne viruses. Parasitol. 129, 221-245 (2004).
  8. Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. Update on tick-borne bacterial diseases in Europe. Parasite. 16, 259-273 (2009).
  9. Zhang, L., et al. Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph. PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).
  10. Piesman, J., Schneider, B. S. Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks. Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).
  11. Brossard, M., Wikel, S. K. Tick immunobiology. Parasitol. , S161-S176 (2004).
  12. Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo. Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).
  13. Nuttall, P. A., Labuda, M. Tick-host interactions: saliva-activated transmission. Parasitol. 129, 177-189 (2004).
  14. Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host. FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).
  15. Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis. Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).
  16. Dunham-Ems, S. M., et al. Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks. Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).
  17. Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae). J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).
  18. Piesman, J. Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi. Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).
  19. De Silva, A. M., Fikrig, E. Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding. Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).
  20. Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks. Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).
  21. Brossard, M., Wikel, S. K. Immunology of interactions between ticks and hosts. Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).
  22. Wikel, S. K. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission. Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).
  23. Binnington, K. C., Kemp, D. H. Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission. Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).
  24. Guo, X., et al. Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins. Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).
  25. Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils. Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).
  26. Lima, C. M., et al. Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut. J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).
  27. Severinova, J., et al. Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice. Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).
  28. Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts. Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).
  29. Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut. J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).
  30. Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a “How-to” pictorial dissection guide. Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).
  31. Ledin, K. E., et al. Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum. Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).
  32. Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?. Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).
  33. Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods. J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).
  34. Burgdorfer, W. Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks. Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).

タグ

SalivaSalivary GlandHemolymph CollectionIxodes Scapularis TicksTick-borne IllnessesLyme DiseaseTick-borne Relapsing FeverRocky Mountain Spotted FeverEhrlichiosisAnaplasmosisEncephalitisBabesiosisColorado Tick FeverTularemiaBorrelia Spp.Rickettsia RickettsiiEhrlichia ChaffeensisE. EquiAnaplasma PhagocytophilumTick-borne Encephalitis VirusBabesia Spp.ColtivirusFrancisella TularensisGene Expression RegulationTick Proteins InteractionTick MigrationBorrelia BurgdorferiEnzootic CycleHemostatic ResponseInnate Immune ResponseTick Saliva Proteins

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
記事を引用
Patton, T. G., Dietrich, G., Brandt, K., Dolan, M. C., Piesman, J., Gilmore Jr., R. D. Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks. J. Vis. Exp. (60), e3894, doi:10.3791/3894 (2012).
引用ダウンロード
転載と許可

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image