累进比率响应小鼠可口的高脂肪和高糖食品

*最重要的步骤。 1。设备和软件配备两个超轻型的，可伸缩的一侧或食物盛器（ 见表1）定位杆1鼠标操作性商会进行了训练和测试。位于上述各杠杆刺激光，并在笼子的顶部有一个房子光。颗粒机是位于外室。每个分庭内的换气扇声音衰减的房间内。钱伯斯是连接与MedPC四，软件到PC计算机上通过的“智能控制”界面内阁。 注：当超轻型杠杆不可，建议鼻子戳用于小鼠研究的操作性响应。然而，有两个可供选择，我们建议选择更可靠的鼻子戳反应可以作为一个动机措施超轻杠杆é引发探索嗅探。 用于运行操作性任务MedPC方案都写在Medstate符号代码，用户可以了解编程手册提供的帮助。编程为用户提供灵活性，修改现有的代码，或产生独特的实验参数。某些代码可以得到免费从医学协会“Medstate符号库” http://www.mednr.com 。从医学协会可以购买额外的代码。 2。鼠标驯化和食品的限制抵达后小鼠组安置至少10天12小时的反向光/暗周期，以适应环境，并提供标准饲料和水的随意访问。在我们的例子中，我们用成年C57BL / 6小鼠从查尔斯河（圣常，质量控制）购买。所有的鼠标操作和行为实验是​​在黑暗的周期。所有亲涉及使用动物的cedures由CRCHUM动物保健委员会批准。 小鼠随后被单独安置和食物限制（他们每天的食物摄入量的70％），直到他们达到90-95％，饲养体重，以便收购杠杆记者回应。小鼠在家里笼提供会话终止后，他们每天的食品配额。达到5-10％的体重损失后，每天的食物分配进行调整，以稳定为低体重训练期间的剩余。一旦小鼠已达到收购标准（见下文），他们随意喂养时间表。老鼠恢复失去体重约3-4天。 小鼠在试验室进行处理的第一堂训练课之前连续3天。 10-15高脂肪和高糖（HFHS）颗粒进入家庭笼放置，以防止对食物恐新症对操作性performan潜在影响训练开始的前一天CE。我们使用20毫克HFHS，无尘，精密的食物颗粒（14毫克，也可）含48.9％千卡脂肪（生物SERV，Frenchtown，新泽西州）。 3。操作性训练最初的训练小鼠按一个固定比率（FR）-1加固进度，即单杆按下插座引出的食物颗粒交货的杠杆。只有一杆被指定为“主动”（触发运送食物奖励）和左，右杠杆分配之间的小鼠抵消。重要的是，添加至少5秒超时（TO）FR1号的时间表（FR1/TO-5），在此期间，额外的杠杆按不会导致交货的食物颗粒。这个期限，使小鼠的时间消耗的食物颗粒，但是更长的时间超时如果实验者认为它是必要的小鼠模型，可以使用。每个FR培训会议持续1小时或50颗粒时已交付。 *收购标准：</ STRONG>用于确定收购粮食保持响应操作性的标准包括：（1）赚取的积极响应和奖励的最低数量;（2）（3）的活动和非活动的杠杆之间的歧视措施，并与会议性能稳定。小鼠表现出主动与非杠杆≥3:1的歧视，并取得了连续三届会议≥20％奖励被视为实现收购标准10。我们已经指出，C57BL6小鼠的大部分（75％）需要约7-10天的培训，以达到收购标准。小鼠，没有达到通过这次收购标准，接受进一步的训练额外的5-7天。我们排除测试（〜5％的情况下）小鼠时，有没有额外的第5个训练日的进度。重要的是要牢记操作性收购受损可能是某些药物和遗传干预的结果，因此，应记录。</ LI> 继连续三年获得≥20颗粒会议，日程安排增加活跃的5杆印刷机引发的粮食颗粒交货FR5/TO-5秒。培训的FR5日程上持续了三天。 小鼠，然后训练累进比率（PR）加固进度。理查德森和Roberts（1996）11％计算公关测试过程中的响应比时间表可以使用下列公式计算（四舍五入到最接近的整数）： = [5 E（R * 0.2）] – 5 其中 R等于已经获得食物奖励加1号（即下增强剂）。因此，需要获得食物奖励，按照订单的响应：1，2，4，6，9，12，15，20，25，32，40，50，62，77，95等。最终完成的比例是断点。 公关会议最多持续1小时。未能在任何10分钟终止在会议期间按杠杆。 perfor钢筋公关时间表曼斯被认为是稳定时，奖励的数量获得了至少连续3天≤10％，在1个小时的会议偏离。 4。进的比测试和验证为了验证食品保持操作性响应公关任务，可以评估断点响应以下操作，以调节食物奖励。一个相对简单的测试，开展粮食匮乏，这将增加食品鼠标的动机状态，从而增加断点。老鼠必须先进行测试期间随意喂养期间，直到实现稳定，性能基线的公关任务。最后的“基线”一天的食物后，一天从家里笼和老鼠，然后在24小时后开始快速测试的公关任务。 我们还调查了抑制食欲的荷尔蒙leptin的外设管理是否会有相反的效果上断点阈值。瘦素（AF Parlow，国家激素和肽计划，NIDDK）溶解在无菌PBS。公关测试进行的PBS在一天的IP注射，然后注射瘦素（5毫克/公斤）的翌日。瘦素注射前一小时公关测试。断点比较采用配对t检验（GraphPad棱镜）。 5。代表结果测试时，粮食匮乏的能力，以调节断点上一个加固的公关日程响应，我们期望显着增加，如在图1所示的断点。 24小时的食物匮乏的时期，在这个实验中产生的中断点〜3.6倍的增长相比，那些在自由摄食基线从而表明缺粮增加食物的奖赏效应的状态得到。相比之下，外设管理，厌食激素瘦素（5毫克/公斤，IP）前一小时到Testing应减少断点响应如图2所示。 图1。空腹增加食物的奖赏效应。 24 h快速显着增加了一个渐进的比率（PR）的增强小鼠的时间表（N = 4）断点。平均值±标准差; * P <.05。 图2。瘦素的小鼠减少食物奖励。在小鼠（n = 4时），外周血瘦素管理（5毫克/公斤）下降公关断点响应阈值。平均值±标准差; * P <0.05。