وتلقيح<em> المثقبية الكروزية</em> في البيض الخصبة قبل الحضانة يجعل kDNA طفيلي minicircle التكامل في جينوم خلايا الجنين. تهجين يكشف عن نقل عمودي من الطفرات إلى ذرية. وkDNA يدمج الترميز مناطق عدة في الصبغيات (الكروموسومات) والدجاجة تموت مع مرض القلب الذاتية للالتهابات.
والكروزية الالتهابات الحادة المثقبية المكتسبة في سن الرضاعة والطفولة تبدو أعراض، ولكن ما يقرب من ثلث الحالات المصابة بشكل مزمن تظهر داء شاغاس تصل إلى ثلاثة عقود أو في وقت لاحق. المناعة الذاتية والمثابرة طفيلي تتنافس النظريات لتفسير الآلية المرضية لداء شاغاس 1 و 2. إلى أدوار منفصلة لعبت من قبل استمرار طفيلي والمناعة الذاتية في مرض شاغاس نحن تطعيم في T. الكروزية في غرفة الهواء من البويضات المخصبة. النظام المناعي الدجاج ناضج هو حاجز ضيق البيولوجية ضد ت. يتم القضاء على الكروزية والعدوى وعلى تطوير نظام المناعة في نهاية الأسبوع الأول من نمو 3. الكتاكيت هي خالية من طفيلي عند الفقس، ولكنها تحتفظ دمجها طفيلي الميتوكوندريا kinetoplast الحمض النووي (kDNA) minicircle ضمن الجينوم الخاصة بهم التي يتم نقلها إلى ذريتها. تم الحصول على وثائق من التكامل kDNA minicircle في جينوم الدجاج من قبل targeted رئيس الذيل PCR، التهجين الجنوبية، والاستنساخ، والتسلسل 3 و 4. وkDNA minicircle التكامل تمزق الإطارات القراءة مفتوحة للنسخ والعوامل الجهاز المناعي، والفوسفاتيز (GTPase)، محلقة الأدينيلات وphosphorylases (بي كي سي، NF-B كابا المنشط، PI-3K) المرتبطة فسيولوجيا الخلية، والنمو، والتمايز 3، 5 – 7 وظائف الجينات الأخرى. ويعتبر التهاب عضلة القلب شديدة بسبب الرفض من ألياف قلب الهدف بواسطة الخلايا اللمفية المستجيبات السامة للخلايا في الدجاج kDNA تحور، مبديا التهابات عضلة القلب شبيهة بتلك التي شوهدت في مرض شاغاس الإنسان. وجدير بالذكر أن فشل القلب والهيكل العظمي وضعف العضلات موجودة في الدجاج الكبار مع تمزق kDNA من الجين dystrophin في كروموسوم 1 8. وترتبط التعديلات genotipic مماثلة مع تدمير الأنسجة التي تقوم بها المستجيبات CD45 +، + CD8γδ، CD8α الخلايا اللمفية. وبالتالي يمكن لهذه العدوى الأوالي حمل أمراض المناعة الذاتية يحركها وراثيا.
وعلى النقيض من الثدييات عرضة لمدى الحياة ت. التهابات الكروزية، دجاجة وهي لصهر إلى T. الكروزية عدوى. والميزة الرئيسية لنظام الدجاج النموذج هو القضاء على هذا المرض في وقت مبكر في تطوير الجهاز المناعي الجنينية. وبالتالي، تم دمج الحمض النووي طفيلي الوحيدة المتبقية داخل الجسم الدجاج في مواضع عدة.
استخدم كمية الأمثل للT. ضراوة الكروزية trypomastigotes لتطعيم البيضة الخصبة هو خطوة حاسمة نحو الحصول على التكامل بين minicircles kDNA في الدجاج جينوم الجنين. معدل فقس بيض الدجاج الحي من تلقيح مع 100 trypomastigotes هو أربعة أضعاف أعلى من تلك التي تم الحصول عليها مع 500 الطفيليات. ينبغي الحرص على تطعيم تعليق طفيليات في 10 ميكرولتر من مستنبت داخل البويضة غرفة الهواء. وينبغي أن يكون هناك أي تسرب من بياض البيض. في الظروف المثالية، وإصابة الخلايا الطفيلية يأخذ واي مكانرقيق بعد بضع ساعات من الضرب وحضانة طفيلي داخل الخلايا المضيفة العائدات لمدة أسبوع، بعد ذلك يتم التخلص من العدوى من المناعة الفطرية. التكامل kDNA يتطلب عدوى المعيشة، وتلقيح minicircles عارية في وقت مبكر بيض الدجاج الجنين لا يؤدي إلى التكامل. وينبغي أن يضم الأجنة kDNA إيجابية والضوابط تحت ظروف خاضعة للرقابة على 37،5 درجة مئوية والرطوبة 65٪. يتم الاحتفاظ في أقفاص الدجاج لمدة أسبوعين عند 33 درجة مئوية درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك يتم الاحتفاظ بها في أقفاص الدجاج على رفوف معلقة فصل بمقدار 1.5 متر في عرض الممرات غرفة في 22 درجة مئوية مع الهواء التي تمت تصفيتها وتحت ضغط إيجابي استنفاد مستمر لتأمين ظروف رعاية الحيوان. ويتم تغذية الكبار الدجاج طعام والشراب شرب المياه الجارية لتحقيق النمو والنضج الكامل، وضع البيض في خمسة أشهر من العمر. صيانة الإجراءات الصحية ضرورية لاستنساخ نتائج عند العمل مع ت. الكروزية تلقيحفي بيض الدجاج الخصبة.
في الدجاج نظام النموذج T. يتم القضاء على العدوى الكروزية بعد تطوير نظام المناعة في الفترة المبكرة من نمو الجنين. وبالإضافة إلى ذلك إلى كونها خالية من العدوى، والدجاج الذي يفقس من T. الكروزية تلقيح البيض، في عدم وجود أجسام مضادة محددة، ومتسامحون للمستضدات الطفيلي. ويعتبر رفض خلايا القلب الهدف بواسطة الخلايا اللمفية السامة للخلايا (الحد الأدنى من وحدة الرفض، الشكل 3) في دجاجة kDNA-تحور تظهر التعديلات التركيب الوراثي وانهيار المراقبة المناعية 3. وتعديل genotypically الخلايا التائية رفض تقديم المتسارع للأنسجة النفس في الجسم. الموقع آفة الرئيسي هو القلب، والذي هو السمة المميزة لمرض شاغاس. ويعتبر الممر من الفسيولوجية (المراقبة) لدولة فيزيوباثي في الدجاج kDNA-تحور تظهر clonally انتشار الخلايا اللمفية السامة للخلايا 3.
تينظام له نموذج transkingdom يظهر الطفيلي التي يسببها، وراثيا يحركها أمراض المناعة الذاتية (الشكل 6)، الناجمة عن التعديلات الوراثية التي ت. الكروزية kDNA minicircle التكامل. لا ينظر إلى هذه التعديلات في الكتاكيت فقس البيض من رطل تلقيح.
هذه الظاهرة تشير إلى أن علاجا تجريبيا من اعتلال عضلة القلب والتهابات المناعة الذاتية في kDNA-تحور الدجاج قد تتطلب قمع المخدرات من السلف نخاع العظم من النمط الظاهري تي خلية محددة التسلل الى عضلة القلب، وزرع نخاع العظم متوافق نسيجيا صحي لمنع رفض الأنسجة الذاتي.
The authors have nothing to disclose.
نحن مدينون لنانسي ر. شتورم، قسم علم المناعة، علم الأحياء الدقيقة والبيولوجيا الجزيئية، وديفيد جيفن في كلية الطب، جامعة كاليفورنيا في لوس انجليس، لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد المجلس الوطني للبحوث، CNPq، ومؤسسة البحوث للتنمية، FAPDF، والبرازيل، والدراسة. نشكر المساعدات الفنية من اليساندرو O. سوزا، ماريا Guimaro جيم، كورديرو سيرو، آنا دي روزا كاسيا، ألفيس Roseneide، واندرادي رافائيل، من جامعة برازيليا، البرازيل.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | コメント |
Taq DNA Polymerase Recombinant | Invitrogen | 11615-010 | |
Platinum Taq DNA Polymerase | Invitrogen | 10966-030 | |
Random Primers DNA Labeling System | Invitrogen | 18187-013 | |
EcoRI | Invitrogen | 15202-021 | |
MboI | Invitrogen | 15248-016 | |
dNTP Set, 100mM Solutions | GE Healthcare | 28-4065-51 | |
Amersham Hybond – N+ -– Cat n. | GE Healthcare | RPN303B | |
PlasmidPrep Mini Spin kit | GE Healthcare | 28-9042-70 | |
NsiI | SIGMA -ALDRICH | R5884 1KU | |
DNA, Sodium Salt Fish Sperm | AMRESCO | 0644-10G | |
Mouse anti-chicken Bu-1b | SouthernBiotech | 8370-02 | |
Mouse anti-chicken CD45 | SouthernBiotech | 8270-08 | |
Mouse anti-chicken TCRγδ | SouthernBiotech | 8230-08 | |
Mouse anti-chicken CD8α | SouthernBiotech | 9220-02 | |
Mouse anti-chicken monocyte/macrophage | SouthernBiotech | 8420-02 | |
MyCycle Termocycler | Bio-Rad Laboratories | 580BR 5501 |