ChR2 ifade Yetişkin doğmuş nöronlar, koku alma nöral devrelerin işlevini doğru katkıları incelemek amacıyla dilim elektrofizyolojik hazırlıkları manipüle edilebilir.
Abstract
Standart dilim elektrofizyoloji araştırmacılar, elektrik veya farmakolojik manipülasyonlar 1,2 yanıt olarak tek hücre elektriksel yanıtlar kayıt sinir devresi bileşenleri tek tek prob izin verdi . Genetik hedef nöronların (optogenetics) optik kontrol etmek için yöntemler icat sayesinde, araştırmacılar standart bir dilim hazırlık nöronların belirli gruplar üzerinde kontrol görülmemiş bir düzeye sahiptir. Özellikle, araştırmacılar ışık 3,4 nöron aktif hale getirmek için channelrhodopsin-2 (ChR2) ışığa sağlar. LED tabanlı standart dilim elektrofizyoloji ChR2 photostimulation dikkatli kalibrasyon birleştirerek, daha fazla ayrıntı, koku alma ampul, koku alma sisteminin ilk merkezi röle yetişkin doğumlu internöronlar rolü prob. Özellikle yetişkin doğumlu nöronlar ChR2-YFP viral bir ifade kullanarak, biz seçici eski bir ortamda genç bir yetişkin doğumlu nöronlar kontrol edebilirsinizd olgun nöronlar. Optik kontrol, basit ve ucuz bir LED sistemi kullanır ve bu sistem çok fazla ışık, tek nöronların faaliyet spike uyandırmak için gerekli olan anlamak için nasıl kalibre göstermektedir. Bu nedenle, kısa mavi ışık yanıp söner uzaktan ChR2 transduced yeni doğan hücrelerin ateşleme düzenini kontrol edebilirsiniz.
Protocol
1. Optik Kalibrasyon: Ölçme LED Güç LED dizisi aktif için bir fan ve yapıştırmayın bu LED / soğutucu aparat collimating objektif ile soğutulan bir soğutucu takın. Aydınlık aydınlatma lambası kullanılan LED / soğutucu / fan / lens cihazları ile değiştirin. Bu cihaz dikkatle paralelleştirilmiş LED ışını düz bir optik yoğunlaştırıcı lens doğru yol boyunca hareket şekilde yerleştirilmesi gerekir. Soğutucu / fan sisteminin ortak bir zemin düzgün topraklanmış oldu…
Discussion
Son yıllarda popülaritesi sinirbilim araştırması, 6 optogenetic araçları bir patlama gördük. Sonuç olarak, bu yeni araçları kullanmaya başlamak isteyen laboratuarlar için giriş bariyer düşürmek için giderek daha önemli. İşte biz bu channelrhodopsin ifade nöronlar tam alan optik stimülasyonu yapabilirsiniz böylece geleneksel bir yama klemp kulesi basit ve düşük maliyetli güçlendirme ve kalibrasyon yapmak için nasıl açıklar. Özellikle, biz, özellikle ışık ile yeni doğan n…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, hayat sigortası şirketi "AG2R-La Mondiale" Ecole des Nörobilim de Paris (AKP), Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-NEUR-004", "ERA-NET NÖRON çerçevesinde tarafından desteklenen "Avrupa Komisyonu, ve Pasteur Vakfı tarafından FP7 programı. Sebastien Wagner Letten Vakfı tarafından desteklenmiştir.
Valley, M., Wagner, S., Gallarda, B. W., Lledo, P. Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons. J. Vis. Exp. (57), e3379, doi:10.3791/3379 (2011).