Volwassen geboren neuronen die ChR2 kunnen worden gemanipuleerd in slice elektrofysiologische voorbereidingen om hun bijdrage aan de functie van olfactorische neurale circuits te onderzoeken.
Standaard slice elektrofysiologie heeft toegestaan onderzoekers om afzonderlijke componenten van neurale circuits sonde door het opnemen van elektrische reacties van enkele cellen in reactie op elektrische of farmacologische manipulaties 1,2. Met de uitvinding van de methoden om optisch controle genetisch gerichte neuronen (optogenetics), onderzoekers hebben nu een ongekend niveau van controle over de specifieke groepen van neuronen in de standaard slice voorbereiding. In het bijzonder lichtgevoelige channelrhodopsin-2 (ChR2) stelt onderzoekers in staat om neuronen te activeren met licht 3,4. Door het combineren van een zorgvuldige kalibratie van LED-gebaseerde fotostimulering van ChR2 met standaard slice elektrofysiologie, we zijn in staat om probe met meer detail de rol van de volwassen geboren interneuronen in de bulbus olfactorius, de eerste centrale relais van de olfactorische systeem. Met behulp van virale uiting van ChR2-YFP specifiek in volwassen geboren neuronen, kunnen we selectief jonge volwassene geboren neuronen in een milieu van ouderen eend volwassen neuronen. Onze optische controle maakt gebruik van een eenvoudige en goedkope LED-systeem, en laten we zien hoe dit systeem kan worden gekalibreerd om te begrijpen hoe veel licht nodig is om op te roepen stekelige activiteit in enkele neuronen. Vandaar dat korte flitsen van blauw licht op afstand het afvuren patroon van ChR2-getransduceerde pasgeboren cellen.
De laatste jaren een explosie in de populariteit van optogenetic tools voor neurowetenschappelijk onderzoek 6. Als gevolg hiervan, wordt het steeds belangrijker het verlagen van de drempel van binnenkomst voor laboratoria die willen beginnen met het gebruik van deze nieuwe hulpmiddelen. Hier beschrijven we hoe u een eenvoudige en goedkope aanpassingen en het kalibreren van een conventionele patch-clamp tuig gedrag, zodat het kan full-field optische stimulatie van channelrhodopsin-expressie neuronen doen. In h…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door het leven verzekeringsmaatschappij "AG2R-La Mondiale-" Ecole des Neurowetenschappen de Paris (ENB), het Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-neur-004" in het kader van "ERA-NET NEURON "van KP7 programma door de Europese Commissie, en het Pasteur Foundation. Sebastien Wagner werd gesteund door de Letten Foundation.
Material | タイプ | Company | Catalogue No. |
Ketamine | 100 mg/ml | Imalgène 1000 | |
Xylazine | 2% | Rompun | |
NaCl | &nbps; | Sigma | S5886 |
KCl | Sigma | P5405 | |
MgSO4 | Sigma | M1880 | |
NaHCO3 | Sigma | S5761 | |
NaHPO4 | Sigma | S5011 | |
Glucose | Sigma | G7021 | |
CaCl2 | Sigma | C7902 | |
Agarose | Sigma | A9539 | |
Pipette Puller | P-97 | Sutter | |
Glass Capillaries | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. | Harvard Apparatus | GC150T-10 |
LED array | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
Collimating lens | 40 mm beam diameter | Thor Labs | LEDC1 |
Power supply | 2.8 amp | A1W Electronik | HKO2800 |
Optical power meter | Thor Labs | PM 100 | |
Heatsink | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
Fan | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
Vibratome | Leica | VT1200S |