Une façon simple de mesurer la sensibilité d'éthanol dans les mouches
概要
Un test simple pour mesurer les effets sédatifs de l'éthanol sur<em> Drosophile</em> Mouches, fondée sur la perte du réflexe de redressement, est décrite.
Abstract
De faibles doses d'éthanol provoquer des mouches pour devenir hyperactif, tandis que des doses élevées sont sédatifs. La sensibilité à l'éthanol induit une sédation d'une souche donnée volée est corrélée avec la préférence d'éthanol que la souche S, et donc la sédation est une mesure très pertinente pour étudier la génétique des réponses d'alcool et de boire. Nous démontrons un moyen simple d'exposer des mouches à l'éthanol et mesurer ses effets enivrants. Le test que nous décrivons peut déterminer la sensibilité aiguë, ainsi que la tolérance éthanol induite par une exposition répétée. Il ne nécessite pas une configuration technique impliqués, et peuvent donc être appliquées dans n'importe quel laboratoire avec les outils de base de la culture voler.
Protocol
Discussion
Dans cette présentation, nous avons défini une méthode simple pour déterminer l'éthanol intoxication volontaire basée sur des essais antérieurs décrits par Bainton et al. 2000 1, et Rothenfluh et al. 2006 2. Puisque l'alcool sédation induite est corrélé avec la préférence boire de l'alcool 3, ce test est pertinent pour l'étude des troubles liés à l'alcool. Le test décrit est basé sur sursaut induite géotaxie négative, et comment une exposition à l'alcool interfère avec cette réponse innée. Avant de commencer l'exposition, vérifiez que tous vos mouches montrent une réaction normale à un tel sursaut, c'est à dire après avoir appuyé sur le bas les mouches dans le flacon alimentaires, ils devraient tous passer du fond dans un délai de 10 secondes d'observation. Exemples de mouches ayant réduit géotaxie négatifs comprennent la saisie des mutants sensibles bang-5, et la locomotion déficientes mouches causée par la dégénérescence des neurones dopaminergiques 6.
Même si le dosage décrit est relativement simple, deux variables méritent le plus d'attention afin d'assurer des résultats reproductibles. D'abord, tous les flacons de l'exposition devrait être le même volume. Cela comprend en s'assurant que le fond du flacon contenant le même volume de nourriture + flacon Plug / coton balle, ainsi que d'insérer la fiche contenant de l'éthanol à la même distance pour chaque flacon. Un flacon complètement vide peut être utilisé pour ce test, mais elle conduit à des valeurs plus ST50, en diminuant le débit de l'essai.
Ce test est également approprié pour déterminer la quantité de mouches de tolérance se développer après exposition à l'éthanol répéter. Un certain nombre de variables doivent être considérés lorsque vous faites des expositions répétées. Tout d'abord, l'intervalle entre l'exposition est ici décrit comme 4 heures. Cette variable peut être changé, mais nous recommandons de ne pas être inférieure à 2 heures, pour assurer un dégagement d'éthanol à partir de la première exposition. Voir Scholz et al. 2000 4 pour la cinétique de développement tolérance à l'éthanol et de décadence. La seconde variable à considérer est la durée de la première exposition. Ceci a évidemment être le même pour le contrôle et les mouches expérimental. Toutefois, cela peut ne pas aboutir à la même quantité d'éthanol livré à ces deux souches voler. Mouches Sedated absorber plus d'éthanol que les mouches actif 2, donc une souche qui endort tôt peuvent recevoir une dose supérieure à une souche plus tard, sédatifs, et ainsi développer plus de tolérance en raison d'une dose initiale plus élevée. Nous fermement en garde le lecteur lorsque l'on compare le développement de souches de la tolérance qui montrent des différences dans le ST50 initiale (1).
Le test que nous décrivons ici est un outil utile pour facilement et de façon reproductible la détermination des réponses comportementales des mouches à l'alcool.
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions Aylin Rodan pour la lecture critique du manuscrit, et des membres du laboratoire de discussion utile. Cette recherche est soutenue par le NIH, R01AA019526.
Materials
| Material Name | タイプ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Exposure vials | www.flystuff.com | 32-116 | ||
| Plugs | www.flystuff.com | 49-102 | ||
| Acid Blue 9 | Sigma | 861146 |
参考文献
- Bainton, R. J., Tsai, L. T. -. Y., Singh, C. S., Moore, M. S. . Curr. Biol. 10, 187-194 (2000).
- Rothenfluh, A., Threlkeld, R. J., Bainton, R. J., Tsai, L. T. -. Y. . Cell. 127, 199-211 (2006).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. . Curr. Biol. 19, 2126-2132 (2009).
- Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. S., Heberlein, U. . Neuron. 28, 261-271 (2000).
- Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, M. A., Phelan, P. . Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).
- Feany, M. B., Bender, W. W. . Nature. 404, 394-398 (2000).
