Identifizierung von Mechanismen, die Schädigung der Muskulatur ist von entscheidender Bedeutung. Hier präsentieren wir die histologische Technik zur Herstellung Paraffin eingebetteten und Gefrierschnitten von Drosophila Brustmuskeln. Dies ermöglicht die Analyse von Muskel-Morphologie und Lokalisation von Proteinen und anderen Zellbestandteilen Muskel.
Die molekulare Charakterisierung von Muskeldystrophien und Myopathien beim Menschen hat die Komplexität von Muskelerkrankungen und genetische Analyse von Muskel-Spezifikation ergaben, hat die Bildung und Funktion in Modellsystemen wertvolle Einblicke in die Muskelphysiologie zur Verfügung gestellt. Daher Identifizierung und Charakterisierung molekularer Mechanismen, die Schädigung der Muskulatur zugrunde liegen, ist von entscheidender Bedeutung. Die Struktur des erwachsenen Drosophila Multi-Faser-Muskel ähnlich Wirbeltiere quergestreiften Muskeln 1 und die genetische Lenkbarkeit von Drosophila hat es ein großes System zu dystrophischen Muskel Morphologie zu analysieren und zu charakterisieren, die Prozesse, die muskuläre Funktion bei der Alterung erwachsenen Fliegen 2. Hier präsentieren wir die histologische Technik zur Herstellung Paraffin eingebetteten und Gefrierschnitten von Drosophila Brustmuskeln. Diese Präparate können für das Gewebe mit der klassischen histologischen Färbungen gefärbt und gekennzeichnet sein mit Protein erkennen Farbstoffe, und zwar Kryoschnitten sind ideal für immunhistochemische Nachweis von Proteinen in intakten Muskeln. Dies erlaubt die Analyse von Muskelgewebe Struktur, die Identifizierung von morphologischen Defekte und Nachweis der Expression-Muster für den Muskelaufbau / Neuronen-spezifische Proteine in Drosophila erwachsenen Muskeln. Diese Techniken können auch etwas für das Schneiden von anderen Körperteilen verändert werden.
The authors have nothing to disclose.
Wir danken Prof. Eichele für die Erlaubnis, die Kryo-Mikrotom verwenden. Die Arbeit wurde von Max-Planck-Gesselschaft finanziert.
Material Name | タイプ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Stainless steel collars | self-made | Specially constructed | ||
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 11295-10 | ||
Aluminum foil | Any | |||
Blade or scalpel | Any | |||
Wheaton macro staining jar | Wheaton Science Products | 900200 | ||
Microtome | Carl Zeiss | Model: Hyrax M25 | ||
Cryo-microtome | Leica | Model CM3050S | ||
60-65°C Incubator | Any | Large enough to hold at least 4 staining jars | ||
Freezing cooler with metal block | Any | Store at -80°C | ||
Super-frost slides | Thermo Fisher Scientific | 9161155 | ||
Cover slips | Any | Recommend 24 X 40 mm | ||
Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | Analytical grade | |
Glacial acetic acid | Merck | 100063 | Analytical grade | |
Ethanol | Merck | 100983 | Analytical grade | |
Methylbenzoate | Sigma-Aldrich | M29908-500G | Analytical grade | |
Paraplast plus | Sigma-Aldrich | 76258 | Paraffin | |
Tissue-Teck O.C.T. compound | Sakura | 4583 | ||
16% formaldehyde, methanol free | Polysciences | 18814 | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5150-1L |